本文關(guān)鍵詞：RIPK3過表達對mTOR及其相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控作用

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【摘要】：目的探索受體相互作用蛋白激酶3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)的下游信號通路。方法向?qū)嶒灲MSH-SY5Y細胞內(nèi)轉(zhuǎn)染pCMV6-RIPK3質(zhì)粒上調(diào)細胞內(nèi)RIPK3的表達水平,對照組細胞轉(zhuǎn)染相應的空載質(zhì)粒。通過Western blot檢測細胞內(nèi)RIPK3的表達水平。3-(4,5-二甲基噻唑)[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl),MTT]實驗獲得2組細胞增殖曲線確定外源性RIPK3在細胞內(nèi)具有的生物學活性。通過RNAseq檢測2組細胞基因轉(zhuǎn)錄差異,并在生物通路分析(ingenuity pathway analysis,IPA)數(shù)據(jù)庫中進行數(shù)據(jù)分析,獲得RIPK3的下游信號通路及其中的關(guān)鍵分子哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)。采用微滴式數(shù)字化PCR(droplet digital PCR,ddPCR)對mTOR轉(zhuǎn)錄水平的差異進行驗證。結(jié)果質(zhì)粒DNA整合到細胞基因組內(nèi),Western blot提示外源性RIPK3在實驗組細胞內(nèi)穩(wěn)定表達,MTT結(jié)果證明其在細胞內(nèi)能夠抑制細胞增殖。RNAseq及IPA分析結(jié)果提示過表達RIPK3能夠?qū)е耺TOR轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生上調(diào),并對其下游的基因,包括固醇反應結(jié)合蛋白(sterol-response binding proteins,SREBPs)、p70核糖體S6蛋白激酶(p70ribosomal S6protein kinases,S6K)、真核生物起始因子4E結(jié)合蛋白(eukaryotic initiation factor 4E-binding proteins,4E-BPs)和ULK(unc-51-like kinase)激酶復合體的轉(zhuǎn)錄具有明顯的調(diào)節(jié)作用。ddPCR實驗結(jié)果中mTOR表達改變趨勢與RNAseq基本一致。結(jié)論 RIPK3能夠調(diào)控mTOR及其下游信號通路中SREBPs、S6K、4E-BPs和ULK基因轉(zhuǎn)錄水平,進而在神經(jīng)系統(tǒng)生長發(fā)育和疾病進展中發(fā)揮重要作用。
【作者單位】： 武警后勤學院附屬醫(yī)院腦科醫(yī)院天津市神經(jīng)創(chuàng)傷修復重點實驗室武警部隊腦創(chuàng)傷與神經(jīng)疾病研究所;武警后勤學院中心實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 神經(jīng)母細胞瘤 受體相互作用蛋白激酶- 基因表達調(diào)控
【基金】：國家自然科學基金青年科學基金項目(31200809) 武警部隊后勤科研項目(WJHQ2012-20) 武警后勤學院科研創(chuàng)新團隊(WHTD201306)
【分類號】：R363
【正文快照】： 受體相互作用蛋白激酶3(receptor-interactingprotein kinase 3,RIPK3)是腫瘤壞死因子α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)介導程序性壞死(necroptosis)信號通路中的關(guān)鍵分子,在TNF-α的作用下能夠被受體相互作用蛋白激酶1(receptor-interacting protein kinase 1,RIPK1)激活,

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本文編號：1031772