酶解牡丹籽蛋白抗氧化特性的研究
發(fā)布時間：2021-07-29 16:53
以牡丹籽蛋白為原料,采用堿性蛋白酶和中性蛋白酶酶解制備牡丹籽蛋白水解產(chǎn)物�？疾炝藟A性蛋白酶和中性蛋白酶水解產(chǎn)物在不同酶解時間下的分子量分布、氨基酸組成及抗氧化活性。研究結(jié)果表明堿性蛋白酶僅酶解1h即可完全水解牡丹籽蛋白所有的條帶,并產(chǎn)生一系列小于15kDa的小分子量條帶,而中性蛋白酶只能有限地水解牡丹籽蛋白。堿性蛋白酶能顯著性地提高蛋白的ABTS和·OH自由基清除活性,尤其在酶解4h時清除率分別達到51.22%和73.66%。牡丹籽蛋白富含天冬氨酸和谷氨酸（23.33%～28.61%）,賦予堿性蛋白酶和中性蛋白酶水解產(chǎn)物較好的Fe2+鰲合能力。
【文章來源】：中國調(diào)味品. 2020,45(12)北大核心
【文章頁數(shù)】：6 頁
【部分圖文】：
酪氨酸標準曲線
分子量的大小和氨基酸組成是影響多肽生物活性和功能特性的兩個重要因素。以往的研究表明，蛋白質(zhì)水解物擁有高含量低分子量肽的抗氧化作用強于高分子量肽。堿性蛋白酶和中性蛋白酶酶解牡丹籽蛋白還原性SDS-PAGE電泳見圖2。由圖2可知，在還原性條件下，牡丹籽蛋白（TPSP）的電泳條帶主要包括60,48,38,23kDa 4個條帶。根據(jù)Gao等先前的結(jié)果，60kDa條帶是TPSP中的主要組分，其主要由酸性亞基（38kDa）和堿性亞基（23kDa）組成。在中性蛋白酶水解物中分子量為48,38,23kDa的3個條帶消失，一些小分子量條帶經(jīng)中性蛋白酶酶解后出現(xiàn)在分子量15kDa以下，而60kDa的條帶隨著時間的增加并未發(fā)生改變。對于堿性蛋白酶水解物，在牡丹籽蛋白中出現(xiàn)的所有蛋白質(zhì)條帶均完全消失，產(chǎn)生的低分子量條帶（<15kDa）強度隨著水解時間的增加而逐漸增加。Shazly等[15]也得到了類似的結(jié)果。他們報道稱在還原條件下，堿性蛋白酶可廣泛水解所有酪蛋白組分，產(chǎn)生<3.5kDa的分子量條帶在SDS-PAGE圖譜中。在長達4h的水解過程中，經(jīng)堿性蛋白酶水解的水解物中觀察到了從較高分子量帶向較低分子量帶的明顯轉(zhuǎn)變，說明堿性蛋白酶具有較強的水解牡丹籽蛋白的能力，這可能是因為堿性蛋白酶是一種非特異性的內(nèi)肽酶，適于生產(chǎn)小分子量肽，同時這也可能有利于獲得具有較高活性的抗氧化肽。
作為在人體內(nèi)產(chǎn)生的活性氧種類之一，·OH自由基可以很容易地與生物分子發(fā)生反應(yīng)，例如氨基酸、蛋白質(zhì)、DNA，并導(dǎo)致機體生理異常。因此，清除·OH自由基可以防止某些疾病的產(chǎn)生。牡丹籽蛋白及其酶解產(chǎn)物（濃度1.5mg/mL）對·OH自由基的清除能力見圖4。由圖4可知，堿性蛋白酶和中性蛋白酶水解產(chǎn)物清除·OH自由基的效果相當。在水解的1h時，堿性蛋白酶和中性蛋白酶酶解并未明顯提高蛋白的·OH自由基清除能力，而隨著水解反應(yīng)的進一步進行，水解物的·OH自由基清除活性顯著性增加。當水解反應(yīng)到3h時，堿性蛋白酶和中性蛋白酶水解物對·OH自由基的清除能力從45.69%(TPSP）分別增加到69.81%和70.3%。在整個水解過程中，中性蛋白酶水解物的最大清除率發(fā)生在水解3h時。