本文關(guān)鍵詞：類(lèi)鼻疽伯克霍爾德菌BPSL1549基因敲除株的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建類(lèi)鼻疽菌BPSL1549基因敲除株[BP(△BPSL1549)],建立有效的類(lèi)鼻疽菌毒力基因敲除平臺(tái)。方法設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增類(lèi)鼻疽菌BPSL1549基因上下游同源臂,連接至p K18mob Sac B自殺質(zhì)粒上,通過(guò)大腸桿菌S17-1λpir以接合方式將其轉(zhuǎn)入類(lèi)鼻疽菌中。利用同源重組原理替換野生株中的BPSL1549基因,經(jīng)過(guò)蔗糖篩選靶標(biāo)基因敲除株,并采用PCR、Western blot檢測(cè)方法鑒定敲除株,利用動(dòng)物模型評(píng)價(jià)敲除株表型變化。結(jié)果 BP(△BPSL1549)菌株與野生株的BPSL1549基因兩側(cè)同源臂片段PCR產(chǎn)物相比缺少600 bp,Western blot檢測(cè)敲除株不表達(dá)BPSL1549基因編碼蛋白,成功構(gòu)建類(lèi)鼻疽菌BPSL1549基因敲除株。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)敲除株相比野生株毒力顯著降低(P0.05)。結(jié)論利用同源重組原理成功構(gòu)建類(lèi)鼻疽菌BPSL1549基因敲除株,完善了類(lèi)鼻疽菌敲除平臺(tái)和評(píng)價(jià)體系。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系臨床微生物及免疫學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 類(lèi)鼻疽伯克霍爾德菌 基因敲除 BPSL基因
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81471914)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R378
【正文快照】： 臨床微生物及免疫學(xué)教研室)Supported by the General Program of National Natural Science Foundation of China(81471914).Corresponding author:Mao Xuhu,E-mail:maoxh2012@hotmail.com類(lèi)鼻疽伯克霍爾德菌(Burkholderia pseudomallei,BP)簡(jiǎn)稱(chēng)類(lèi)鼻疽菌,是一種革蘭陰性球桿

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本文編號(hào)：1100233