本文關(guān)鍵詞：大學(xué)生“宅”現(xiàn)象與高校思想政治教育對策研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】目的探討miRNA-21對大鼠糖尿病腎病TGF-β/Smad信號通路的調(diào)控作用及機制。方法一．體外細(xì)胞實驗1.通過實時熒光定量PCR檢測高糖和低糖條件下培養(yǎng)的腎小管上皮細(xì)胞miRNA-21表達的差異。2.用生物信息學(xué)方法，預(yù)測、篩選miRNA-21作用的靶基因，并分別構(gòu)建野生型和突變型Smad7表達質(zhì)粒，體外轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，用雙熒光素酶報告基因驗證其靶基因。3.構(gòu)建miRNA-21過表達慢病毒，分別轉(zhuǎn)染高低糖培養(yǎng)的腎小管上皮細(xì)胞，用倒置熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白情況；用流式細(xì)胞儀檢測其轉(zhuǎn)染率；用實時熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)染后miRNA-21的表達量；用MTT法檢測腎小管上皮細(xì)胞增殖情況；用Westernblot檢測TGF-β/Smad信號通路Smad7的表達情況。二．動物實驗1.用三聯(lián)法（先切除大鼠左腎后，用高糖、高脂飲食誘導(dǎo)2月，再小劑量腹腔注射STZ）構(gòu)建SD大鼠糖尿病腎病模型。2.SD大鼠分為DN組、miRNA-21過表達慢病毒組、空載病毒組、正常飲食組。連續(xù)3次空腹血糖≥7.0mmol/L，24h尿蛋白＞140mg/L視為建模成功。3.通過尾靜脈注射miRNA-21過表達慢病毒及空病毒。4.1月后處死大鼠，取血查尿素氮。5.用實時熒光定量PCR檢測miRNA-21在腎組織中的表達。6.用HE染色、PAS染色觀察腎臟形態(tài)學(xué)改變；用透射電鏡觀察腎臟超微結(jié)構(gòu)變化。7.用免疫組織化學(xué)法檢測Smad7、Smad2、Smad3蛋白的表達。8.用Westernblot檢測腎組織中Smad7、Smad2、Smad3蛋白的表達并行比較。結(jié)果一．體外細(xì)胞實驗1.與低糖對照組相比，miRNA-21在高糖培養(yǎng)的腎小管上皮細(xì)胞中表達降低（p＜0.05）。2.根據(jù)生物信息學(xué)分析，Smad7可能是miRNA-21作用的靶基因，此預(yù)測在雙熒光素酶報告基因中得到證實。3.流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示：miRNA-21過表達慢病毒體外轉(zhuǎn)染腎小管上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率均在60%以上。4.實時熒光定量PCR結(jié)果顯示：高糖培養(yǎng)的腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過表達慢病毒后，miRNA-21的表達顯著上調(diào)（p＜0.05）。5.MTT法結(jié)果顯示：在轉(zhuǎn)染miRNA-21過表達慢病毒的腎小管上皮細(xì)胞中，高、低糖細(xì)胞轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞增殖能力低于高糖細(xì)胞組及空病毒對照組（p＜0.05）。6.Westernblot結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染miRNA-21過表達慢病毒后Smad7蛋白的表達低于高糖空病毒組、低糖組和高糖組（p＜0.05）。二．動物實驗結(jié)果(一)、糖尿病腎病模型成功1.空腹血糖：正常組空腹血糖平均值為4.637mmol/L，均＜7mmol/L。