本文關(guān)鍵詞：乙型肝炎病毒環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)法的建立

  更多相關(guān)文章： 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增 乙型肝炎病毒 特異性 靈敏度

【摘要】：目的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新型核酸擴(kuò)增技術(shù),文中旨在建立一種LAMP方法用于乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的快速檢測(cè)。方法利用在線引物設(shè)計(jì)軟件,針對(duì)B型和C型HBV基因序列的相對(duì)保守區(qū)域,設(shè)計(jì)LAMP引物、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,q PCR)引物和探針序列。采用羥基萘酚藍(lán)作為顯色劑,優(yōu)化反應(yīng)條件,分別建立HBV的可視化LAMP反應(yīng)體系和q PCR反應(yīng)體系。反應(yīng)體系中酶量為1.5μL、反應(yīng)溫度為65℃為L(zhǎng)AMP擴(kuò)增的最佳條件。用2種方法同時(shí)檢測(cè)臨床樣本(96例乙型肝炎患者、5例丙型肝炎患者、5例獲得性免疫缺陷綜合癥患者及50例健康對(duì)照樣本的血清核酸),以q PCR檢測(cè)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),評(píng)價(jià)可視化LAMP方法診斷HBV的敏感性和特異性。結(jié)果建立的LAMP方法和q PCR方法最低可檢測(cè)到10 copies/μL。96例乙型肝炎患者中,q PCR法共55例擴(kuò)增陽(yáng)性,其中LAMP方法共42例陽(yáng)性,敏感性為76.4%(42/55);對(duì)病毒滴度高于102copies/μL和低于102copies/μL樣本的檢測(cè)敏感性分別為96.8%(30/31)和50%(12/24)。LAMP方法可成功檢出B型和C型HBV,且不會(huì)和其他經(jīng)血傳播的病毒發(fā)生交叉反應(yīng),特異性為100%。結(jié)論建立的LAMP方法操作簡(jiǎn)便快捷、結(jié)果判讀方便,能在1 h內(nèi)敏感、特異地檢測(cè)出血清中的HBV,為基層單位篩查HBV提供新的方法。
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院;南京軍區(qū)軍事醫(yī)學(xué)研究所疾病預(yù)防控制所;
【關(guān)鍵詞】： 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增 乙型肝炎病毒 特異性 靈敏度
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31500151) 江蘇省自然科學(xué)基金(BK20150094)
【分類號(hào)】：R373.21
【正文快照】： 0引言乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是引起人類急、慢性肝炎的DNA病毒,可導(dǎo)致肝衰竭、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌等嚴(yán)重后果。我國(guó)是乙型肝炎高發(fā)區(qū),流行病學(xué)調(diào)查顯示大陸地區(qū)至少有8億人感染過(guò)HBV,其中1.2億人為HBV慢性攜帶者,占全球慢性感染人數(shù)的1/3[1]。HBV感染的主要

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 徐啟豐;雞能感染乙型肝炎病毒[J];自然雜志;1986年03期

2 孫富林,宋寶云,趙林,李愛(ài)華,何祥旺;雞感染乙型肝炎病毒的研究[J];自然雜志;1987年11期

3 尹泳浩;;乙型肝炎病毒在龜體內(nèi)感染[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).流行病學(xué)傳染病學(xué)分冊(cè);1990年04期

4 姚偉;“特別審訊”乙型肝炎病毒[J];健康必讀;2004年02期

5 蘇建家,李瑗,王樹(shù)聲,班克臣,覃柳亮,歐超,張華;樹(shù)鄋對(duì)人乙型肝炎病毒易感性的驗(yàn)證[J];廣西科學(xué);2000年04期

6 ArbeitskreisBlut,方新華;乙型肝炎病毒[J];The Chinese-German Journal of Clinical Oncology;2001年06期

7 徐小元,斯崇文;乙型肝炎病毒調(diào)控機(jī)制的研究進(jìn)展[J];臨床內(nèi)科雜志;2002年04期

8 倪艷;;細(xì)解乙型肝炎病毒[J];肝博士;2006年01期

9 鄭永利;趙連三;;乙型肝炎病毒的生態(tài)學(xué)研究進(jìn)展[J];華西醫(yī)學(xué);2008年03期

10 朱丹丹;邵彬;李建鋒;;淺談我國(guó)乙型肝炎病毒的研究現(xiàn)狀及展望[J];科協(xié)論壇(下半月);2008年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 任鵬;;乙型肝炎病毒變異研究進(jìn)展[A];第五次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

2 楊兵;張莉萍;文陽(yáng)安;黃世峰;;乙型肝炎病毒X蛋白穩(wěn)定表達(dá)株的構(gòu)建及沉默效果觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專業(yè)委員會(huì)第六屆全國(guó)臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

3 夏偉良;沈巖;謝海洋;吳李鳴;陳瑜;鄭樹(shù)森;;環(huán)孢素A對(duì)乙型肝炎病毒作用的體外實(shí)驗(yàn)[A];2005年浙江省感染病、肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

4 孫慶豐;王文冰;徐道振;李蘊(yùn)銣;丁繼光;;乙型肝炎病毒e抗原陰性的慢性乙型重型肝炎[A];2006年浙江省感染病、肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

5 何芳;唐紅;劉麗;王u&;劉鳳君;周陶友;趙連三;劉聰;;丙型肝炎病毒核心蛋白抑制乙型肝炎病毒轉(zhuǎn)錄與復(fù)制的實(shí)驗(yàn)研究[A];第五屆全國(guó)肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

