發(fā)布時間：2017-10-22 13:24

  本文關(guān)鍵詞：人Izumo4和Tssk6 cDNA的重組及其多克隆抗體的制備

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【摘要】：目的研究Izumo4和Tssk6在精卵融合中的相互作用。方法根據(jù)世界衛(wèi)生組織標(biāo)準(zhǔn)選取的正常精液標(biāo)本取自內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心。SPF級昆明種小鼠5只,雄性,4~6周齡,體質(zhì)量18~22 g。利用精液提取RNA,克隆人類Izumo4和Tssk6的c DNA序列,原核表達(dá),通過重組質(zhì)粒p MD-Izumo4、重組質(zhì)粒p MD-Tssk6轉(zhuǎn)染BL21(DE3)感受態(tài)菌制備HIS-Izumo4和HIS-Tssk6;然后通過小鼠腹腔制備小鼠抗人Izumo4和Tssk6腹水多克隆抗體。結(jié)果提取的人精子RNA在260 nm光密度值與280 nm光密度值比值為1.86、1.87,提取物無蛋白和雜質(zhì)�？寺〕稣_的Izumo4和Tssk6 c DNA序列的p MD-Izumo4和p MD-Tssk6重組質(zhì)粒。p ET-Izumo4和p ET-Tssk6重組載體在E.coli BL21(DE3)中復(fù)制,表達(dá)HIS-Izumo4和HIS-Tssk6融合蛋白,其相對分子質(zhì)量分別位于35 000~45 000、45 000~55 000。2次切膠后,獲得較純的HIS-Izumo4/Tssk6融合蛋白。通過小鼠腹腔免疫,獲得可以識別人內(nèi)源性Izumo4和Tssk6蛋白的小鼠抗人HIS-Izumo4/Tssk6腹水多克隆抗體。結(jié)論實(shí)驗(yàn)制備小鼠抗人HIS-Izumo4/Tssk6腹水多克隆抗體,可特異性識別人的Izumo4/Tssk6蛋白,可以用于對人HIS-Izumo4/Tssk6蛋白的研究。
【作者單位】： 呼和浩特市第二中學(xué);內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科;
【關(guān)鍵詞】： Izumo Tssk 多克隆抗體 哺乳動物 精子細(xì)胞
【基金】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)青年創(chuàng)新基金項(xiàng)目(YKD2013QNCX029)
【分類號】：R321
【正文快照】： 哺乳動物新生命最初來源于受精卵,精子上的Izumo免疫超蛋白家族與睪丸特異性激酶(testis-specific serine/threonine-protein kinase,Tssk)家族的第6個成員Tssk6被認(rèn)為是精卵融合必需的精細(xì)胞膜蛋白質(zhì)[1,2]。有研究者認(rèn)為,Tssk6在精卵融合過程中通過肌動蛋白的聚合作用幫助Izu

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本文編號：1078574