3組實驗組空腹血糖平均值為13.04mmol/L，均≥7.0mmol/L。2.腎功能情況2.124小時尿蛋白正常組24小時尿蛋白平均值為118mg/L，均＜140mg/L。3組實驗組24小時尿蛋白平均值為313mg/L，均＞140mg/L。2.2尿素氮正常組：尿毒氮平均值為6.2mmol/L,均＜8.2mmol/L。3組實驗組：尿毒氮平均值12.1mmol/L,均＞8.2mmol/L。（二）、qPCR結(jié)果顯示：注入過表達慢病毒后腎臟組織的miRNA-21的表達比空病毒組和DN組升高，差異有顯著性(P＜0.05)。（三）、形態(tài)學(xué)改變1.HE染色結(jié)果正常組：腎臟組織結(jié)構(gòu)正常，未見系膜細(xì)胞、系膜基質(zhì)增生，基底膜無增厚，腎小球大小正常，腎小管未見病變。DN組：腎小球腫脹、系膜基質(zhì)增生，伴少量系膜細(xì)胞增生，腎小管上皮腫脹。miRNA-21慢病毒組：腎小球系膜細(xì)胞增生不明顯，少量系膜基質(zhì)增生，腎小管上皮細(xì)胞空泡變性�？詹《窘M腎組織病變類似于DN組。2.PAS染色結(jié)果正常組：未見系膜細(xì)胞、系膜基質(zhì)增生，基底膜無增厚，腎小球大小正常，腎小管未見病變。DN組：腎小球腫脹、伴少量系膜細(xì)胞增生，腎小管上皮細(xì)胞腫脹，系膜基質(zhì)增生。miRNA-21慢病毒組：腎小球系膜細(xì)胞增生不明顯，少量系膜基質(zhì)增生，腎小管上皮細(xì)胞空泡變性空病毒組腎組織病變與DN組相似。3.投射電鏡結(jié)果正常組：腎臟組織結(jié)構(gòu)正常，腎小球形態(tài)完好，基底膜、足突結(jié)構(gòu)清晰，腎小管上皮細(xì)胞正常。DN組：足突融合，基底膜增厚，溶酶體數(shù)量增多。miRNA-21慢病毒組：系膜細(xì)胞泡沫化，增生，局部基底膜增厚，溶酶體數(shù)量增多，足突融合，腎小管正常，無免疫復(fù)合物沉積�？詹《窘M：可見足突融合，基底膜增厚，近端小管溶酶體增多，遠端小管：微絨毛少。（四）、免疫組織化學(xué)法結(jié)果：Smad7在正常組的胞漿呈弱陽性反應(yīng)；在DN組及空病毒組，呈強陽性反應(yīng)，胞漿可見到深棕褐色著色；在miRNA-21慢病毒組呈弱陽性反應(yīng)，胞漿棕黃色著色明顯減少(P＜0.05)。Smad2、Smad3在正常組的胞漿均呈陰性反應(yīng)；在DN組及空病毒組，呈弱陽性反應(yīng)，胞漿可見到棕黃色著色；在miRNA-21慢病毒組呈陰性反應(yīng)，胞漿未見棕黃色著色(P＜0.05)。（五）、Westernblot結(jié)果顯示：腎組織的Smad7、Smad2、Smad3蛋白的表達均較空病毒組、DN組明顯降低（(P＜0.05)。結(jié)論1.miRNA-21在體外可以抑制腎小管上皮細(xì)胞的增殖，，抑制Smad7蛋白的表達。2.miRNA-21在體內(nèi)可以緩解大鼠的DN進展，可能是通過抑制Smad7、Smad2、Smad3蛋白的表達來實現(xiàn)的。干預(yù)這一過程可能是一個預(yù)防和治療DN的新途徑。
【作者】林莉；
【導(dǎo)師】甘華；
【作者基本信息】重慶醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)科學(xué)，2014，博士
【關(guān)鍵詞】miRNA-21；轉(zhuǎn)染；TGF-β/Smad；糖尿病腎�。�

【參考文獻】
[1]朱生旺.f-x,y域三維道內(nèi)插[J].石油地球物理勘探,1997,01:117-123+154.
[2]賈真珠.漢韓存現(xiàn)句比較研究[D].揚州大學(xué),語言學(xué)及應(yīng)用語言學(xué),2012,碩士.
[3]張萍.企業(yè)法治文化研究[D].華東政法大學(xué),法學(xué),2012,碩士.
[4]張世成.抗蟲基因cry3Bb*對早粳稻空育131的轉(zhuǎn)化[D].黑龍江大學(xué),生物化學(xué)與分子生物學(xué),2013,碩士.
