為了提高檢測效率,節(jié)省時間、試劑和樣本,建立了基于高分辨率熔解曲線（high-resolution melting,HRM）的雙重環(huán)介導等溫擴增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技術用于羊乳中牛乳成分的檢測。通過引物設計優(yōu)化,牛引物目標產物的Tm值在80℃,羊引物目標產物的Tm值在83℃,由于在傳統熔解曲線中峰型有交叉重疊,同時檢測存在干擾,因此使用HRM技術,實現了2種不同動物源性成分的有效區(qū)分。該方法特異性好,不需要針對牛、羊源性成分單獨進行檢測,當體系中存在其中一種或兩種都存在時都可將其快速檢出,且對其他物種沒有交叉反應及假陽性現象的發(fā)生,成功應用于市售羊乳及其制品的檢測。 

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【文章目錄】：
1 材料與試劑
    1.1 實驗材料
    1.2 主要試劑和儀器
        1.2.1 試劑
        1.2.2 儀器
2 實驗方法
    2.1 DNA的提取
    2.2 LAMP引物設計及篩選
    2.3 LAMP-HRM反應體系建立及條件優(yōu)化
    2.4 LAMP-HRM反應特異性、靈敏度和牛羊乳不同混合比例檢測
    2.5 實際樣品檢測
3 結果與分析
    3.1 LAMP-HRM方法可行性
    3.2 LAMP-HRM反應體系的優(yōu)化
        3.2.1 反應溫度優(yōu)化
        3.2.2 引物濃度比優(yōu)化
    3.3 LAMP-HRM體系的特異性實驗、靈敏度檢測和牛羊乳不同混合比例檢測
        3.3.1 特異性檢測
        3.3.2 靈敏度檢測
        3.3.3 牛羊乳不同混合比例檢測
    3.4 市售樣品的應用性檢測
4 結論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]羊乳中牛乳成分的可視化環(huán)介導等溫擴增檢測方法[J]. 澹臺瑋,徐秦峰,張文娟,李艷妮.  陜西科技大學學報. 2020(01)
[2]羊乳制品摻假檢測技術研究進展[J]. 張昊陽,嚴林,黨高平,劉永峰.  中國乳業(yè). 2019(08)
[3]羊乳及其制品中摻入牛乳成分的雙重PCR檢測[J]. 宋宏新,劉建蘭,徐秦峰.  陜西科技大學學報. 2018(01)
[4]羊源性成分LAMP檢測方法的建立[J]. 徐淑菲,孔繁德,苗麗,林雙慶,林振基.  經濟動物學報. 2016(04)
[5]牛羊乳混摻檢測鑒別技術研究進展[J]. 張曉旭,葛武鵬,李寶寶,楊靜,耿偉,袁亞娟.  食品安全質量檢測學報. 2015(09)
[6]多重環(huán)介導等溫擴增技術研究進展[J]. 林文慧,鄒秉杰,宋沁馨,周國華.  遺傳. 2015(09)
[7]羊乳及其制品中摻入牛屬牛乳和水牛乳的檢測[J]. 黎穎,巫堅,林波,曾慶坤.  基因組學與應用生物學. 2015(05)

碩士論文
[1]乳及乳制品中牛羊源性成分的PCR高分辨熔解檢測方法研究[D]. 馬西亞.陜西科技大學 2019
[2]DNA在牛奶加工貯藏過程中變化規(guī)律研究及其在摻假鑒別中的應用[D]. 廖晶.陜西師范大學 2018



本文編號：3695703