以菜用大豆為原料,直投式納豆芽孢桿菌作為發(fā)酵劑,納豆激酶活力作為評(píng)價(jià)指標(biāo),通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)優(yōu)化納豆激酶發(fā)酵工藝條件;通過(guò)鹽溶、硫酸銨分段鹽析、二乙氨乙基(DEAE)陰離子交換柱分離純化納豆激酶,并采用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)確定其分子質(zhì)量,并進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)和體外溶栓效果分析。結(jié)果表明,菜用大豆發(fā)酵生產(chǎn)納豆激酶的最佳條件為:每100 g蒸煮菜用大豆接入1.15×10¹¹CFU/g直投發(fā)酵劑,發(fā)酵溫度37℃、發(fā)酵時(shí)間36 h、后熟時(shí)間18 h時(shí),此時(shí)納豆激酶活力可達(dá)2 326.60 IU/g。納豆激酶的分子質(zhì)量介于25～35 kDa之間,最適作用溫度、pH值分別為37℃、8.0,當(dāng)溫度低于40℃、pH值在6.0～8.0時(shí)較穩(wěn)定;體外溶栓實(shí)驗(yàn)表明納豆激酶具有良好的體外溶栓效果。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與試劑
    1.2 儀器與設(shè)備
    1.3 方法
        1.3.1 納豆的制備工藝流程
        1.3.2 納豆激酶提取液的制備
        1.3.3 蛋白質(zhì)含量和納豆激酶活性分析
        1.3.4 納豆發(fā)酵條件的優(yōu)化
        1.3.5 納豆激酶的純化
        1.3.6 納豆激酶酶學(xué)性質(zhì)
        1.3.7 納豆激酶體外溶栓效果的研究
        1.3.8 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果與分析
    2.1 菜用大豆產(chǎn)納豆激酶發(fā)酵條件優(yōu)化的單因素試驗(yàn)
        2.1.1 發(fā)酵時(shí)間對(duì)酶活性的影響
        2.1.2 發(fā)酵溫度對(duì)酶活性的影響結(jié)果
        2.1.3 接種量對(duì)酶活性的影響結(jié)果
        2.1.4 后熟時(shí)間對(duì)酶活性的影響結(jié)果
    2.2 納豆發(fā)酵條件優(yōu)化正交試驗(yàn)
    2.3 納豆激酶的分離純化
        2.3.1 硫酸銨鹽析結(jié)果
        2.3.2 DEAE陰離子交換柱純化納豆激酶
        2.3.3 SDS-PAGE電泳檢測(cè)結(jié)果
        2.3.4 納豆激酶分離純化效果評(píng)價(jià)
    2.4 納豆激酶的酶學(xué)性質(zhì)研究
        2.4.1 納豆激酶的最適溫度及熱穩(wěn)定性
        2.4.2 納豆激酶的最適p H值及p H值穩(wěn)定性結(jié)果
        2.4.3 納豆激酶體外溶栓效果
3 結(jié)論



本文編號(hào)：3756186