通過(guò)電泳探究葵花籽粗油體中內(nèi)源性蛋白酶系的水解性質(zhì),以及用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)鑒定內(nèi)源性蛋白酶的種類。結(jié)果表明,油質(zhì)蛋白在pH 4～8水解速度相對(duì)較快,22 kDa球蛋白在pH 3～5水解速度相對(duì)較快,35 kDa球蛋白在pH 4～8水解速度相對(duì)較快�？ㄗ汛钟腕w中內(nèi)源性蛋白酶系在pH 4、50℃水解速度相對(duì)最快。通過(guò)抑制劑實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在pH 4下,葵花籽粗油體中有金屬蛋白酶類、天冬氨酸蛋白酶類、絲氨酸蛋白酶類的酶活表征,幾乎無(wú)半胱氨酸蛋白酶酶活的存在。通過(guò)LC-MS/MS分析發(fā)現(xiàn),葵花籽粗油體中存在金屬蛋白酶類、天冬氨酸蛋白酶類和絲氨酸蛋白酶類和天冬氨酸蛋白酶類抑制劑、絲氨酸蛋白酶類抑制劑以及半胱氨酸蛋白酶類抑制劑。研究結(jié)果為利用內(nèi)源性蛋白酶類進(jìn)行水相加工提供了理論基礎(chǔ)。

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【部分圖文】：

圖1不同pH下水解2h后粗油體還原性Tricine-SDS-PAGE(a)及油質(zhì)蛋白、22kDa球蛋白和35kDa球蛋白條帶灰度分析(b)

通過(guò)對(duì)圖1(a)的電泳圖進(jìn)行灰度分析得到圖1(b),發(fā)現(xiàn)在pH4、50℃下油質(zhì)蛋白水解速度最快,水浴2h后相對(duì)于空白被水解59%。油質(zhì)蛋白在pH3時(shí)水解速度較慢,2h水解不到4%,在pH5～pH8,油質(zhì)蛋白水解相對(duì)較快。這說(shuō)明葵花籽粗油體中的內(nèi)源性蛋白酶系偏向于中酸性....

圖2不同溫度下水解2h后粗油體還原性Tricine-SDS-PAGE(a)及油質(zhì)蛋白、22kDa球蛋白和35kDa球蛋白條帶灰度分析(b)

將稀釋后的粗油體調(diào)pH至4,置于30～80℃水解2h,取樣進(jìn)行Tricine-SDS-PAGE分析,結(jié)果見(jiàn)圖2。由圖2b可見(jiàn),在pH4時(shí),油質(zhì)蛋白在50℃時(shí)水解速度最快,2h可以水解59%左右。22kDa球蛋白也在50℃水解程度最大,2h可以水解28%,35kDa球蛋....

圖3添加不同抑制劑后油質(zhì)蛋白灰度分析

從圖3和添加不同抑制劑后對(duì)應(yīng)實(shí)驗(yàn)的電泳圖以及22kDa球蛋白與35kDa球蛋白灰度分析結(jié)果(圖略)可知,Pepstatin-A的添加對(duì)于油質(zhì)蛋白、22kDa和35kDa球蛋白的水解均有一定的抑制效果,AEBSF對(duì)葵花籽粗油體中的蛋白也有微弱的抑制效果,而E-64的添加對(duì)粗....

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