本文關(guān)鍵詞：華重樓內(nèi)生菌的分離鑒定與代謝產(chǎn)物研究

  更多相關(guān)文章： 華重樓 內(nèi)生菌 代謝產(chǎn)物 甾體皂苷

【摘要】：華重樓(Paris polyphylla Var. chinensis Franch)為延齡草科(Trilliaceae)重樓屬植物,是一種多年生草本名貴中藥,具有清熱解毒,消腫止痛,涼肝定驚等功效,主要用于疔瘡癰腫,咽喉腫痛,蛇蟲(chóng)咬傷,跌撲傷痛,驚風(fēng)抽搐等病癥,被《中國(guó)藥典》(2010年版)收錄�，F(xiàn)代藥理研究表明,重樓具有止血止痛、抗菌抗癌、祛痰鎮(zhèn)靜,因此成為了云南白藥、抗病毒顆粒、宮血寧膠囊等多種中成藥的主要成分。然而由于重樓自然生長(zhǎng)緩慢,從種子萌發(fā)到成熟收獲需要8—10年的時(shí)間,加之人工種植技術(shù)尚未成熟,暫時(shí)還沒(méi)有大規(guī)模的開(kāi)發(fā)和利用,重樓生物量整體上面臨著短缺；更由于市場(chǎng)需求的巨大利益誘惑,大量的野生資源被農(nóng)戶采挖,讓野生重樓資源日漸枯竭。所以尋找重樓的替代品和開(kāi)發(fā)人工種植技術(shù)成為了目前研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。參考國(guó)內(nèi)外的研究文獻(xiàn),植物內(nèi)生菌能夠產(chǎn)出與宿主相同或者相似的具有一定生理活性的次級(jí)代謝產(chǎn)物,而從菌類中提取有用的代謝產(chǎn)物是進(jìn)行工廠化規(guī)�；a(chǎn)的最好途徑。本文以四川邛崍山脈的華重樓內(nèi)生菌為研究材料,尋找可以產(chǎn)生甾體皂苷或者類似物的菌種,首先從實(shí)驗(yàn)室的層面發(fā)現(xiàn)和解決重樓資源不足的問(wèn)題。從四川都江堰市、寶興縣、雨城區(qū)、名山縣、天全縣采集新鮮的人工栽培華重樓,利用組織切塊法進(jìn)行內(nèi)生真菌和內(nèi)生細(xì)菌的分離、純化和鑒定。共分離內(nèi)生真菌83株,純化52株,ITS分子鑒定出26株,分為7個(gè)屬；分離內(nèi)生細(xì)菌101株,純化48株,16 SrDNA分子鑒定出35株,分為16個(gè)屬。對(duì)內(nèi)生菌的進(jìn)行發(fā)酵液超聲波破碎、萃取、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后HPLC檢測(cè),同重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ及薯蕷皂苷元的標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖進(jìn)行比對(duì),發(fā)現(xiàn)4株真菌(DJY—10、DJY—7、MS—9、BX—15)和3株細(xì)菌(BX—9、YC—3、MS—6)至少有1個(gè)和標(biāo)準(zhǔn)品出峰時(shí)間相近,其中DJY—7、MS—9、BX—15、YC—3和重樓皂苷Ⅰ的出峰時(shí)間相近,YC—3和重樓皂苷Ⅱ的出峰時(shí)間相近,BX—15、YC—3、MS—6和重樓皂苷Ⅵ的出峰時(shí)間相近,BX—15和重樓皂苷Ⅶ的出峰時(shí)間相近,7株內(nèi)生菌都和薯蕷皂苷元的出峰時(shí)間相近。而真菌BX—15和細(xì)菌YC—3都和5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的其中4個(gè)有相近的出峰時(shí)間,這可能成為利用內(nèi)生菌進(jìn)行重樓替代生產(chǎn)的優(yōu)良菌株。根據(jù)分子鑒定結(jié)果,DJY-10和MS-9為尖胞鐮刀屬、DJY-7為木霉屬、BX—9為蒼白桿菌屬、YC—3為芽孢桿菌屬、MS—6為綠膿假單胞菌屬,BX—15由于在測(cè)序過(guò)程中出現(xiàn)了結(jié)合問(wèn)題尚未鑒定出。在鐮刀屬、芽孢桿菌屬和假單胞菌屬中已有研究發(fā)現(xiàn)了可以產(chǎn)甾體皂苷的重樓內(nèi)生菌,在木霉屬、蒼白桿菌屬中是首次發(fā)現(xiàn)可以產(chǎn)甾體皂苷的重樓內(nèi)生菌,這表明重樓內(nèi)生菌的研究還需要進(jìn)一步更全面的探索。
【關(guān)鍵詞】：華重樓 內(nèi)生菌 代謝產(chǎn)物 甾體皂苷
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S567.239
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 1 文獻(xiàn)綜述11-20
• 1.1 植物內(nèi)生菌相關(guān)研究11-16
• 1.1.1 植物內(nèi)生菌的定義11
• 1.1.2 植物內(nèi)生菌的分布11-12
• 1.1.3 植物內(nèi)生菌的種類12-13
• 1.1.3.1 內(nèi)生真菌12
• 1.1.3.2 內(nèi)生細(xì)菌12
• 1.1.3.3 內(nèi)生放線菌12-13
• 1.1.4 植物內(nèi)生菌的生物學(xué)應(yīng)用13-14
• 1.1.4.1 固氮作用13
• 1.1.4.2 促進(jìn)植物生長(zhǎng)發(fā)育13-14
