本文關(guān)鍵詞：RNA干擾調(diào)控水稻齒矮病毒在介體褐飛虱培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)的持久侵染

  更多相關(guān)文章： 水稻齒葉矮縮病毒 RNAi 褐飛虱 細(xì)胞培養(yǎng)

【摘要】：水稻齒葉矮縮病毒(Rice ragged stunt virus, RRSV)是呼腸孤病毒科(Reoviridae)刺突呼腸孤亞科(Spinareovirinae)水稻病毒屬(Oryzavirus)的代表成員,由介體褐飛虱(Nilaparvata lugens)以持久增殖型方式傳播,但不經(jīng)卵傳。前期研究利用褐飛虱培養(yǎng)細(xì)胞闡釋了非結(jié)構(gòu)蛋白Pns6和Pns10參與了病毒的復(fù)制,揭示了非結(jié)構(gòu)蛋白Pns7在病毒擴(kuò)散過(guò)程中發(fā)揮的作用,也明確了RRSV在褐飛虱體內(nèi)的侵染循回途徑。而在這些過(guò)程中,RRSV不僅需要突破昆蟲體內(nèi)的各種組織屏障和膜屏障的阻礙,還需要克服各種抗病毒機(jī)制的阻礙,如RNA干擾(RNA interference, RNAi)。RNAi是指由內(nèi)源或外源雙鏈RNA(double-stranded RNA,dsRNA)誘導(dǎo)同源mRNA發(fā)生降解的一種轉(zhuǎn)錄后基因沉默現(xiàn)象,是生物體細(xì)胞內(nèi)有效的抗病毒防御形式,也是生物體用于保護(hù)自身基因組免遭外源基因侵害的一種方式。為探索RRSV在其介體褐飛虱體內(nèi)的復(fù)制增殖是否受RNA干擾的調(diào)控,本實(shí)驗(yàn)首先用RT-qPCR方法分析病毒侵染對(duì)RNAi途徑抗病毒途徑相關(guān)基因表達(dá)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)RRSV侵染褐飛虱培養(yǎng)細(xì)胞,能誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)RNAi途徑抗病毒相關(guān)基因Argonaute 1(Agol)、Argonaute 2 (Ago2)、Argonaute3 (Ago3)、Dicer1、 Dicer2、Eri-like-1α(Eri-la)、Eri-like-1b(Eri-1b)、Piwi和(systemic RNA interference defective,SID-1)等基因的相對(duì)表達(dá)量上調(diào)。接著,將體外合成的RNAi途徑相關(guān)基因片段的dsRNA轉(zhuǎn)染褐飛虱培養(yǎng)細(xì)胞,再用RRSV侵染。免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),干擾siRNA途徑中的Dicer2和Ago2基因的表達(dá),能顯著提高RRSV在褐飛虱培養(yǎng)細(xì)胞的侵染率,而干擾miRNA途徑中的Dicerl和Agol基因、piRNA途徑中Piwi和Ago3基因以及Eri-la和Eri-lb基因的表達(dá)不影響RRSV在褐飛虱培養(yǎng)細(xì)胞中的侵染率。上述結(jié)果表明,褐飛虱siRNA途徑參與調(diào)控了RRSV在褐飛虱培養(yǎng)細(xì)胞中的侵染復(fù)制,而miRNA途徑和piRNA途徑可能不參與調(diào)控RRSV在褐飛虱培養(yǎng)細(xì)胞中的侵染復(fù)制。RT-qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果也進(jìn)一步表明,轉(zhuǎn)染dsDicer2和dsAgo2褐飛虱培養(yǎng)細(xì)胞,RRSVP8基因的積累量顯著提高,而轉(zhuǎn)染dsAgo1、dsAgo3、dsDicer1、dsEri-la、dsEri-lb、dsPiwi和dsSID-1等dsRNA后,RRSVP8基因的積累量無(wú)顯著變化。本研究對(duì)褐飛虱抗病毒免疫方式進(jìn)行了初步探究,明確了褐飛虱細(xì)胞內(nèi)siRNA途徑是調(diào)控RRSV侵染、復(fù)制增殖的有效途徑,且該途徑中發(fā)揮作用的關(guān)鍵因子為Dicer2和Ago2；而miRNA途徑和piRNA途徑可能不參與調(diào)控RRSV侵染、復(fù)制增殖。這些結(jié)果為明確植物病毒在介體昆蟲體內(nèi)受到的RNAi機(jī)制,解析病毒與介體昆蟲的互作關(guān)系和協(xié)同進(jìn)化機(jī)制奠定了基礎(chǔ),為阻斷褐飛虱傳播RRSV防控水稻齒葉矮縮病提供新的可能依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：水稻齒葉矮縮病毒 RNAi 褐飛虱 細(xì)胞培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S435.11
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 1. 前言11-27
• 1.1 水稻鋸齒葉矮縮病的相關(guān)研究進(jìn)展11-17
• 1.1.1 水稻鋸齒葉矮縮病的發(fā)現(xiàn)與發(fā)生11-12
• 1.1.2 病毒的寄主范圍及危害癥狀12-13
• 1.1.3 病毒的特征及分類地位13-15
• 1.1.4 病毒的分子生物學(xué)研究15-16
• 1.1.5 RRSV傳播介體及其傳毒方式16-17
• 1.2 昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用17-21
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)概述17-18
• 1.2.2 昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用18-20
• 1.2.3 昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)基20-21
• 1.3 昆蟲體內(nèi)的抗病毒免疫21-25
• 1.3.1 RNAi的機(jī)制及其應(yīng)用22-24
• 1.3.2 RNAi在抗病毒方面的應(yīng)用24-25
• 1.4 本實(shí)驗(yàn)的研究目的和意義25-27
• 2 材料和方法27-43
• 2.1 材料27
• 2.2 實(shí)驗(yàn)試劑與實(shí)驗(yàn)儀器27-28
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法28-43
• 2.3.1 褐飛虱細(xì)胞的培養(yǎng)28
• 2.3.2 源于褐飛虱抗病毒免疫基因片段dsRNA的體外合成28-35
• 2.3.3 RRSV病毒侵染液的篩選35-37
• 2.3.4 目的基因dsRNA轉(zhuǎn)染對(duì)RRSV侵染褐飛虱單層培養(yǎng)細(xì)胞的影響37
• 2.3.5 免疫熒光檢測(cè)37-38
• 2.3.6 RT-qPCR檢測(cè)38-43
• 3. 結(jié)果與分析43-61
• 3.1 褐飛虱細(xì)胞的體外培養(yǎng)43-44
• 3.2 RRSV高效侵染液的制備44-47
• 3.3 RRSV的侵染激活了褐飛虱培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)RNAi途徑相關(guān)基因的表達(dá)47-48
• 3.4 褐飛虱RNAi途徑相關(guān)基因dsRNA的合成48-50
• 3.4.1 褐飛虱RNAi途徑相關(guān)基因的擴(kuò)增48-49
• 3.4.2 褐飛虱RNAi途徑相關(guān)基因dsRNA的體外合成49-50
• 3.5 褐飛虱調(diào)控RRSV侵染細(xì)胞的RNAi途徑50-59
• 3.5.1 siRNA途徑調(diào)控RRSV在培養(yǎng)細(xì)胞中的侵染51-53
• 3.5.2 miRNA可能不參與調(diào)控RRSV對(duì)褐飛虱培養(yǎng)細(xì)胞的侵染53-55
• 3.5.3 piRNA途徑對(duì)RRSV侵染褐飛虱培養(yǎng)細(xì)胞的影響較小55-57
• 3.5.4 褐飛虱Eri-like基因?qū)RSV侵染其培養(yǎng)細(xì)胞的調(diào)控作用不顯著57-59
• 3.6 RNAi相關(guān)基因dsRNA對(duì)褐飛槰培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)基因表達(dá)量的影響59-61
• 4. 討論61-66
• 4.1 褐飛虱RNAi抗病毒途徑分析61-63
• 4.2 關(guān)于RRSV侵染不穩(wěn)定現(xiàn)象的分析63-66
• 參考文獻(xiàn)66-77
• 附錄77-79
• 致謝79