[5]程文.大學(xué)生“宅”現(xiàn)象與高校思想政治教育對策研究[D].華中師范大學(xué),思想政治教育,2013,碩士.
[6]蘇潔.國有資源型涉外企業(yè)跨文化管理路徑研究[D].北京化工大學(xué),工商管理（專業(yè)學(xué)位）,2013,碩士.
[7]孫晨.基于概念格的關(guān)聯(lián)規(guī)則挖掘研究與實現(xiàn)[D].西安電子科技大學(xué),計算機軟件與理論,2011,碩士.
[8]趙華國.滾筒式切頭飛剪結(jié)構(gòu)介紹[J].一重技術(shù).2003(01)
[9]譚國文.LED光學(xué)模具結(jié)構(gòu)設(shè)計與分析[D].廣東工業(yè)大學(xué),機械設(shè)計及理論（專業(yè)學(xué)位）,2014,碩士.
[10]孫云霞.我國的無權(quán)占有制度研究[D].首都經(jīng)濟貿(mào)易大學(xué),法律（專業(yè)學(xué)位）,2013,碩士.
[11]魏小強,雷秀麗,馬慶珍.基于多道奇異譜分析的三維地震數(shù)據(jù)規(guī)則化方法[J].石油地球物理勘探,2014,05:846-851+817.
[12]欒恬靜.社區(qū)圖書館建筑設(shè)計研究[D].湖南大學(xué),建筑學(xué),2011,碩士.
[13]王慧芳.中日互聯(lián)網(wǎng)治理比較研究[D].中國礦業(yè)大學(xué),行政管理,2014,碩士.
[14]徐麗.初中語文教科書文言文練習(xí)系統(tǒng)研究[D].內(nèi)蒙古師范大學(xué),課程與教學(xué)論,2012,碩士.
[15]曲文敬.Java語言的異常處理機制的公理語義[D].大連理工大學(xué),計算機應(yīng)用技術(shù),2004,碩士.
[16]尹浩.基于光纖傳感技術(shù)的液化石油氣運輸槽罐泄漏檢測關(guān)鍵技術(shù)研究[D].安徽大學(xué),光學(xué),2014,碩士.
[17]馬文潔.貝葉斯壓縮感知在DOA估計中的應(yīng)用研究[D].哈爾濱工業(yè)大學(xué),信息與通信工程,2014,碩士.
[18]張瑞杰.證券市場虛假陳述糾紛仲裁制度研究[D].蘭州大學(xué),仲裁法（專業(yè)學(xué)位）,2013,碩士.
[19]記者劉霞.光電轉(zhuǎn)化可在50飛秒內(nèi)完成[N].科技日報,2015-04-16001.
[20]田辛玲.省市級區(qū)域性數(shù)字圖書館建設(shè)模式研究[D].吉林大學(xué),2004.
[21]秦彩霞.園丁隱喻及其教育反思[D].蘇州大學(xué),教育學(xué)原理,2014,碩士.
[22]刁浩峰.基于XFEM的裂紋擴展分析[D].浙江理工大學(xué),車輛工程,2014,碩士.
[23]高輝,張銳.改進實數(shù)編碼量子進化算法及其在參數(shù)估計中的應(yīng)用[J].控制與決策,2011,03:418-422.
[24]陳磊.中國平安并購深發(fā)展經(jīng)濟動因和績效研究[D].貴州財經(jīng)大學(xué),金融,2013,碩士.
[25]張挺.功能磁共振與術(shù)中直接皮層電刺激定位初級運動區(qū)的對照研究[D].中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院,外科學(xué),2013,碩士.
[26]崔健.MDR-Pa引起肺部感染在ICU中的危險因素以及耐藥基因分析[D].南昌大學(xué),內(nèi)科學(xué),2014,碩士.
[27]劉茜.證券公司客戶關(guān)系管理的建議[J].西南金融,2004,05:36-37.
[28]孫毅嶸.中國水務(wù)市場并購戰(zhàn)略研究[D].華東理工大學(xué),工商管理（專業(yè)學(xué)位）,2013,碩士.
