本文關(guān)鍵詞：乙型肝炎病毒環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增檢測法的建立

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【摘要】：目的環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一種新型核酸擴(kuò)增技術(shù),文中旨在建立一種LAMP方法用于乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的快速檢測。方法利用在線引物設(shè)計軟件,針對B型和C型HBV基因序列的相對保守區(qū)域,設(shè)計LAMP引物、實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,q PCR)引物和探針序列。采用羥基萘酚藍(lán)作為顯色劑,優(yōu)化反應(yīng)條件,分別建立HBV的可視化LAMP反應(yīng)體系和q PCR反應(yīng)體系。反應(yīng)體系中酶量為1.5μL、反應(yīng)溫度為65℃為LAMP擴(kuò)增的最佳條件。用2種方法同時檢測臨床樣本(96例乙型肝炎患者、5例丙型肝炎患者、5例獲得性免疫缺陷綜合癥患者及50例健康對照樣本的血清核酸),以q PCR檢測結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),評價可視化LAMP方法診斷HBV的敏感性和特異性。結(jié)果建立的LAMP方法和q PCR方法最低可檢測到10 copies/μL。96例乙型肝炎患者中,q PCR法共55例擴(kuò)增陽性,其中LAMP方法共42例陽性,敏感性為76.4%(42/55);對病毒滴度高于102copies/μL和低于102copies/μL樣本的檢測敏感性分別為96.8%(30/31)和50%(12/24)。LAMP方法可成功檢出B型和C型HBV,且不會和其他經(jīng)血傳播的病毒發(fā)生交叉反應(yīng),特異性為100%。結(jié)論建立的LAMP方法操作簡便快捷、結(jié)果判讀方便,能在1 h內(nèi)敏感、特異地檢測出血清中的HBV,為基層單位篩查HBV提供新的方法。
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院;南京軍區(qū)軍事醫(yī)學(xué)研究所疾病預(yù)防控制所;
【關(guān)鍵詞】： 環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增 乙型肝炎病毒 特異性 靈敏度
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31500151) 江蘇省自然科學(xué)基金(BK20150094)
【分類號】：R373.21
【正文快照】： 0引言乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是引起人類急、慢性肝炎的DNA病毒,可導(dǎo)致肝衰竭、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌等嚴(yán)重后果。我國是乙型肝炎高發(fā)區(qū),流行病學(xué)調(diào)查顯示大陸地區(qū)至少有8億人感染過HBV,其中1.2億人為HBV慢性攜帶者,占全球慢性感染人數(shù)的1/3[1]。HBV感染的主要

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本文編號：1070305