本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用Gibson Assembly法快速構(gòu)建人組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告載體

  更多相關(guān)文章： Gibson Assembly 報(bào)告載體 人組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶 啟動(dòng)子活性

【摘要】：目的:快速構(gòu)建人組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告載體并驗(yàn)證其活性。方法:因EZH2啟動(dòng)子富含GC,故應(yīng)用Gibson Assembly方法設(shè)計(jì)分兩段擴(kuò)增,然后將片段一步法連入pGL3-Basic質(zhì)粒,構(gòu)建熒光素酶報(bào)告載體,進(jìn)行酶切鑒定。與p RL-TK內(nèi)參照質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染C4-2細(xì)胞,雙熒光素酶分析法檢測(cè)啟動(dòng)子的活性。結(jié)果:經(jīng)酶切鑒定證實(shí)成功構(gòu)建了EZH2啟動(dòng)子報(bào)告載體,雙熒光索酶報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果顯示構(gòu)建的報(bào)告載體具有啟動(dòng)子活性。結(jié)論:快速成功構(gòu)建了具有啟動(dòng)子活性的EZH2啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告載體,為進(jìn)一步研究前列腺癌中EZH2表達(dá)調(diào)控機(jī)制提供必要的實(shí)驗(yàn)材料。
【作者單位】： 蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院泌尿外科;
【關(guān)鍵詞】： Gibson Assembly 報(bào)告載體 人組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶 啟動(dòng)子活性
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81472776) 教育部博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金(20133201110016) 江蘇省自然科學(xué)基金(BK20161222) 蘇州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(SYS201629)~~
【分類號(hào)】：R3416
【正文快照】： 果蠅zeste基因增強(qiáng)子人類同源物(enhancero f z e s t e h o m o l o g 2,E Z H 2)是多梳抑制復(fù)合體(p ol yco m b rep ress i ve co m pl e x 2,P RC 2)的成員之一。EZH2是組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶,通過使基因啟動(dòng)子區(qū)組蛋白H3K27甲基化而抑制基因表達(dá)[1]。有研究[2-3]表明EZH2過表

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1019893