本文關(guān)鍵詞：用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選抗人p53單鏈抗體

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【摘要】：目的采用重疊PCR技術(shù),構(gòu)建小鼠抗人p53基因的全套單鏈抗體(sc Fv)文庫(kù),利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選抗人p53sc Fv。方法構(gòu)建表達(dá)p53誘餌載體p GBKT7-p53,提取P53蛋白免疫的小鼠脾臟組織總RNA,反轉(zhuǎn)錄PCR和重疊PCR方法構(gòu)建VH-linker-VL型sc Fv基因庫(kù)。將其與載體p GADT7連接,產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至含誘餌載體的AH109酵母菌中,于營(yíng)養(yǎng)缺陷型平板中篩選陽(yáng)性克隆。采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法驗(yàn)證sc Fv與人P53蛋白的親和力。結(jié)果成功構(gòu)建誘餌質(zhì)粒p GBKT7-p53并轉(zhuǎn)入酵母AH109細(xì)胞,其在酵母細(xì)胞中無(wú)自激活能力,對(duì)宿主菌亦無(wú)毒性;成功獲取VH-linker-VL型的抗體文庫(kù)并構(gòu)建捕獲載體,利用酵母雙雜交系統(tǒng)成功篩選到抗人P53 sc Fv片段;sc Fv1、sc Fv2和sc Fv3與人P53蛋白間均具有一定親和力,可用以檢測(cè)細(xì)胞、組織中的P53蛋白。結(jié)論利用酵母雙雜交系統(tǒng),獲得具有良好的親和力抗人P53 sc Fv,為篩選sc Fv提供新思路。
【作者單位】： 福州大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： p 單鏈抗體 抗體庫(kù) 酵母雙雜交
【基金】：邁新病理基金資助(m1206)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 單鏈可變區(qū)片段(single-chain fragment variable,sc Fv)抗體是目前研究較多、應(yīng)用較為廣泛的重組抗體之一[1],不包含抗體恒定區(qū),但仍能表現(xiàn)出與抗原的高親和力[2]�？贵w庫(kù)技術(shù)的出現(xiàn),進(jìn)一步推動(dòng)了工程抗體的發(fā)展[3-4],特別是體外噬菌體篩選系統(tǒng),使得抗體生產(chǎn)領(lǐng)域具有誘人的應(yīng)

【相似文獻(xiàn)】

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中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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3 王，

本文編號(hào)：1019963