[29]鄭云章.個人通信系統(tǒng)的發(fā)展及其標(biāo)準(zhǔn)化[J].電信工程技術(shù)與標(biāo)準(zhǔn)化.1994(03)
[30]周筱航.鋼管混凝土系桿拱橋施工控制研究[D].西南交通大學(xué),建筑與土木工程,2013,碩士.
[31]李椿和.毛紡織科技創(chuàng)新亟待突破及發(fā)展的方向[J].中國紡織.2005(09)
[32]張寧.地理信息系統(tǒng)模型分析方法在準(zhǔn)噶爾盆地構(gòu)造研究中的應(yīng)用[D].中國地震局地質(zhì)研究所,2002.
[33]盧冠軍.大足鼠耳蝠種群遺傳、聲信號和形態(tài)特征地理進化研究[D].東北師范大學(xué),環(huán)境科學(xué),2014,博士.
[34]陶奇鈞,余世明.隔膜計量泵的排量誤差分析和遠程補償[J].機電工程,2013,07:828-831.
[35]柳潤琴.基于氣體傳感器陣列的有害氣體檢測系統(tǒng)的研究[D].寧波大學(xué),電子與通信工程（專業(yè)學(xué)位）,2014,碩士.
[36]黃林.鈀催化異腈與羧酸的脫羰偶聯(lián)反應(yīng)研究[D].杭州師范大學(xué),有機化學(xué),2013,碩士.
[37]牛懷平,彭燕華,何立,何茂松.熱卷箱卷取控制關(guān)鍵模型的研究[J].冶金自動化,2011,01:10-15.
[38]單培培.論盧梭的公意思想[D].內(nèi)蒙古大學(xué),馬克思主義哲學(xué),2014,碩士.
[39]仇士龍,王玉婷,王成雙,袁鉆如,黃玉安,謝鴻峰,程镕時.環(huán)氧樹脂/氧化石墨納米復(fù)合物的等溫固化行為研究[J].高分子學(xué)報,2012,01:25-32.
[40]特日格樂.基于GIS的內(nèi)蒙古畜牧業(yè)綜合區(qū)劃及其發(fā)展趨勢研究[D].內(nèi)蒙古師范大學(xué),地圖學(xué)與地理信息系統(tǒng),2013,碩士.
[41]徐建偉.防癆救國：中國防癆協(xié)會研究（1933-1937）[D].溫州大學(xué),專門史,2012,碩士.
[42]高江濤.鋼包底吹氬氣數(shù)值模擬研究[D].內(nèi)蒙古科技大學(xué),冶金工程,2014,碩士.
[43]張蓮蓮.基于socket hook的主機流量測量分析研究[D].濟南大學(xué),計算機技術(shù),2012,碩士.
[44]邱保志,曹鶴玲.一種高效的基于聯(lián)合熵的邊界點檢測算法[J].控制與決策,2011,01:71-74+79.
[45]韓冰.干擾素聯(lián)合電離子脈沖治療尖銳濕疣療效觀察[D].吉林大學(xué),臨床醫(yī)學(xué),2014,碩士.
[46]曲巍崴,石鑫,董輝躍,封璞加,朱靈盛,柯映林.氣動錘鉚過程仿真分析與試驗[J].浙江大學(xué)學(xué)報(工學(xué)版),2014,08:1411-1418.
[47]劉印平.波分復(fù)用光傳輸系統(tǒng)中色散管理技術(shù)及非線性效應(yīng)研究[D].浙江工業(yè)大學(xué),2009.
[48]李慧.木作類藝術(shù)在中國園林建筑裝飾中的研究[D].南昌大學(xué),設(shè)計藝術(shù)學(xué),2014,碩士.
[49]劉春雨.公文事務(wù)語體的翻譯策略[D].黑龍江大學(xué),翻譯,2013,碩士.
[50]羅偉.江西A財險公司發(fā)展戰(zhàn)略問題研究[D].南昌大學(xué),工商管理（專業(yè)學(xué)位）,2012,碩士.

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