以食源性致病菌大腸桿菌為指示菌,研究抗菌肽brevilaterin與檸檬酸的協(xié)同抑菌效應(yīng)和機(jī)理,為抗菌肽和檸檬酸應(yīng)用于大腸桿菌的控制提供理論依據(jù)。利用DiSC₃(5)熒光探針考察brevilaterin與檸檬酸對(duì)大腸桿菌細(xì)胞膜電勢(shì)的影響,結(jié)果表明兩者單獨(dú)使用均能消散大腸桿菌的跨膜電勢(shì),兩者聯(lián)用呈現(xiàn)協(xié)同消散效果;通過(guò)碘化丙啶/SYTO 9探針標(biāo)記結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)考察brevilaterin與檸檬酸對(duì)細(xì)胞膜完整性的影響,結(jié)果表明brevilaterin與檸檬酸均會(huì)破壞細(xì)胞膜完整性;利用透射電子顯微鏡觀察大腸桿菌超微結(jié)構(gòu)的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)brevilaterin和檸檬酸聯(lián)用組對(duì)菌體超微結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)協(xié)同破壞作用,即細(xì)胞產(chǎn)生變形、發(fā)生質(zhì)壁分離與內(nèi)容物泄漏等;十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)果顯示brevilaterin、檸檬酸對(duì)大腸桿菌的蛋白質(zhì)合成沒(méi)有明顯影響;瓊脂糖凝膠電泳表明brevilaterin與檸檬酸可以降解大腸桿菌菌體DNA,兩者聯(lián)用呈現(xiàn)協(xié)同降解作用。綜上,brevilaterin與檸檬酸可通過(guò)破環(huán)細(xì)胞膜的完整性與降解菌體DNA以發(fā)揮協(xié)同抑制大腸桿菌的作用。

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【部分圖文】：

圖1brevilaterin與檸檬酸聯(lián)用對(duì)大腸桿菌的時(shí)間-殺菌曲線(xiàn)

通過(guò)時(shí)間-殺菌曲線(xiàn)研究了brevilaterin與檸檬酸聯(lián)用組合的抑菌動(dòng)力學(xué)，從圖1可以看出，brevilaterin、檸檬酸的MIC組和聯(lián)用組brevilaterin(1/4MIC）+檸檬酸（1/4MIC）在24h內(nèi)均呈現(xiàn)抑菌效果，且聯(lián)用組較brevilaterin(1/....

圖2brevilaterin與檸檬酸聯(lián)用對(duì)大腸桿菌細(xì)胞跨膜電勢(shì)的影響

DiSC3(5)是一種膜電位敏感染料，能夠在完整的極化細(xì)胞膜中累積，處于自猝滅狀態(tài)；當(dāng)膜電位被破壞時(shí)，染料被釋放到介質(zhì)中，DiSC3(5)熒光強(qiáng)度增加[18-19]。因此采用DiSC3(5)考察大腸桿菌細(xì)胞膜電勢(shì)的變化。如圖2所示，陰性對(duì)照組（Nig）、空白對(duì)照組熒光強(qiáng)....

圖4brevilaterin與檸檬酸聯(lián)用對(duì)大腸桿菌細(xì)胞膜完整性影響的熒光顯微圖

從圖4可以觀察到，未經(jīng)抑菌劑處理的對(duì)照組細(xì)胞僅被SYTO9染色，發(fā)出綠色熒光，表明細(xì)胞膜完整，而經(jīng)過(guò)brevilaterin(1/4MIC）組處理后，60%以上細(xì)胞發(fā)出紅色熒光；經(jīng)過(guò)brevilaterin(MIC）組處理后，幾乎所有細(xì)胞都發(fā)出橙紅色熒光。經(jīng)過(guò)檸檬酸（1/4....

圖5brevilaterin與檸檬酸聯(lián)用對(duì)大腸桿菌超微結(jié)構(gòu)影響的TEM圖

通過(guò)TEM觀察brevilaterin與檸檬酸對(duì)大腸桿菌菌體形態(tài)變化的影響，結(jié)果如圖5所示，空白對(duì)照組菌體形態(tài)完好、內(nèi)容物完整；brevilaterin(MIC）組的細(xì)胞發(fā)生形變、質(zhì)壁分離、細(xì)胞內(nèi)容物泄漏等變化[23]；檸檬酸（MIC）組細(xì)胞膜邊緣模糊且細(xì)胞內(nèi)容物泄漏，表明bre....

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