• 1.1.4.3 增強(qiáng)宿主的抗逆性14
• 1.1.5 次級(jí)代謝產(chǎn)物的開(kāi)發(fā)和利用14-16
• 1.1.5.1 抗菌類物質(zhì)14-15
• 1.1.5.2 抗癌類物質(zhì)15
• 1.1.5.3 殺蟲(chóng)類物質(zhì)15-16
• 1.1.5.4 酶類活性物質(zhì)16
• 1.1.5.5 植物生長(zhǎng)激素16
• 1.2 重樓相關(guān)研究及現(xiàn)狀分析16-18
• 1.2.1 重樓的形態(tài)特征16-17
• 1.2.2 重樓的主要化學(xué)成分17
• 1.2.3 重樓的藥理活性及應(yīng)用17-18
• 1.3 重樓內(nèi)生菌研究現(xiàn)狀18-19
• 1.3.1 重樓內(nèi)生菌的多樣性研究18
• 1.3.2 重樓內(nèi)生菌抗菌活性研究18-19
• 1.3.3 重樓內(nèi)生菌次級(jí)代謝產(chǎn)物研究19
• 1.4 本研究的目的和意義19-20
• 2 材料與方法20-27
• 2.1 材料、試劑與主要儀器20-21
• 2.1.1 材料20
• 2.1.2 主要試劑20-21
• 2.1.3 主要儀器21
• 2.2 方法21-27
• 2.2.1 培養(yǎng)基配制及處理21-22
• 2.2.1.1 馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基PDA21
• 2.2.1.2 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基NA21-22
• 2.2.2 真菌發(fā)酵液培養(yǎng)基PD22
• 2.2.3 細(xì)菌發(fā)酵液培養(yǎng)基NA22
• 2.2.4 華重樓塊莖的處理及內(nèi)生菌的分離、純化22
• 2.2.5 華重樓內(nèi)生菌發(fā)酵液培養(yǎng)22-23
• 2.2.6 華重樓內(nèi)生菌菌種鑒定23-26
• 2.2.6.1 內(nèi)生菌基因組DNA提取23-25
• 2.2.6.2 PCR擴(kuò)增25
• 2.2.6.3 瓊脂糖電泳檢測(cè)25-26
• 2.2.6.4 序列分析26
• 2.2.7 華重樓內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物研究26-27
• 2.2.7.1 發(fā)酵液處理26-27
• 2.2.7.2 標(biāo)準(zhǔn)品的制備27
• 2.2.7.3 HPLC檢測(cè)27
• 3 結(jié)果與分析27-39
• 3.1 華重樓內(nèi)生菌的分離純化27-29
• 3.1.1 內(nèi)生真菌的分離純化27-28
• 3.1.2 內(nèi)生細(xì)菌的分離純化28-29
• 3.2 華重樓內(nèi)生菌的菌種鑒定29-36
• 3.2.1 PCR產(chǎn)物1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)29-30
• 3.2.2 測(cè)序結(jié)果30
• 3.2.3 構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)30-36
• 3.3 華重樓內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物的鑒定36-39
• 3.3.1 標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC檢測(cè)圖譜36-37
• 3.3.2 樣品的HPLC檢測(cè)圖譜37-39
• 4 討論39-42
• 參考文獻(xiàn)42-47
• 致謝47-48
• 附錄48-51

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 張曉潔;湯麗麗;王一丁;;產(chǎn)甾體皂甙華重樓內(nèi)生真菌、放線菌的分離與篩選[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2007年03期

2 楊正強(qiáng);張耀兮;陳小靜;趙明;王一丁;;華重樓內(nèi)生菌SS02的分離與抗菌活性的初步研究[J];微生物學(xué)通報(bào);2006年02期

3 ;[J];;年期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 安文;華重樓內(nèi)生菌的分離鑒定與代謝產(chǎn)物研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 李昭玲;層積過(guò)程中華重樓種子的后熟生理研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 臧薇;華重樓組織培養(yǎng)體系建立的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

4 任智;兩株產(chǎn)甾體皂甙華重樓內(nèi)生細(xì)菌的篩選與發(fā)酵條件的研究[D];四川師范大學(xué);2007年

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本文編號(hào)：595343