以牡丹籽蛋白為原料,采用堿性蛋白酶和中性蛋白酶酶解制備牡丹籽蛋白水解產(chǎn)物�？疾炝藟A性蛋白酶和中性蛋白酶水解產(chǎn)物在不同酶解時(shí)間下的分子量分布、氨基酸組成及抗氧化活性。研究結(jié)果表明堿性蛋白酶僅酶解1h即可完全水解牡丹籽蛋白所有的條帶,并產(chǎn)生一系列小于15kDa的小分子量條帶,而中性蛋白酶只能有限地水解牡丹籽蛋白。堿性蛋白酶能顯著性地提高蛋白的ABTS和·OH自由基清除活性,尤其在酶解4h時(shí)清除率分別達(dá)到51.22%和73.66%。牡丹籽蛋白富含天冬氨酸和谷氨酸（23.33%～28.61%）,賦予堿性蛋白酶和中性蛋白酶水解產(chǎn)物較好的Fe2+鰲合能力。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)調(diào)味品. 2020,45(12)北大核心

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酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

分子量的大小和氨基酸組成是影響多肽生物活性和功能特性的兩個(gè)重要因素。以往的研究表明，蛋白質(zhì)水解物擁有高含量低分子量肽的抗氧化作用強(qiáng)于高分子量肽。堿性蛋白酶和中性蛋白酶酶解牡丹籽蛋白還原性SDS-PAGE電泳見圖2。由圖2可知，在還原性條件下，牡丹籽蛋白（TPSP）的電泳條帶主要包括60,48,38,23kDa 4個(gè)條帶。根據(jù)Gao等先前的結(jié)果，60kDa條帶是TPSP中的主要組分，其主要由酸性亞基（38kDa）和堿性亞基（23kDa）組成。在中性蛋白酶水解物中分子量為48,38,23kDa的3個(gè)條帶消失，一些小分子量條帶經(jīng)中性蛋白酶酶解后出現(xiàn)在分子量15kDa以下，而60kDa的條帶隨著時(shí)間的增加并未發(fā)生改變。對(duì)于堿性蛋白酶水解物，在牡丹籽蛋白中出現(xiàn)的所有蛋白質(zhì)條帶均完全消失，產(chǎn)生的低分子量條帶（<15kDa）強(qiáng)度隨著水解時(shí)間的增加而逐漸增加。Shazly等[15]也得到了類似的結(jié)果。他們報(bào)道稱在還原條件下，堿性蛋白酶可廣泛水解所有酪蛋白組分，產(chǎn)生<3.5kDa的分子量條帶在SDS-PAGE圖譜中。在長(zhǎng)達(dá)4h的水解過(guò)程中，經(jīng)堿性蛋白酶水解的水解物中觀察到了從較高分子量帶向較低分子量帶的明顯轉(zhuǎn)變，說(shuō)明堿性蛋白酶具有較強(qiáng)的水解牡丹籽蛋白的能力，這可能是因?yàn)閴A性蛋白酶是一種非特異性的內(nèi)肽酶，適于生產(chǎn)小分子量肽，同時(shí)這也可能有利于獲得具有較高活性的抗氧化肽。

作為在人體內(nèi)產(chǎn)生的活性氧種類之一，·OH自由基可以很容易地與生物分子發(fā)生反應(yīng)，例如氨基酸、蛋白質(zhì)、DNA，并導(dǎo)致機(jī)體生理異常。因此，清除·OH自由基可以防止某些疾病的產(chǎn)生。牡丹籽蛋白及其酶解產(chǎn)物（濃度1.5mg/mL）對(duì)·OH自由基的清除能力見圖4。由圖4可知，堿性蛋白酶和中性蛋白酶水解產(chǎn)物清除·OH自由基的效果相當(dāng)。在水解的1h時(shí)，堿性蛋白酶和中性蛋白酶酶解并未明顯提高蛋白的·OH自由基清除能力，而隨著水解反應(yīng)的進(jìn)一步進(jìn)行，水解物的·OH自由基清除活性顯著性增加。當(dāng)水解反應(yīng)到3h時(shí)，堿性蛋白酶和中性蛋白酶水解物對(duì)·OH自由基的清除能力從45.69%(TPSP）分別增加到69.81%和70.3%。在整個(gè)水解過(guò)程中，中性蛋白酶水解物的最大清除率發(fā)生在水解3h時(shí)。然而，對(duì)于堿性蛋白酶水解物，·OH自由基清除能力的變化趨勢(shì)與ABTS自由基清除活性相似，隨著水解時(shí)間的增加而增加，在水解反應(yīng)4 h時(shí)達(dá)到最大清除率73.66%。堿性蛋白酶和中性蛋白酶在酶解1h后可提高蛋白的·OH自由基清除能力，這可能是由于隨著水解反應(yīng)的進(jìn)行更多的HAA被釋放出來(lái)。

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號(hào)：3309698