前 言

近年來，隨著圍生醫(yī)學(xué)及新生兒醫(yī)學(xué)的發(fā)展與進步，早產(chǎn)兒的死亡率逐漸下降，但相應(yīng)的早產(chǎn)兒并發(fā)癥卻有上升趨勢，神經(jīng)系統(tǒng)的并發(fā)癥更成為重中之重。其中較為常見與嚴(yán)重的是早產(chǎn)兒顱內(nèi)出血（ICH），而腦室內(nèi)出血(IVH)又占很大比例。早產(chǎn)兒腦室內(nèi)出血根據(jù)出血量及出血部位的不同，其臨床表現(xiàn)、病情發(fā)展及預(yù)后也不盡相同。早產(chǎn)兒發(fā)生腦室內(nèi)出血后，其病程好像更加嚴(yán)重, 出血后腦積水和死亡等不良預(yù)后的發(fā)生率較高[1]。其存活者中部分留有癲癇、運動障礙等遠(yuǎn)期后遺癥，所造成的腦損傷往往是不可逆的，嚴(yán)重影響患兒以后的生活質(zhì)量。如何迅速診斷和治療早產(chǎn)兒顱內(nèi)出血，提高顱內(nèi)出血早產(chǎn)兒的生存質(zhì)量，逐漸成為大家關(guān)注的重點。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是一類糖蛋白，具有促進內(nèi)皮細(xì)胞分裂的作用，尤其可以特異性的促血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂生長。 同時具有誘導(dǎo)血管生成、使血管通透性增高以及促進細(xì)胞質(zhì)內(nèi)鈣聚集等作用[2]。各種應(yīng)激反應(yīng)如缺氧缺血、炎癥反應(yīng)等均可以誘導(dǎo) VEGF 的表達(dá),其中缺氧缺血是各類細(xì)胞中 VEGF 表達(dá)的強烈誘發(fā)因素，從而使 VEGF 參與缺氧缺血組織的損害和修復(fù)過程。人體在腦出血后發(fā)生了連續(xù)性變化，有研究顯示, 無論腦出血后采取任何治療方法,出血灶和對側(cè)腦血流量均下降,并可持續(xù)很長時間[3]。
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第一章 資料與方法

1．研究對象
收集 2012 年 12 月 －2013 年 5 月在山西省兒童醫(yī)院急救中心住院的早產(chǎn)兒 60 例。入選標(biāo)準(zhǔn)： ①早產(chǎn)兒；②出生 24 h 內(nèi)入院。觀察組新生兒具備以下條件: ①均滿足新生兒顱內(nèi)出血的診斷標(biāo)準(zhǔn)，目前依據(jù)患兒病史、臨床表現(xiàn)及影像學(xué)檢查綜合考慮。因頭顱 B 超對新生兒顱內(nèi)出血的病變部位分辨率高，特異性強，所以成為顱內(nèi)出血的主要診斷手段。根據(jù)頭顱超聲檢查可以明確出血類型。對出血程度及出血部位進行分度，采用 Papile 分度法[8]:Ⅰ度,單純室管膜下生發(fā)基質(zhì)出血，可以伴有極少量腦室內(nèi)出血;Ⅱ度,腦室內(nèi)出血，無腦室擴大;Ⅲ度,腦室內(nèi)出血同時伴有腦室擴大;Ⅳ度,腦室內(nèi)出血、腦室擴大，同時伴腦室旁白質(zhì)損傷或發(fā)生出血性梗死；②選擇生后 1-3 天之內(nèi)已明確診斷顱內(nèi)出血病例，并根據(jù)頭顱 B 超顯示出血程度Ⅱ度以上的患兒。對照組新生兒具備以下條件：①無顱內(nèi)出血；②生后頭顱超聲檢查未顯示顱內(nèi)出血。排除標(biāo)準(zhǔn)：兩組均須排除：①重度窒息、新生兒缺氧缺血性腦病、新生兒呼吸窘迫綜合征、先天畸形、重癥感染、遺傳代謝性疾病、自身免疫性疾病、出血及凝血障礙疾病者；②入院 10 天內(nèi)出院或死亡者；③病例資料不完整者。

