為了提高檢測效率,節(jié)省時間、試劑和樣本,建立了基于高分辨率熔解曲線（high-resolution melting,HRM）的雙重環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技術(shù)用于羊乳中牛乳成分的檢測。通過引物設(shè)計優(yōu)化,牛引物目標(biāo)產(chǎn)物的Tm值在80℃,羊引物目標(biāo)產(chǎn)物的Tm值在83℃,由于在傳統(tǒng)熔解曲線中峰型有交叉重疊,同時檢測存在干擾,因此使用HRM技術(shù),實現(xiàn)了2種不同動物源性成分的有效區(qū)分。該方法特異性好,不需要針對牛、羊源性成分單獨進(jìn)行檢測,當(dāng)體系中存在其中一種或兩種都存在時都可將其快速檢出,且對其他物種沒有交叉反應(yīng)及假陽性現(xiàn)象的發(fā)生,成功應(yīng)用于市售羊乳及其制品的檢測。 

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與試劑
    1.1 實驗材料
    1.2 主要試劑和儀器
        1.2.1 試劑
        1.2.2 儀器
2 實驗方法
    2.1 DNA的提取
    2.2 LAMP引物設(shè)計及篩選
    2.3 LAMP-HRM反應(yīng)體系建立及條件優(yōu)化
    2.4 LAMP-HRM反應(yīng)特異性、靈敏度和牛羊乳不同混合比例檢測
    2.5 實際樣品檢測
3 結(jié)果與分析
    3.1 LAMP-HRM方法可行性
    3.2 LAMP-HRM反應(yīng)體系的優(yōu)化
        3.2.1 反應(yīng)溫度優(yōu)化
        3.2.2 引物濃度比優(yōu)化
    3.3 LAMP-HRM體系的特異性實驗、靈敏度檢測和牛羊乳不同混合比例檢測
        3.3.1 特異性檢測
        3.3.2 靈敏度檢測
        3.3.3 牛羊乳不同混合比例檢測
    3.4 市售樣品的應(yīng)用性檢測
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]羊乳中牛乳成分的可視化環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增檢測方法[J]. 澹臺瑋,徐秦峰,張文娟,李艷妮.  陜西科技大學(xué)學(xué)報. 2020(01)
[2]羊乳制品摻假檢測技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 張昊陽,嚴(yán)林,黨高平,劉永峰.  中國乳業(yè). 2019(08)
[3]羊乳及其制品中摻入牛乳成分的雙重PCR檢測[J]. 宋宏新,劉建蘭,徐秦峰.  陜西科技大學(xué)學(xué)報. 2018(01)
[4]羊源性成分LAMP檢測方法的建立[J]. 徐淑菲,孔繁德,苗麗,林雙慶,林振基.  經(jīng)濟(jì)動物學(xué)報. 2016(04)
[5]牛羊乳混摻檢測鑒別技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 張曉旭,葛武鵬,李寶寶,楊靜,耿偉,袁亞娟.  食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報. 2015(09)
[6]多重環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 林文慧,鄒秉杰,宋沁馨,周國華.  遺傳. 2015(09)
[7]羊乳及其制品中摻入牛屬牛乳和水牛乳的檢測[J]. 黎穎,巫堅,林波,曾慶坤.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2015(05)

碩士論文
[1]乳及乳制品中牛羊源性成分的PCR高分辨熔解檢測方法研究[D]. 馬西亞.陜西科技大學(xué) 2019
[2]DNA在牛奶加工貯藏過程中變化規(guī)律研究及其在摻假鑒別中的應(yīng)用[D]. 廖晶.陜西師范大學(xué) 2018



本文編號：3695703