然而，對于堿性蛋白酶水解物，·OH自由基清除能力的變化趨勢與ABTS自由基清除活性相似，隨著水解時間的增加而增加，在水解反應(yīng)4 h時達到最大清除率73.66%。堿性蛋白酶和中性蛋白酶在酶解1h后可提高蛋白的·OH自由基清除能力，這可能是由于隨著水解反應(yīng)的進行更多的HAA被釋放出來。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]洋蔥蛋白及多肽的制備及其體外抗氧化活性評價[J]. 趙璇. 中國調(diào)味品. 2020(02)
[2]調(diào)味香料丁香精油的生物活性及其在食品保鮮中的應(yīng)用研究進展[J]. 王穎,孫璐,柴冉,王娟娟,李榮,姜子濤. 中國調(diào)味品. 2020(02)
[3]抗氧化劑在淡鹽青魚干加工和貯藏中的應(yīng)用研究[J]. 盧蕓,周瑩,董雪萌,張利文,戴陽軍. 中國調(diào)味品. 2020(01)
[4]蕎麥多酚在鹵豬肉制品防腐保鮮中的應(yīng)用[J]. 郝教敏,楊文平,靳明凱,楊珍平,徐向昕,高志強. 中國調(diào)味品. 2019(12)
[5]牡丹籽中營養(yǎng)和功能性成分研究進展[J]. 袁琴琴,劉文營. 食品工業(yè)科技. 2019(17)
[6]裙帶菜多肽的制備及其抗氧化活性的研究[J]. 畢秋蕓. 中國調(diào)味品. 2019(05)
[7]玉米蛋白水解物對生雞肉糜脂質(zhì)氧化的影響[J]. 許瑞雪,劉曉蘭. 中國調(diào)味品. 2016(08)
[8]羊軟骨膠原蛋白水解物在羊肉糜中抗氧化效果研究[J]. 呼和木其爾,楊志榮,阿茹汗,楊曉霞,莎麗娜. 食品科技. 2016(07)
[9]北五昧子藤莖三萜抗氧化活性研究[J]. 李斌,李元甦,孟憲軍,薛雪,朱力杰. 食品工業(yè)科技. 2012(03)
碩士論文
[1]酶法制備玉米高F值寡肽及其抗疲勞活性的研究[D]. 劉金偉.山東輕工業(yè)學(xué)院 2012
本文編號：3309698
【文章來源】：中國調(diào)味品. 2020,45(12)北大核心
【文章頁數(shù)】：6 頁
【部分圖文】：
酪氨酸標準曲線
分子量的大小和氨基酸組成是影響多肽生物活性和功能特性的兩個重要因素。以往的研究表明，蛋白質(zhì)水解物擁有高含量低分子量肽的抗氧化作用強于高分子量肽。堿性蛋白酶和中性蛋白酶酶解牡丹籽蛋白還原性SDS-PAGE電泳見圖2。由圖2可知，在還原性條件下，牡丹籽蛋白（TPSP）的電泳條帶主要包括60,48,38,23kDa 4個條帶。根據(jù)Gao等先前的結(jié)果，60kDa條帶是TPSP中的主要組分，其主要由酸性亞基（38kDa）和堿性亞基（23kDa）組成。在中性蛋白酶水解物中分子量為48,38,23kDa的3個條帶消失，一些小分子量條帶經(jīng)中性蛋白酶酶解后出現(xiàn)在分子量15kDa以下，而60kDa的條帶隨著時間的增加并未發(fā)生改變。對于堿性蛋白酶水解物，在牡丹籽蛋白中出現(xiàn)的所有蛋白質(zhì)條帶均完全消失，產(chǎn)生的低分子量條帶（<15kDa）強度隨著水解時間的增加而逐漸增加。Shazly等[15]也得到了類似的結(jié)果。他們報道稱在還原條件下，堿性蛋白酶可廣泛水解所有酪蛋白組分，產(chǎn)生<3.5kDa的分子量條帶在SDS-PAGE圖譜中。在長達4h的水解過程中，經(jīng)堿性蛋白酶水解的水解物中觀察到了從較高分子量帶向較低分子量帶的明顯轉(zhuǎn)變，說明堿性蛋白酶具有較強的水解牡丹籽蛋白的能力，這可能是因為堿性蛋白酶是一種非特異性的內(nèi)肽酶，適于生產(chǎn)小分子量肽，同時這也可能有利于獲得具有較高活性的抗氧化肽。
