本文關鍵詞：兩株小鼠諾如病毒的分離與鑒定

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【摘要】：目的了解江蘇地區(qū)常用實驗小鼠諾如病毒(murine norovirus,MNV)的感染情況及進化特征。方法在江蘇地區(qū)抽取三個實驗動物中心的實驗小鼠,采集直腸及內容物樣本,應用RT-PCR方法檢測MNV ORF2特異性基因(547bp,MNV nt5104-5650)。陽性樣本經RAW264.7細胞分離病毒,對MNV分離株的VP1基因進行擴增,將其連接在p EASY-Blunt載體上,轉化至大腸桿菌Trans1-T1感受態(tài)細胞,通過Kanamycin抗性篩選,挑取菌落進行PCR鑒定,鑒定為陽性的克隆送檢測定其VP1基因序列,構建系統(tǒng)發(fā)生進化樹。結果共檢測小鼠直腸內容物30份,檢出MNV陽性樣本4份,包括ICR小鼠(2/8)、BALB/c小鼠(1/12)和C57BL/6J小鼠(1/10),感染率為13.3%;RAW264.7細胞接毒盲傳三代,兩只ICR小鼠樣品接種的細胞產生明顯細胞病變(CPE),表現(xiàn)為細胞圓縮聚集,大部分脫落死亡,而C57BL/6J和BALB/c小鼠樣本接種RAW264.7細胞無CPE;應用VP1特異引物經RT-PCR檢測,表現(xiàn)CPE的細胞樣本出現(xiàn)特異條帶,測序結果顯示分離到的2株MNVVP1核酸序列均為1626bp,與引物設計參考毒株S7-P2(Gen Bank登錄號:AB435514)VP1基因大小相同,進化樹圖表顯示檢測到的2株MNV屬同一獨立小分支與參考株BJ10-2062、CR4最為相近。結論此次抽檢的實驗小鼠MNV感染率為13.3%(4/30),考慮可能在同一設施內傳播。常用實驗小鼠攜帶病毒的生物學意義有待進一步研究。
【作者單位】： 南京軍區(qū)南京總醫(yī)院比較醫(yī)學科全軍實驗動物科普與倫理教育基地全國科普教育基地;
【關鍵詞】： 諾如病毒 小鼠 病毒分離 鑒定
【基金】：中國人民解放軍南京軍區(qū)南京總醫(yī)院科學研究課題(No.2015061)
【分類號】：R373
【正文快照】： 諾如病毒(noroviruses,No Vs)屬嵌杯狀病毒科,直徑27—35 nm,病毒無囊膜[1]。No Vs是導致非細菌性急性胃腸炎的主要病原體,在全球范圍內超過90%的非細菌性胃腸炎疾病的病例都是由該病毒引起[2]。除了人以外,No Vs還存在于豬、牛和實驗小鼠中。No Vs基因組為單股正鏈RNA,長度約

【相似文獻】

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