引言

心源性粹死(Suddden cardiac death, SCD)是指由心臟原因引起的，在急性癥狀出現(xiàn)Ih內(nèi)，以病人意識(shí)突然喪失為主要特征的自然死亡[1]。大多數(shù)器質(zhì)性病變致SCD者可通過相關(guān)檢査找到明確的死因，但是還有SCD病例解剖呈陰性，給法醫(yī)工作帶來了困難，本文所研究的不明原因的SCD。SCD的發(fā)病率高，死亡的時(shí)間及形式難以預(yù)料，但直接死因多為心臟驟停，這種心臟驟停多由惡性室性心律失常引起，如室性心動(dòng)過速(ventricular tachycardia，VT)和室顫（ventricular fibrillation，VF)。上述心律失常可以引起心臟泵血功能障礙，嚴(yán)重影響重要器官的血液供應(yīng)，導(dǎo)致SCD。冠心病、心肌炎等常見的引起惡性心律失常的器質(zhì)性心臟病行病理學(xué)檢查即可明確死因。但是尚有部分SCD病例，行病理學(xué)檢查時(shí)未能發(fā)現(xiàn)明顯異常，這類疾病主要為離子通道疾病，如長QT綜合征(long QT syndrome，LQTs)[2]、Bmgada綜合征[3]等遺傳性心律失常疾病，目前發(fā)現(xiàn)其發(fā)病與SCN5A基因、ANK2基因的突變有關(guān)。研究表明SCN5A基因主要與鈉離子通道的表達(dá)有關(guān)5],而ANK2基因編碼的離子通道輔助蛋白則與韓離子通道的表達(dá)有關(guān)當(dāng)上述離子通道異常時(shí)可影響心肌細(xì)胞的興奮性和自律性，進(jìn)而誘發(fā)惡性心律失常。本實(shí)驗(yàn)釆用免疫組織化學(xué)方法，檢測尸檢標(biāo)本中右心房心肌中SCN5A和ANK2的表達(dá)和分布，旨在研究不明原因性SCD患者心房肌中兩者的表達(dá)及相關(guān)性，以期為不明原因SCD者的死因診斷提供一定的依據(jù)。
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第一章實(shí)驗(yàn)材料

1.1研究對象
選取青島市2011-2013年間解剖鑒定中心心臟標(biāo)本58例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，男34例，女24例，年齡18~70歲（中位數(shù)38)。A組是對照組，為病理診斷排除與心臟相關(guān)的異常死亡標(biāo)本20例，年齡范圍在18-65歲，其中男性13例，女性7例，該組20例患者均無暈厥和心律失常病史，毒化檢驗(yàn)陰性，排除出血及炎性的傳導(dǎo)系統(tǒng)病變，具體構(gòu)成如下：因肝破裂死亡者6例、因交通事故損傷而致死者8例、自溢身亡者4例、高空墜落致死2例；B組為因經(jīng)常規(guī)的蘇木素-伊紅(Hematoxylin-Eosin, HE)染色和其他輔助檢查診斷為SCD的心臟標(biāo)本共計(jì)20例，其中男性標(biāo)本共有12例，女性標(biāo)本8例，年齡的波動(dòng)范圍在20~72歲（中位數(shù)39)，具體構(gòu)成如下：冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病致SCD者13例，病毒性心肌炎致SCD者3例，擴(kuò)張性心肌病致SCD者4例；C組為不明原因SCD者，患者尸檢結(jié)果為陰性，但生前有暈厥和心律失常病史，共計(jì)18例，其中男性、女性各9例，年齡的波動(dòng)范圍在16~50歲（中位數(shù)32)。

1.2研究材料
鼠抗電壓門控鈉通道5a多克隆抗體（Anti-SCN5A):北京博蜜森生物技術(shù)有限公司
鼠抗錨蛋白B多克隆抗體（Anti-AnkyrinB):北京博鰲森生物技術(shù)有限公司
山羊抗兔/小鼠IgG多聚體：北京博鰲森生物技術(shù)有限公司
DAB試劑盒：北京博鰲森生物技術(shù)有限公司
全自動(dòng)真空脫水機(jī) 1臺(tái)英國Shandon Eecelsior
半自動(dòng)石錯(cuò)包埋機(jī) 1臺(tái)德國Microm Ec350-2BX-50
電光源多頭顯微鏡 1臺(tái) 日本OLYMPUS公司
DP-10全自動(dòng)顯微照相系統(tǒng)1臺(tái) 日本OLYMPUS公司
烤片機(jī) 1臺(tái)湖北孝感市宏大醫(yī)用儀器有限公司
切片機(jī) 1臺(tái)萊卡切片機(jī)