2．研究方法
人血管內(nèi)皮生長因子（Human-VEGF）試劑盒是一種雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗。進行檢測的是已知 Human-VEGF 濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的樣品。將它們加入預(yù)包被的抗人-VEGF 單克隆抗體微孔酶標(biāo)板內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)品及樣品中所含的 VEGF 與酶標(biāo)板單抗結(jié)合反應(yīng)后，，將未反應(yīng)的游離成分洗去。然后加入生物素化的抗人-VEGF 抗體，結(jié)合在酶標(biāo)板單抗上的 Human-VEGF 與抗人-VEGF 抗體反應(yīng)后形成免疫復(fù)合物，洗去未反應(yīng)的細(xì)胞因子及抗體。接著加入親和素（標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶），免疫復(fù)合物與親和素反應(yīng)結(jié)合，洗去未反應(yīng)的游離因子。最后加入顯色劑，含 VEGF 的復(fù)合物與顯色劑結(jié)合后呈現(xiàn)藍(lán)色，此時加入終止液會變成黃色，并且 VEGF 含量越多，顏色越重。VEGF 的定量檢測是用酶標(biāo)儀在波長 450nm 下測 OD 值，OD450 值越高，標(biāo)本中 VEGF 含量越多，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線后，計算出標(biāo)本中 VEGF 濃度。

資料與方法………………………… 8

結(jié)果與分析……13

討 論……………………… 18

結(jié) 論………………… 24

第三章 討 論

1．ICH 與 VEGF
本研究結(jié)果顯示，顱內(nèi)出血早產(chǎn)兒生后1-3d血清VEGF水平高于對照組,且生后7-10d增高更加顯著,兩組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，表明VEGF參與了早產(chǎn)兒顱內(nèi)出血的病理改變及出血灶和周圍組織損傷的修復(fù)過程。有動物實驗表明[4]，腦出血后，血腫周圍組織細(xì)胞中VEGF會隨著出血時間的延長而表達(dá)增多,同時以FⅧ-RAg(標(biāo)記新生血管，由內(nèi)皮細(xì)胞合成)標(biāo)記的微血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量在出血后12 h-7 d也呈逐漸增多的趨勢。本研究結(jié)果中早產(chǎn)兒顱內(nèi)出血后VEGF水平升高與此一致，呈逐漸增高趨勢。VEGF動態(tài)變化可能是因為顱內(nèi)出血早產(chǎn)兒在生后1-3d，腦組織缺血缺氧，強烈誘導(dǎo)VEGF高表達(dá)，進而增加血管通透性，破壞血腦屏障并形成腦水腫，促使血清VEGF水平升高。而顱內(nèi)出血早產(chǎn)兒生后7-10d腦缺血缺氧逐漸緩解，組織修復(fù)逐漸增多，病變及周圍微血管開始修復(fù)，為了新血管形成和改善微循環(huán)，表達(dá)VEGF的組織細(xì)胞明顯增加，使得VEGF大量產(chǎn)生及分泌，與血管內(nèi)皮細(xì)胞的特異受體結(jié)合后，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，促進血管形成。故顱內(nèi)出血早產(chǎn)兒生后7-10d VEGF升高更加顯著。

2．ICH 與血小板參數(shù)
早產(chǎn)兒顱內(nèi)出血可以由多種因素所致，包括血管內(nèi)因素、血管因素和血管外因素，各種因素可以單一作用或共同作用而發(fā)病。早產(chǎn)兒顱內(nèi)出血多始發(fā)于生發(fā)基質(zhì)和脈絡(luò)叢，該部位的解剖結(jié)構(gòu)有如下特點[15.16]：（1）生發(fā)基質(zhì)是胎兒的膠質(zhì)細(xì)胞和胚胎的神經(jīng)元所在地，在胎齡 26-32 周，該區(qū)的血管密度大，分布面積明顯高于白質(zhì)區(qū)，但血管壁常常由單層內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成，血管走形不規(guī)則，缺少平滑肌及彈力纖維的支持，故對血流改變及血壓變化比較敏感，血流沖擊后其對抗能力較差，易破裂導(dǎo)致出血。隨著胎兒發(fā)育，胚芽組織的基質(zhì)逐漸衰減，等到胎齡 36 周時幾乎全部消失，血管的支持組織也變得強大，此時顱內(nèi)出血的發(fā)生率會有所下降。
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第四章 結(jié) 論

1 VEGF 及 PLT 參與了早產(chǎn)兒顱內(nèi)出血后的病理生理變化和損傷組織的修復(fù)過程。
2 VEGF 及血小板參數(shù)的聯(lián)合動態(tài)檢測對于判斷早產(chǎn)兒顱內(nèi)出血的病情演變及發(fā)展有一定的指導(dǎo)意義。
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參考文獻（略）