根據(jù)木薯單拷貝木薯銅/鋅超氧化物歧化酶(Manihotesculenta copper/zinc superoxide dismutase,mSOD2)基因序列設(shè)計特異性引物和探針,建立木薯成分微滴數(shù)字PCR定量檢測方法,并測試了方法的特異性、靈敏度和適應(yīng)性,并建立了拷貝數(shù)濃度(copies/μL)與木薯質(zhì)量(mg)的線性關(guān)系。特異性測試表明,該方法特異于木薯成分檢測,定量下限(limit of quantitation,LOQ)和檢測下限(limit of detection,LOD)分別為1.67 copies/μL和0.28 copies/μL。對木薯質(zhì)量百分比為5%和25%樣本進行定量檢測,檢測結(jié)果經(jīng)線性關(guān)系換算得到的木薯含量分別為5.77%和23.32%,回收率分別為115.40%和93.26%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為3.53%～4.19%。表明該方法具有良好的適用性,可對質(zhì)量百分比為5%及以上木薯含量的樣品進行準(zhǔn)確定量。

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【部分圖文】：

圖1 木薯質(zhì)量與拷貝數(shù)濃度線性關(guān)系

表3木薯質(zhì)量與mSOD2基因拷貝數(shù)濃度測試質(zhì)量/mg拷貝數(shù)濃度/(copies/μL)平均值/(copies/μL)SD相對標(biāo)準(zhǔn)偏差/RSD1235.0081.8081.3081.2081.430.320.39%15.00244.0021....

圖5 適應(yīng)性測試熱點圖

圖4LOQ驗證3結(jié)論

圖2 木薯質(zhì)量(mg)與拷貝數(shù)濃度(copies/μL)測試熱點圖

圖1木薯質(zhì)量與拷貝數(shù)濃度線性關(guān)系2.3LOD和LOQ測定及驗證

圖3 LOD和LOQ測試熱點圖

表4LOD和LOQ測試結(jié)果DNA濃度/(ng/μL)拷貝數(shù)濃度/(copies/μL)平均值/(copies/μL)SD相對標(biāo)準(zhǔn)偏差/RSD12318.00101.5097.8095.0098.103.263.32%3.6017.3017....

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