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 肖翠紅,崔玉東,劉振華;小片段干擾RNA技術(shù)[J];畜牧獸醫(yī)雜志;2005年02期

2 李學(xué)華;;來(lái)自RNA的精確打擊——科學(xué)家利用RNA干擾開(kāi)發(fā)轉(zhuǎn)基因抗蟲植物[J];今日科苑;2008年01期

3 張旭;張樹(shù)彪;金梅;;RNA干擾在植物中的應(yīng)用[J];安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)(上半月刊);2011年07期

4 孟麗平;RNA干擾和病毒基因沉默[J];動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué);2003年06期

5 王會(huì)冬;龔亮;胡美英;洪鵬;;系統(tǒng)RNA干擾及在昆蟲中的應(yīng)用[J];生物技術(shù)通報(bào);2012年12期

6 陳彩艷;肖晗;張文利;王愛(ài)菊;夏志輝;李曉兵;翟文學(xué);程祝寬;朱立煌;;以花藥愈傷組織為受體的水稻轉(zhuǎn)化和RNA干擾研究[J];中國(guó)科學(xué)C輯:生命科學(xué);2006年04期

7 姜慶林,季從亮,周群蘭,盧克倫,陳國(guó)宏*;RNA干擾與基因沉默[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2005年02期

8 繆新燕;付蓉;趙秋菊;;RNA干擾抑制豬瘟病毒增殖的研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2009年12期

9 武昱孜;張旭;張映;;RNA干擾文庫(kù)研究進(jìn)展及其應(yīng)用[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘;2010年02期

10 唐濤;劉雪源;邱立紅;;RNA干擾及其對(duì)昆蟲抗藥性相關(guān)基因的沉默研究[J];棉花學(xué)報(bào);2010年06期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 郭德銀;;RNA干擾在病毒研究和控制中的應(yīng)用[A];第二屆中國(guó)青年學(xué)者微生物遺傳學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

