本文關(guān)鍵詞：血管內(nèi)皮抑素，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

　　摘要 腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移依賴于血管的形成，腫瘤細胞能分泌VEGF、bFGF等促血管生成因子，誘發(fā)血管內(nèi)皮細胞增殖，遷入腫瘤結(jié)節(jié)，逐步形成新生血管。腫瘤細胞通過血管攝取氧和營養(yǎng)而不斷增殖、發(fā)展，新生血管具有病理性，亦使腫瘤細胞易于漏入血流而發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移。經(jīng)過多年來的研究，國內(nèi)外學(xué)者先后發(fā)現(xiàn)了許多腫瘤血管抑制因子，具有抑制血管內(nèi)皮細胞增殖、促使腫瘤退化、凋亡、防止轉(zhuǎn)移的作用，目前有20多種巳進入Ⅰ-Ⅲ期臨床研究。因此，抑制腫瘤血管的形成，就成為腫瘤研究的熱點，并將成為腫瘤治療的新策略。血管內(nèi)皮抑素（Endostatin）由美國O’Reilly和Folkman于1997年首先在小鼠中發(fā)現(xiàn)，我國徐根興于同年發(fā)現(xiàn)了人的Endostatin，從人肝臟cDNA文庫中篩選克隆得到人Endostatin基因，又把這種基因轉(zhuǎn)染到雙歧桿菌制成口服凍干粉劑（ETB-2），我們對其抑瘤作用進行了實驗研究和臨床前研究。實驗研究采用裸鼠人胃癌模型和F1小鼠肝癌模型，結(jié)果胃癌組的抑瘤率分別為次日給藥47.45%，2周給藥43.20%，，肝癌治療組抑瘤率為51%，與對照組比較P<0.05，有量效關(guān)系；臨床前研究胃癌治療組服藥后CD34血管染色腫瘤血管密度（MVD）顯著減少（P<0.05）；部分晚期腫瘤病人服用后生活質(zhì)量有明顯提高，生存期延長。ETB-2的抑瘤作用是明確的，但作用機理有待進一步探討。

　　1．內(nèi)皮抑素（Endostatin）的發(fā)現(xiàn)與生物學(xué)效應(yīng)

　　在研究腫瘤血管形成的過程中，人們不但發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞能分泌許多種促進血管形成、加速腫瘤發(fā)展的因子，亦發(fā)現(xiàn)某些腫瘤細胞能分泌許多抑制血管形成、促使腫瘤退化、凋亡、防止轉(zhuǎn)移的因子。因此，Hanhan等提出了血管生成與抑制之間調(diào)節(jié)的平衡假設(shè)。1994年，O’Reilly和Folkman在研究Lewis肺癌時發(fā)現(xiàn)，切除原發(fā)腫瘤后很快發(fā)生癌的轉(zhuǎn)移，腫瘤組織切片顯示有大量的新生血管形成。以后在Lewis肺癌小鼠血清和尿液中分離、純化得到一種蛋白，分子量為38KD。這與人纖溶酶原N-端98-440位氨基酸殘基片段有98%的同源性，它有5個Kringle區(qū)，分別有抑制內(nèi)皮細胞增殖或遷移的作用，其半衰期2.5天，對實驗?zāi)[瘤有強烈的抑制作用，命名為Angiostatin。我國的陳雪華、劉炳亞等從人血漿提取得到纖溶酶原降解產(chǎn)物，對胃癌生長和轉(zhuǎn)移有良好的抑制作用。1997年，O’eilly和Folkman又在鼠內(nèi)皮細胞瘤（Eoma）細胞培養(yǎng)液中提取到一種蛋白，這是膠原X Ⅷ C末端區(qū)內(nèi)184個氨基酸片段構(gòu)成，分子量為20KD，對腫瘤的血管內(nèi)皮細胞增殖有選擇性抑制作用，命名為Endostatin，譯為血管內(nèi)皮抑素。動物實驗證明Endostatin對實驗性肺癌、黑色素瘤、纖維肉瘤經(jīng)治療后均有較好療效并能使腫瘤最后達到休眠狀態(tài)。我國徐根興等同年也在研究內(nèi)皮細胞過程中發(fā)現(xiàn)了人Endostatin，并從人臟肝cDNA文庫中篩選克隆得到人Endostatin基因，表達出重組人Endostatin，其與鼠Endostatin有83.3%的同源性，分子量為18KD。此后，我國郭文忠等從胎兒肝臟中克隆到人血管形成抑制因子HIAF-1，在E.Coli細菌中獲得高效表達，抑瘤率為46.6%。