6 成軍;;乙型肝炎病毒耐藥的研究進(jìn)展[A];第三屆全國(guó)重型肝病及人工肝血液凈化學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2007年

7 成軍;;加強(qiáng)乙型肝炎病毒耐藥的認(rèn)識(shí)和監(jiān)測(cè)[A];第一屆全國(guó)疑難重型肝病大會(huì)、第四屆全國(guó)人工肝及血液凈化學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2008年

8 黃圓;羅依;譚亞敏;韓曉雁;朱曉黎;施繼敏;謝萬(wàn)灼;黃河;;異基因造血干細(xì)胞移植中乙型肝炎病毒再激活的臨床研究[A];第七屆全國(guó)血液免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)暨2008年浙江省血液病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

9 楊建功;黃兵;錢健幫;何小峰;;乙型肝炎病毒e抗原陰性慢性乙型肝炎預(yù)后的臨床分析[A];第6屆全國(guó)疑難及重癥肝病大會(huì)論文集[C];2011年

10 傅佳鵬;吳其愷;王平;李煒;李曉良;鄧欣;;164例乙型肝炎病毒耐藥病例耐藥位點(diǎn)的分析[A];第二十次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 馮衛(wèi)東;乙型肝炎病毒結(jié)構(gòu)圖繪制成功[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

2 石家莊市第五醫(yī)院婦產(chǎn)科副主任、副主任醫(yī)師 朱寶申;淺談乙型肝炎病毒的父嬰傳播[N];石家莊日?qǐng)?bào);2009年

3 北京大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室教授 莊輝;單項(xiàng)抗-HBc陽(yáng)性說(shuō)明……[N];健康報(bào);2001年

4 黃顯斌 唐明山;乙肝病毒基因組研究記錄被刷新[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

5 記者　徐可　通訊員　黃顯斌、唐明山;乙肝病毒基因組新編碼基因首次成功破譯[N];光明日?qǐng)?bào);2003年

6 成君;慢性乙肝患者不能只顧降酶[N];家庭醫(yī)生報(bào);2006年

7 ;我國(guó)成功破譯乙肝病毒基因組新編碼基因[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2003年

8 中國(guó)肝炎基金會(huì);乙肝感染途徑[N];農(nóng)民日?qǐng)?bào);2001年

9 蔡fg東;治療前的評(píng)估和咨詢非常必要[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2012年

10 本報(bào)記者 黃顯斌 唐明山;乙肝病毒新編碼基因被破譯[N];科技日?qǐng)?bào);2003年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 范吉云;乙型肝炎病毒耐藥相關(guān)突變及新突變的研究[D];上海交通大學(xué);2013年

2 李爽;乙型肝炎病毒對(duì)細(xì)胞色素P450同工酶3A4表達(dá)的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

3 周福平;乙型肝炎病毒慢性感染對(duì)細(xì)胞色素P450 2C9表達(dá)的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

4 李金成;健康成人乙型肝炎病毒疫苗接種后無(wú)應(yīng)答者免疫功能研究[D];中南大學(xué);2009年

5 李維娜;乙型肝炎病毒編碼蛋白對(duì)宿主炎性基因的調(diào)控作用及其機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2011年

6 趙震環(huán);蝎活性多肽Mucroporin-M1激活MAPK通路抑制HBV復(fù)制研究[D];武漢大學(xué);2012年

7 于士顏;乙型肝炎病毒多聚酶抑制Ⅰ型干擾素誘生機(jī)制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

8 趙文亮;乙型肝炎病毒基因突變檢測(cè)與分析平臺(tái)研發(fā)[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

9 李伯安;乙型肝炎病毒e抗原相互作用蛋白基因的克隆化及功能的初步研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

10 邊濤;我國(guó)乙型肝炎病毒基因型別地區(qū)分布和變異研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2008年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 薛穎瑩;乙型肝炎病毒相關(guān)性IgA腎病臨床病理特點(diǎn)和預(yù)后的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 萬(wàn)靜芳;他克莫司治療乙型肝炎病毒相關(guān)性膜性腎病的隨機(jī)對(duì)照臨床試驗(yàn)[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 張婷玉;乙型肝炎病毒中國(guó)流行株C基因型穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞模型的評(píng)價(jià)與應(yīng)用[D];河南中醫(yī)學(xué)院;2015年

4 徐慶國(guó);乙型肝炎病毒X基因亞型EHBH2在原發(fā)性肝癌進(jìn)程中的作用及臨床意義研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 丁曉琳;乙型肝炎病毒基因型及其核心啟動(dòng)子/前核心區(qū)變異的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

6 周率;Rituximab聯(lián)合化療治療的NHL患者中乙型肝炎病毒再激活風(fēng)險(xiǎn)的Meta分析[D];華東師范大學(xué);2015年

7 陳默;天然藥物KY-03分離抗HBV有效成分的研究[D];北京工業(yè)大學(xué);2015年

8 袁松松;乙型肝炎病毒e抗原在HBV感染過(guò)程中作用機(jī)制的研究[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2015年

9 鄭亢;IL-10受體基因多態(tài)性與慢性HBV感染的遺傳易感性研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

10 魏振宏;質(zhì)粒用于乙型肝炎病毒DNA定量檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)量控制的效果評(píng)價(jià)[D];蘭州大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：1070305