為實(shí)現(xiàn)魚類及其制品摻假的快速鑒別,以藍(lán)鰭金槍魚（Thunnus thynnus）線粒體DNA的D-loop區(qū)、裸蓋魚（Anoplopoma fimbria）線粒體DNA的16S rRNA基因及異鱗蛇鯖（Lepidocybium flavobrunneum）線粒體DNA的ND4L基因?yàn)榘形稽c(diǎn),設(shè)計(jì)擴(kuò)增產(chǎn)物熔解溫度（Tm）具有顯著性差異的特異性引物,建立一種快速鑒別魚類及其制品中藍(lán)鰭金槍魚、裸蓋魚、異鱗蛇鯖源性成分的3重實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)熔解曲線分析法,通過引物特異性、靈敏度及市售樣品的檢測,對該方法進(jìn)行檢驗(yàn)和評價(jià)。結(jié)果表明:構(gòu)建優(yōu)化的方法具有良好的特異性及靈敏度,單物種DNA檢出限為0.001 ng,多物種混合DNA檢出限均為0.1 ng,藍(lán)鰭金槍魚、裸蓋魚、異鱗蛇鯖源性成分的相對檢出限分別為0.5%、1%、0.5%,通過對市售樣品的檢測表明,該方法可用于實(shí)際樣品摻假的快速鑒別。 

【文章來源】：食品科學(xué). 2020,41(24)北大核心EICSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

real-time PCR體系的特異性

配制藍(lán)鰭金槍魚、裸蓋魚、異鱗蛇鯖的混合肉樣（各物種源性成分含量比例相同，物種組合見表4），提取各樣品D N A，以提取的D N A為模板進(jìn)行多重real-time PCR擴(kuò)增，并分析熔解曲線，再次驗(yàn)證所建多重real-time PCR體系的特異性，同時(shí)確定各物種成分熔解溫度（Tm）分布范圍。分析各樣品熔解曲線圖，結(jié)果如圖2、3所示，所檢樣品的熔解曲線峰位置、峰個(gè)數(shù)均與樣品的物種源性成分組成相對應(yīng)，均沒有非特異性峰出現(xiàn)的現(xiàn)象，進(jìn)一步表明建立的多重real-time PCR體系具有很好的特異性。3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)并計(jì)算各物種源性成分的Tm值，計(jì)算結(jié)果見表4。實(shí)驗(yàn)并統(tǒng)計(jì)不同引物濃度體系、不同模板濃度中3種魚類的Tm值分布情況，由統(tǒng)計(jì)結(jié)果可知3種魚類源性成分的熔解溫度分布段分別為藍(lán)鰭金槍魚源性成分Tm值（74.98±0.60）℃、裸蓋魚源性成分Tm值（78.65±0.71）℃、異鱗蛇鯖源性成分Tm值（82.38±0.25）℃，各物種源性成分的Tm值均有偏移，異鱗蛇鯖源性成分的Tm值漂移范圍最小，為0.5℃，裸蓋魚源性成分的Tm值漂移范圍最大，為1.42℃，整體看來各物種源性成分的Tm值偏移跨度較小，表明所建方法穩(wěn)定性較好；各物種源性成分Tm值范圍之間相互不交叉，因此，分析所檢測樣品熔解曲線，根據(jù)譜圖中溶解峰數(shù)和溫度范圍（即峰的位置）能準(zhǔn)確判定所檢樣品中含有的物種。圖2 多重real-time PCR檢測各混合樣DNA的熔解曲線

所建real-time PCR體系檢測3種魚類混合DNA的熔解曲線

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3621837