作為在人體內(nèi)產(chǎn)生的活性氧種類之一，·OH自由基可以很容易地與生物分子發(fā)生反應(yīng)，例如氨基酸、蛋白質(zhì)、DNA，并導(dǎo)致機體生理異常。因此，清除·OH自由基可以防止某些疾病的產(chǎn)生。牡丹籽蛋白及其酶解產(chǎn)物（濃度1.5mg/mL）對·OH自由基的清除能力見圖4。由圖4可知，堿性蛋白酶和中性蛋白酶水解產(chǎn)物清除·OH自由基的效果相當。在水解的1h時，堿性蛋白酶和中性蛋白酶酶解并未明顯提高蛋白的·OH自由基清除能力，而隨著水解反應(yīng)的進一步進行，水解物的·OH自由基清除活性顯著性增加。當水解反應(yīng)到3h時，堿性蛋白酶和中性蛋白酶水解物對·OH自由基的清除能力從45.69%(TPSP）分別增加到69.81%和70.3%。在整個水解過程中，中性蛋白酶水解物的最大清除率發(fā)生在水解3h時。然而，對于堿性蛋白酶水解物，·OH自由基清除能力的變化趨勢與ABTS自由基清除活性相似，隨著水解時間的增加而增加，在水解反應(yīng)4 h時達到最大清除率73.66%。堿性蛋白酶和中性蛋白酶在酶解1h后可提高蛋白的·OH自由基清除能力，這可能是由于隨著水解反應(yīng)的進行更多的HAA被釋放出來。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]洋蔥蛋白及多肽的制備及其體外抗氧化活性評價[J]. 趙璇. 中國調(diào)味品. 2020(02)
[2]調(diào)味香料丁香精油的生物活性及其在食品保鮮中的應(yīng)用研究進展[J]. 王穎,孫璐,柴冉,王娟娟,李榮,姜子濤. 中國調(diào)味品. 2020(02)
[3]抗氧化劑在淡鹽青魚干加工和貯藏中的應(yīng)用研究[J]. 盧蕓,周瑩,董雪萌,張利文,戴陽軍. 中國調(diào)味品. 2020(01)
[4]蕎麥多酚在鹵豬肉制品防腐保鮮中的應(yīng)用[J]. 郝教敏,楊文平,靳明凱,楊珍平,徐向昕,高志強. 中國調(diào)味品. 2019(12)
[5]牡丹籽中營養(yǎng)和功能性成分研究進展[J]. 袁琴琴,劉文營. 食品工業(yè)科技. 2019(17)
[6]裙帶菜多肽的制備及其抗氧化活性的研究[J]. 畢秋蕓. 中國調(diào)味品. 2019(05)
[7]玉米蛋白水解物對生雞肉糜脂質(zhì)氧化的影響[J]. 許瑞雪,劉曉蘭. 中國調(diào)味品. 2016(08)
[8]羊軟骨膠原蛋白水解物在羊肉糜中抗氧化效果研究[J]. 呼和木其爾,楊志榮,阿茹汗,楊曉霞,莎麗娜. 食品科技. 2016(07)
[9]北五昧子藤莖三萜抗氧化活性研究[J]. 李斌,李元甦,孟憲軍,薛雪,朱力杰. 食品工業(yè)科技. 2012(03)
碩士論文
[1]酶法制備玉米高F值寡肽及其抗疲勞活性的研究[D]. 劉金偉.山東輕工業(yè)學(xué)院 2012
本文編號：3309698
本文鏈接：http://sikaile.net/wenshubaike/jieribaike/3309698.html