　　根據(jù)國內(nèi)外學(xué)者的研究，Endostatin的生物學(xué)效應(yīng)大致有如下特點：（1）對腫瘤血管內(nèi)皮細胞增殖有選擇性的抑制作用；（2）對雞胚絨毛尿囊膜血管生長抑制率達60%，對靜止的血管內(nèi)皮細胞無作用；（3）對動物移植腫瘤抑制率高，連續(xù)用藥6個療程185天可使原發(fā)腫瘤從350-400mm3縮小到2 mm3（O’Re illy）；（4）抑瘤作用有量效依賴關(guān)系；（5）對不同類型的腫瘤抑瘤率相近；（6）有防止腫瘤轉(zhuǎn)移作用；（7）無耐藥傾向，無不良反應(yīng)。由于Endostatin的這些特性，其有可能成為新的抗腫瘤藥物，美國在1999巳經(jīng)進入I期臨床。

　　2．ETB-2對消化道腫瘤的影響

　　目前Endostatin巳從蛋白提取發(fā)展到基因克隆、重組，通過大腸桿菌、酵母菌甚至于病毒、昆蟲細胞等各種載體進行表達，表達產(chǎn)物均證明有良好的抑瘤活性。根據(jù)Folkman的報道，Endostatin抑制腫瘤血管生成有量效關(guān)系。因為治療腫瘤用藥量大，療程長，為了滿足腫瘤病人不同階段、不同聯(lián)合方案用藥需要，減輕負擔(dān)，方便用藥，徐根興又把Endostatin基因轉(zhuǎn)染到雙歧桿菌制成口服凍干粉劑（ETB-2），證明具有Endostatin活性。而我們進行了部分動物實驗及臨床前研究，也獲得了較好的結(jié)果。

　　2．1裸鼠人胃癌模型抑瘤效應(yīng)及機理研究

　　采用人胃癌細胞株MKN45在裸鼠皮下接種制成腫瘤模型，以成瘤后2周與接種后次日兩種給藥方式進行研究。分別設(shè)立陰性對照組（蒸餾水）陽性對照組（氟鐵龍）、載體對照組（雙歧桿菌）與治療組（ETB-2），采用灌胃給藥進行研究，每日一次，實驗過程為4周。結(jié)果治療組的抑瘤率分別為次日給藥47.45%，2周給藥43.20%，陽性對照41.1%，載體對照組0.03%（兩兩比較P<0.05），與郭文忠皮下注射給藥報道結(jié)果相近。

　　微血管密度（MVD）和Tunel染色結(jié)果提示ETB-2具有抑制腫瘤血管增生，促進腫瘤細胞壞死和誘導(dǎo)凋亡的作用，從而使腫瘤增殖下降。

　　2．2小鼠HAC肝癌模型抑瘤效應(yīng)研究

　　采用鼠HAC肝癌細胞株接種F1小鼠皮下制成肝癌模型，分陰性對照組（蒸餾水）、陽性對照組（環(huán)磷酰胺，腹腔注射）、載體對照組（雙歧桿菌）與治療組進行研究，灌胃給藥4周，治療組抑瘤率為51%，陽性對照組83.79%（兩兩比較P<0.05）。兩組腫瘤模型研究均顯示高劑量組優(yōu)于低劑量組（P<0.05），提示Endostatin口服劑亦有量效關(guān)系。