第三章實(shí)驗(yàn)結(jié)果  .... 6

3.1心肌HE染色結(jié)果 .........6

3.2免疫組化檢測結(jié)果...... 8

3.3 SCN5A與ANK2的表達(dá)的相關(guān)性研究結(jié)果 .........13

第四章討論......... 14

結(jié)論.......17

第四章討論

4.1研究背景
除一系列編碼離子通道的基因的正常表達(dá)外，大量的離子通道蛋白輔助原件對維持細(xì)胞的穩(wěn)定及蛋白的定位等也起到重要作用。ANK2編碼的ankyrin-B作為一種多功能的膜適配器，是一種重要的離子通道蛋白輔助原件，在多種心臟功能中均起到重要作用，它可以錯(cuò)定可興奮細(xì)胞的離子通道和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，將InsP3、Na/Ca交換器、Na/KATP酶和在肌質(zhì)網(wǎng)和心肌細(xì)胞橫管中有機(jī)地結(jié)合在一起，，用以維持心肌細(xì)胞的收縮功能和Ca2+信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能，還在組織心臟M線和細(xì)胞骨架、調(diào)控原件（包括遮蔽蛋白和蛋白憐酸酶2A)中起到重要作用。目前已有眾多研究發(fā)現(xiàn)ANK2的基因突變可以引起多種不同類型的心律失常，增加發(fā)生SCD的風(fēng)險(xiǎn)，如：4型長QT綜合征、心房纖顫、室性心動(dòng)過速、病態(tài)竇房結(jié)綜合征等，上述研究均證明基因SCN5A和ANK2與離子通道疾病有關(guān)，可導(dǎo)致心源性猝死，而這種原因?qū)е碌拟�，在病理切片上與正常人相比并無特異性，被認(rèn)為是原因不明的心源性粹死。

4.2研究結(jié)果及結(jié)論
本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)方法，檢測了A組（對照組)、B組（器質(zhì)性心臟病組）和C組（不明原因SCD組）尸檢標(biāo)本中右心房心肌中SCN5A和ANK2的表達(dá)蛋白表達(dá)及分布。研究發(fā)現(xiàn)：C組右心房心肌細(xì)胞中SCN5A基因的吸光度值顯著低于A組和B組（/=3.484，3.561，P<0.01), SCN5A基因在組間的差異性表達(dá)提示其與不明原因性SCD的發(fā)生有關(guān)，這與國內(nèi)外研究結(jié)果一致。國內(nèi)研究人員[22]釆用限制性片段長度的多態(tài)性方法對尸檢保存蠟塊及血液樣本進(jìn)行分析時(shí)發(fā)現(xiàn)：一個(gè)位于SCN5A基因上的多態(tài)性位點(diǎn)H558R的改變與不明原因的SCD發(fā)生相關(guān)，相似的研究還發(fā)生在國外一個(gè)SCD發(fā)生率高的大家族中，研究人員通過對其DNA進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)了SCN5A的1493delK雜合突變[23]及P.R689H突變[24]，國內(nèi)外實(shí)驗(yàn)多從基因水平進(jìn)行研究，本實(shí)驗(yàn)從蛋白水平進(jìn)行了補(bǔ)充，完善了相關(guān)研究。
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結(jié)論

1.不明原因性SCD者右心房心肌細(xì)胞中基因編碼的Navl.5通道蛋白及錯(cuò)定蛋白B表達(dá)的變化，提示其與不明原因性SCD的發(fā)生相關(guān)，為不明原因性SCD的病因診斷提供了一定的病理學(xué)依據(jù)。
2.尚未發(fā)現(xiàn)SCN5 A和ANK2基因的表達(dá)在SCD右心房心肌細(xì)胞中有明顯的相關(guān)關(guān)系。
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參考文獻(xiàn)（略）