應(yīng)用Gibson Assembly法快速構(gòu)建人組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶啟動子熒光素酶報告載體
本文關(guān)鍵詞:應(yīng)用Gibson Assembly法快速構(gòu)建人組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶啟動子熒光素酶報告載體
更多相關(guān)文章: Gibson Assembly 報告載體 人組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶 啟動子活性
【摘要】:目的:快速構(gòu)建人組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)啟動子熒光素酶報告載體并驗證其活性。方法:因EZH2啟動子富含GC,故應(yīng)用Gibson Assembly方法設(shè)計分兩段擴(kuò)增,然后將片段一步法連入pGL3-Basic質(zhì)粒,構(gòu)建熒光素酶報告載體,進(jìn)行酶切鑒定。與p RL-TK內(nèi)參照質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染C4-2細(xì)胞,雙熒光素酶分析法檢測啟動子的活性。結(jié)果:經(jīng)酶切鑒定證實成功構(gòu)建了EZH2啟動子報告載體,雙熒光索酶報告基因檢測結(jié)果顯示構(gòu)建的報告載體具有啟動子活性。結(jié)論:快速成功構(gòu)建了具有啟動子活性的EZH2啟動子熒光素酶報告載體,為進(jìn)一步研究前列腺癌中EZH2表達(dá)調(diào)控機(jī)制提供必要的實驗材料。
【作者單位】: 蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院泌尿外科;
【關(guān)鍵詞】: Gibson Assembly 報告載體 人組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶 啟動子活性
【基金】:國家自然科學(xué)基金(81472776) 教育部博士學(xué)科點專項科研基金(20133201110016) 江蘇省自然科學(xué)基金(BK20161222) 蘇州市科技計劃項目(SYS201629)~~
【分類號】:R3416
【正文快照】: 果蠅zeste基因增強(qiáng)子人類同源物(enhancero f z e s t e h o m o l o g 2,E Z H 2)是多梳抑制復(fù)合體(p ol yco m b rep ress i ve co m pl e x 2,P RC 2)的成員之一。EZH2是組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶,通過使基因啟動子區(qū)組蛋白H3K27甲基化而抑制基因表達(dá)[1]。有研究[2-3]表明EZH2過表
【相似文獻(xiàn)】
中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條
1 歐陽為明,張繼帥,謝鑫,金伯泉;pCDM8-GFP報告載體的構(gòu)建及鑒定[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2003年02期
2 劉貝娜;何英;王爽;;PLUNC基因啟動子區(qū)熒光素酶報告載體的構(gòu)建與鑒定[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2009年02期
3 謝景航;鄒佳寧;唐聰;楊家森;羅學(xué)剛;奚濤;;人SMYD3基因啟動子熒光素酶報告載體的構(gòu)建與分析[J];中國藥科大學(xué)學(xué)報;2009年02期
4 金彩霞;李文林;李元杰;徐方;胡以平;;胰島素啟動子在肝干細(xì)胞分化研究中的應(yīng)用[J];癌變·畸變·突變;2010年03期
5 隋江東;李華;吳玉章;;NLRP1基因啟動子區(qū)熒光素酶報告載體的構(gòu)建與鑒定[J];免疫學(xué)雜志;2011年04期
6 陳澤志;李勁頻;杜偉偉;劉競麗;莫雪安;;FOXP3基因3’-UTR段雙熒光素酶報告載體的構(gòu)建及其活性鑒定[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2014年02期
7 金彩霞;李文林;朱吉;張南;田棣;胡以平;;胰十二指腸同源盒基因-1啟動子在肝干細(xì)胞分化研究中的應(yīng)用[J];癌變.畸變.突變;2006年05期
8 譚靖;蔣先鎮(zhèn);何樂業(yè);蔣志強(qiáng);湯育新;姚鯤;陳兵海;薛娟;;構(gòu)建p53雙熒光報告載體及其功能驗證[J];中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2013年11期
9 ;[J];;年期
中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條
1 邵鳳娟;成軍;馬英驥;洪源;郭江;王巧俠;;重組人肝再生增強(qiáng)因子下調(diào)鈣結(jié)合蛋白S100A11基因表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二次全國病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年
2 鄧廷賢;龐春英;王建;楊春艷;鄭海英;黃芬香;覃廣勝;楊炳壯;梁賢威;;熒光素酶基因報告載體的構(gòu)建研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物繁殖學(xué)分會第十六屆學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年
3 李偉;梁珊珊;徐海滄;宋雪霏;;含MMP-26啟動子區(qū)域蟲螢光素酶報告載體的構(gòu)建及其活性檢測[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年
中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條
1 劉真;幽門螺桿菌感染相關(guān)microRNAs的篩選、鑒定及功能研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年
中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條
1 沈艷;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的黃瓜花葉病毒移動報告體系研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年
2 徐麗萍;基于熒光報告載體的農(nóng)桿菌atu4860基因啟動子調(diào)控機(jī)理研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2016年
3 馮輝;一個新型細(xì)菌單雜交系統(tǒng)報告載體的構(gòu)建及其在轉(zhuǎn)錄因子發(fā)現(xiàn)中的應(yīng)用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年
4 張秋美;釀酒酵母乙醇響應(yīng)報告載體的構(gòu)建和研究[D];大連理工大學(xué);2009年
5 李英鎮(zhèn);胸腺素β4真核表達(dá)載體及α肌球蛋白重鏈啟動子驅(qū)動報告載體的構(gòu)建及其應(yīng)用[D];暨南大學(xué);2014年
6 劉燁;小鼠胚胎干細(xì)胞中DMRT1對Sox2的調(diào)控作用研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2013年
7 李軍華;TPT1對OCT4基因表達(dá)調(diào)控的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年
,本文編號:1019893
本文鏈接:http://sikaile.net/xiyixuelunwen/1019893.html