　　MVD、Tunel和VEGF免疫組化染色結(jié)果顯示ETB-2組腫瘤血管生成抑制、凋亡壞死增加、VEGF分泌減少，腫瘤增殖下降；環(huán)磷酰胺組抑瘤率高，但MVD和VEGF并未降低，可說明環(huán)磷酰胺具有殺細胞作用，但不能影響腫瘤血管的形成，其抑瘤機理與ETB-2相異，為以后聯(lián)合用藥提供了線索。

　　2．3 志愿者臨床研究

　　我們對15例胃癌志愿者，術(shù)前服藥1-2周，術(shù)前胃鏡活檢標本與術(shù)后病理標本進行HE染色及CD34單抗免疫組化研究，并以未服藥組進行對照。結(jié)果服藥組術(shù)后CD34微血管計數(shù)顯著低于術(shù)前，低于未服藥組。應(yīng)晚期腫瘤病人要求，自愿服用，有肝癌、胃癌、腸癌合并腹腔、肝、肺轉(zhuǎn)移病例，服藥后生活質(zhì)量有提高。生存時間有延長，最長者巳達20個月，無不良反應(yīng)。

　　3．Endostatin及ETB-2的作用機理

　　抗血管治療巳經(jīng)展現(xiàn)了廣闊的前景，但其作用機理尚需深入研究，根據(jù)對Endos-tatin的實驗研究，其作用機制大致如下：

　�。�1）可直接與血管內(nèi)皮細胞受體結(jié)合抑制內(nèi)皮細胞的增生；

　　（2）可與肝素樣的硫酸蛋白結(jié)合，抑制血管生成；

　�。�3）可抑制VEGF等血管生長因子，從而抑制內(nèi)皮細胞的增殖與腫瘤的生長；

　�。�4）可抑制抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-x1,促使血管內(nèi)皮細胞凋亡加速。

　　這些將導(dǎo)致腫瘤血管形成抑制，腫瘤細胞因缺血缺氧而增殖減少，凋亡和壞死增加，直至腫瘤退縮、休眠。ETB-2是將Endostatin基因轉(zhuǎn)染到雙歧桿菌制成凍干粉劑，其實驗動物和臨床前研究的抑瘤作用與郭文忠等的注射制劑相近，提示ETB-2具有Endostatin的抑瘤作用。其作用機理可能是借助于雙歧桿菌的功能，口服后在人腸道定植、繁殖，然后復(fù)制出大量的Endostatin，經(jīng)消化裂解出具有Endostatin功能的活性片段，吸收后轉(zhuǎn)運到腫瘤組織發(fā)揮抑制內(nèi)皮細胞增殖的作用，導(dǎo)致MVD、PCNA、VEGF下降，腫瘤細胞凋亡壞死增加，這個過程的細節(jié)還不清楚，尚需進一步研究、闡明。

　　4．抗血管生成治療腫瘤的展望

　　鑒于以往腫瘤治療均以腫瘤細胞為靶，但腫瘤細胞基因具有不穩(wěn)定性，易突變，因此對化療藥容易產(chǎn)生耐藥，常招致治療失敗。Endostatin以血管內(nèi)皮細胞為靶，內(nèi)皮細胞具有相對穩(wěn)定性，不易產(chǎn)生耐藥。有研究報道一個內(nèi)皮細胞可支持50-100個腫瘤細胞生長，因此，抗血管生成必將在治療腫瘤方面有廣闊的前景。轉(zhuǎn)基因口服制劑方便，無毒副反應(yīng)，不產(chǎn)生耐藥性。有其優(yōu)點，可用于高濃度Endostatin沖擊治療后的維持治療與綜合治療過程中的基礎(chǔ)治療，有臨床應(yīng)用前景。我們相信，Endostatin等血管抑制劑將成為重要抗腫瘤藥物，以抑制腫瘤血管形成為基礎(chǔ)，聯(lián)合手術(shù)、放療、化療、介入治療、物理治療、免疫治療、基因治療等的綜合治療方案將成為治療的腫瘤的新策略。

  本文關(guān)鍵詞：血管內(nèi)皮抑素，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。