2 丁浩;李菊香;孫國(guó)芳;洪葵;程曉曙;;RNA干擾沉默細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子-1的表達(dá)對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響[A];第十三次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

3 牛鵬霞;沈鶴;趙書紅;樊斌;;一種RNA干擾載體的構(gòu)建及驗(yàn)證[A];第十二次全國(guó)畜禽遺傳標(biāo)記研討會(huì)論文集[C];2010年

4 張玉稚;王漢森;潘虹;李美蓉;包新華;金靖;吳希如;;大鼠Mecp_2基因的RNA干擾有效序列篩選[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十四次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

5 孔祥平;;RNA干擾與乙型肝炎[A];2004年慢性乙型肝炎免疫治療進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文集[C];2004年

6 姜林娣;王吉耀;王漢洲;趙鳳娣;鮑春德;鄒和建;;RNA干擾抑制COX-2合成以及對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞生物學(xué)活性的影響研究[A];第十二屆全國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

7 譚兵;李瑜元;聶玉強(qiáng);杜艷蕾;;RNA干擾對(duì)活化的小鼠巨噬細(xì)胞TNFα表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

8 朱t 燕;仇灝;周迎會(huì);吳士良;;一種新型糖基轉(zhuǎn)移酶：β3GalT7基因的RNA干擾表達(dá)載體構(gòu)建及其細(xì)胞學(xué)表型功能的初步研究[A];2008年全國(guó)糖生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2008年

9 詹鷹;劉繼紅;封江南;肖恒軍;李忠遠(yuǎn);張朝暉;王濤;陳俊;王少剛;葉章群;;腺病毒介導(dǎo)的RNA干擾對(duì)人陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞PDE5基因表達(dá)的抑制作用[A];第十六屆全國(guó)泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

10 陳敏;何丹;馮九庚;唐容;洪濤;蔣麗萍;;RNA干擾沉默Cx43基因表達(dá)抑制血管再狹窄[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第十一次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議�？痆C];2011年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張中橋;第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院實(shí)現(xiàn)腫瘤特異性RNA干擾[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 何國(guó)棟;RNAi抑制HIF-1α表達(dá)對(duì)腫瘤糖代謝影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

2 趙平;RNA干擾抑制結(jié)締組織生長(zhǎng)因子對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞功能影響的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

3 黃捷;RNA干擾熱休克蛋白27基因?qū)ψ园l(fā)性高血壓大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖、遷移的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

4 陳家文;RNA三級(jí)結(jié)構(gòu)折疊以及RNA干擾相關(guān)的動(dòng)力學(xué)[D];武漢大學(xué);2013年

5 陳波斌;核酶和RNA干擾靶向治療慢性粒細(xì)胞性白血病的實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

6 蔡從利;以質(zhì)粒為基礎(chǔ)的RNA干擾方法的建立以及凋亡相關(guān)基因HSD11的功能研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

7 梁之聘;多靶位RNA干擾對(duì)HIV-1抑制作用的研究[D];南開(kāi)大學(xué);2014年

8 魏軍民;RNA干擾逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2005年

9 孫聰;STAT3特異性短干涉RNA抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的研究[D];吉林大學(xué);2009年

10 閔安杰;RNA干擾沉默TREM-1對(duì)脆弱類桿菌脂多糖炎癥反應(yīng)的抑制作用及其機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2007年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 曹布道;dsRNA和重組TMV介導(dǎo)的針對(duì)玉米黏蟲Chitinase基因的RNA干擾研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

2 馮尚祥;人胰島素樣生長(zhǎng)因子-1和RNA干擾多聚蛋白聚糖酶-1基因?qū)θ斯撬韪杉?xì)胞骨架的影響研究[D];青島大學(xué);2015年

3 王超;Tf-PEG-PEI載RNA干擾質(zhì)粒靶向沉默PC-3細(xì)胞核干因子的體外實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

4 王雷;甘薯褪綠矮化病毒（SPCSV）RNA干擾載體的構(gòu)建及對(duì)煙草的遺傳轉(zhuǎn)化[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 邢艷茹;褐飛虱Dnmt1和N6amt2的表達(dá)和功能分析及甜菜夜蛾RNA干擾致死基因的克隆[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

6 劉青青;RNA干擾調(diào)控水稻齒矮病毒在介體褐飛虱培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)的持久侵染[D];福建農(nóng)林大學(xué);2015年

7 蔣曉芳;抗粗縮病RNA干擾表達(dá)載體的構(gòu)建和玉米莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)原位轉(zhuǎn)化[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

8 李志艷;應(yīng)用小RNA及RNA干擾研究慢性髓性白血病的致病機(jī)理[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

9 戴兆基;RNA干擾介導(dǎo)的抗南方水稻黑條矮縮病毒研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2012年

10 潘彥鵬;慢病毒介導(dǎo)RNA干擾對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病增殖的影響[D];海南大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：998367