本文關(guān)鍵詞：兩株小鼠諾如病毒的分離與鑒定

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【摘要】：目的了解江蘇地區(qū)常用實(shí)驗(yàn)小鼠諾如病毒(murine norovirus,MNV)的感染情況及進(jìn)化特征。方法在江蘇地區(qū)抽取三個(gè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心的實(shí)驗(yàn)小鼠,采集直腸及內(nèi)容物樣本,應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)MNV ORF2特異性基因(547bp,MNV nt5104-5650)。陽性樣本經(jīng)RAW264.7細(xì)胞分離病毒,對(duì)MNV分離株的VP1基因進(jìn)行擴(kuò)增,將其連接在p EASY-Blunt載體上,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Trans1-T1感受態(tài)細(xì)胞,通過Kanamycin抗性篩選,挑取菌落進(jìn)行PCR鑒定,鑒定為陽性的克隆送檢測(cè)定其VP1基因序列,構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生進(jìn)化樹。結(jié)果共檢測(cè)小鼠直腸內(nèi)容物30份,檢出MNV陽性樣本4份,包括ICR小鼠(2/8)、BALB/c小鼠(1/12)和C57BL/6J小鼠(1/10),感染率為13.3%;RAW264.7細(xì)胞接毒盲傳三代,兩只ICR小鼠樣品接種的細(xì)胞產(chǎn)生明顯細(xì)胞病變(CPE),表現(xiàn)為細(xì)胞圓縮聚集,大部分脫落死亡,而C57BL/6J和BALB/c小鼠樣本接種RAW264.7細(xì)胞無CPE;應(yīng)用VP1特異引物經(jīng)RT-PCR檢測(cè),表現(xiàn)CPE的細(xì)胞樣本出現(xiàn)特異條帶,測(cè)序結(jié)果顯示分離到的2株MNVVP1核酸序列均為1626bp,與引物設(shè)計(jì)參考毒株S7-P2(Gen Bank登錄號(hào):AB435514)VP1基因大小相同,進(jìn)化樹圖表顯示檢測(cè)到的2株MNV屬同一獨(dú)立小分支與參考株BJ10-2062、CR4最為相近。結(jié)論此次抽檢的實(shí)驗(yàn)小鼠MNV感染率為13.3%(4/30),考慮可能在同一設(shè)施內(nèi)傳播。常用實(shí)驗(yàn)小鼠攜帶病毒的生物學(xué)意義有待進(jìn)一步研究。
【作者單位】： 南京軍區(qū)南京總醫(yī)院比較醫(yī)學(xué)科全軍實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科普與倫理教育基地全國(guó)科普教育基地;
【關(guān)鍵詞】： 諾如病毒 小鼠 病毒分離 鑒定
【基金】：中國(guó)人民解放軍南京軍區(qū)南京總醫(yī)院科學(xué)研究課題(No.2015061)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 諾如病毒(noroviruses,No Vs)屬嵌杯狀病毒科,直徑27—35 nm,病毒無囊膜[1]。No Vs是導(dǎo)致非細(xì)菌性急性胃腸炎的主要病原體,在全球范圍內(nèi)超過90%的非細(xì)菌性胃腸炎疾病的病例都是由該病毒引起[2]。除了人以外,No Vs還存在于豬、牛和實(shí)驗(yàn)小鼠中。No Vs基因組為單股正鏈RNA,長(zhǎng)度約

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1100585