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生物制劑殘余DNA檢測方法的研究

摘要：生物制藥中一些生物細胞被用來作為生產(chǎn)用基質(zhì)的開發(fā)，雖然新的細胞基質(zhì)具有高效復制等優(yōu)點，但是來源于宿主細胞的殘余DNA也可能將一些不良基因傳遞給產(chǎn)品受種者。所以管理機構(gòu)需對產(chǎn)品進行嚴格的殘余DNA控制和檢測。本文分別探討了傳統(tǒng)方法中的DNA探針雜交法、熒光染料法和閾值法的優(yōu)缺點，并介紹了近幾年新興的實時定量PCR法、基于實時定量PCR檢測方法的SYBR Green和TaqMan檢測方法以及全基因組擴增技術(shù)，為我國殘余DNA檢測提供參考。
關(guān)鍵詞：殘余DNA；生物制劑；檢測方法

引言：生物制劑在醫(yī)藥行業(yè)中的應(yīng)用越來越廣泛，一些新的生物細胞比如中華倉鼠卵巢細胞、非洲綠猴腎細胞等被用來作為生產(chǎn)用基質(zhì)的開發(fā)也越來越常見。而生物制劑殘余DNA就是指在利用這些真核或原核生物細胞作為基質(zhì)生產(chǎn)生物產(chǎn)品時，宿主細胞的遺傳物質(zhì)DNA可能會傳遞給新的生物產(chǎn)品。由于宿主細胞在連續(xù)傳代時可能破壞其本身基因正常調(diào)控，一些本來不表達的有害基因可能在傳代過程中表達出來并傳遞給生物制劑，從而給人們的健康帶來極大地威脅。目前公認的殘余DNA的危害性有三種：免疫原性、感染性和致腫瘤性。
殘余的宿主細胞DNA作為生物制藥中的一個風險因素，尤其是制造生物產(chǎn)品時的DNA污染現(xiàn)被認為是細胞雜質(zhì)。生物制藥生產(chǎn)商必須確保最終產(chǎn)品中含有的起始細胞基質(zhì)中殘余宿主細胞DNA在最低水平。因此，WHO、歐盟、美國食品及藥物管理局還有其他的管理機構(gòu)都規(guī)定了特定的質(zhì)量控制和安全標準，要求所有的樣品不管是生產(chǎn)過程中的中間產(chǎn)品還是終產(chǎn)品都要可以被量化檢測。因此，如何快速批量并有效檢測殘余宿主細胞DNA、檢測技術(shù)的靈敏度、費用、是否容易被污染等也是人們一直關(guān)注的問題，本文探討了幾種常用的殘余DNA檢測方法的優(yōu)缺點，為人們檢測殘余DNA提供參考。

1 傳統(tǒng)殘余DNA檢測方法

1.1 DNA探針雜交法
DNA探針雜交法是我國和其他發(fā)展中國家最常用的檢測殘余DNA的方法之一。這種方法基于宿主變性DNA探針固定在膜上使其與來自宿主的殘余DNA互補堿基序列在結(jié)合來檢測殘余DNA的含量。DNA探針是宿主細胞DNA的標記地高辛，生物素或放射性同位素的特定片段，在雜交和洗滌之后，信號通過發(fā)光、放射自顯影或其它方法而被觀察。半定量分析就是通過與已知DNA標準品的信號強度對比而得到未知樣本中殘留DNA的含量。這種檢測方法簡單，，檢測靈敏度可達到的1-10pg的范圍[1]。

2 新興殘余DNA檢測方法

3 結(jié)語

隨著像重組蛋白、病毒疫苗等生物制藥技術(shù)在世界范圍內(nèi)應(yīng)用的越來越多，在我國相關(guān)的一些技術(shù)問題也越來越受到我們的關(guān)注。為了安全考慮，可能導致不可預(yù)知危害的殘余宿主細胞DNA在生產(chǎn)過程中必須被根除掉，檢測殘余宿主細胞DNA的技術(shù)經(jīng)過數(shù)年的發(fā)展進步，靈敏度也越來越高。以實時定量PCR為核心的相關(guān)檢測技術(shù)由于其高靈敏度、高通量、低成本等原因，正逐漸成為檢測部門的選擇對象。另外，針對大批量的標本，科研人員還開發(fā)了特異性的宿主細胞殘余DNA檢測試劑盒，為我國生物制藥等行業(yè)提供了較大的技術(shù)支持和便利。

參考文獻

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