本文關(guān)鍵詞：農(nóng)產(chǎn)品玉米赤霉醇ELISA檢測試劑盒的研制與應(yīng)用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：玉米赤酶醇來自于玉米,花生,小麥,大米等產(chǎn)生的玉米赤霉醇菌在不規(guī)范的儲存時產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物為玉米赤霉烯酮的還原產(chǎn)物,商品名字“畜大壯”又名“右環(huán)十四酮酚”,這種還原產(chǎn)物屬于雷索酸內(nèi)酯類非甾體類同化激素的物質(zhì),有較強的促進生長的作用。玉米赤酶醇是一種效果比較好的促進動物生長的激素類物質(zhì),屬于非固醇非激素類化合物于一類的物質(zhì)。玉米赤霉醇具有促進蛋白質(zhì)合成和提高蛋白質(zhì)效率的作用所以在歐美等發(fā)達國家被廣泛使用,我國也是在二十世紀末期開始在中國示范。后來經(jīng)過大量的實驗工作和數(shù)據(jù),證明玉米赤霉醇在哺乳動物體內(nèi)有蓄積,并且對動物和人都具有一定的危害性。所以發(fā)達國家就明確禁止將玉米赤霉醇等激素類藥物用于養(yǎng)殖我國農(nóng)業(yè)部在第193號公告明確規(guī)定玉米赤霉醇于等對人體有害的抗生素類藥物也禁用于所有食源性動物,同時還規(guī)定了在可食動物的組織和尿液中不得檢出。而目前的檢測方法主要有液相,質(zhì)譜和串聯(lián)質(zhì)譜等方法,但是這些方法都比較繁瑣,時間比較長,對操作人員技術(shù)要求非常高,所以酶聯(lián)免疫的方法更容易被大眾接收,因為玉米赤霉醇酶聯(lián)免疫的方法比較簡單,實用性比較強,特異性較好,對操作人員的技術(shù)要求不高。更容易被基層的檢測部門接受,一般的飼料公司等也能使用。1.目的：建立快速、有效比較經(jīng)濟的玉米赤霉醇檢測試劑盒用于檢測植物性食品中ZER的殘留量。2.方法：應(yīng)用間接競爭ELISA法,這種方法是采用抗原與抗體的特異反應(yīng)的原理,將需要檢測物質(zhì)和酶通過生物的方法連接就起來,最后通過酶與底物產(chǎn)生顏色的不同來定量測定看待檢測的物質(zhì)的含量。測定的對象可以是抗體也可以是抗原建立玉米赤霉醇單克隆抗體快速檢測植物性食品中ZER含量的定性或者是半定量檢測。同時對該ELISA試劑盒進行了包被,固定,吹干等一系列的調(diào)試,使得玉米赤霉醇試劑盒的反應(yīng)更加靈敏,特異性更強。3.結(jié)果：實驗以人工合成的ZER為包被原,ZER為競爭半抗原,兩者與一定量的抗玉米赤霉醇單克隆抗體反應(yīng),建立檢測ZER的ELISA方法。當(dāng)包被濃度為1：5000時是最理想的包被濃度比例,當(dāng)單抗和酶標(biāo)二抗稀釋倍數(shù)調(diào)節(jié)到1：500和1：2500時,試劑盒的顯色效果最為理想。然而當(dāng)樣品溶液與單抗溶液體積比50：50時酶聯(lián)效果最為理想,底物溶液的選擇中等濃度底物顯色液,單抗反應(yīng)時間的確定60min,抗體最適工作濃度為1：5000,酶標(biāo)二抗的最適工作濃度為1：5000。而當(dāng)所研制的試劑盒檢測限控制在0.5ng/mL時,添加回收率在60.0%-120.0%之間,變異系數(shù)小于20%,在2-8℃條件下可保存3個月。
【關(guān)鍵詞】：玉米赤霉醇 單克隆抗體 間接競爭 檢測限 ELISA
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S133
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 1. 前言10-15
• 2. 材料與方法15-17
• 2.1 材料15
• 2.2 玉米赤霉醇試劑盒研制的方法15-17
• 3. 結(jié)果與分析17-33
• 3.1 最適包被濃度的確定17-18
• 3.2 最適單抗和酶標(biāo)二抗稀釋倍數(shù)的確定18-19
• 3.3 樣品溶液與單抗溶液體積比例的確定19
• 3.4 包被液的確定19-20
• 3.5 玉米赤霉醇試劑盒的封閉液實驗20
• 3.6 酶標(biāo)二抗稀釋液的確定20-21
• 3.7 單抗稀釋液的確定21-22
• 3.8 底物顯色液的確定22-23
• 3.9 包被液、封閉液、抗體稀釋液、酶標(biāo)二抗稀釋液、底物顯色液的綜合試驗23
• 3.10 包被條件的確定23-24
• 3.11 封閉時間的確定24-25
• 3.12 單抗反應(yīng)時間的確定25
• 3.13 酶標(biāo)二抗反應(yīng)時間的確定25-26
• 3.14 底物顯色條件的確定26-27
• 3.15 試劑盒靈敏度的確定27-28
• 3.16 試劑盒特異性的測定28-29
• 3.17 玉米赤霉醇試劑盒精密度的測定29
• 3.18 試劑盒準確度的測定29-30
• 3.19 試劑盒老化試驗30-31
• 3.20 不同批次試劑盒2～8℃保存期試驗31-33
• 4. 討論33-34
• 4.1 空白牛尿的實際測得值意義33
• 4.2 玉米赤霉醇檢測試劑盒回收率的計算33
• 4.3 ELISA檢測試劑盒的特異性、靈敏度33
• 4.4 ELSA檢測試劑盒的保存時間33-34
• 5 結(jié)論34-35
• 參考文獻35-40
• 附錄40-42
• 致謝42-43
• 作者簡歷及論文發(fā)表43

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  本文關(guān)鍵詞：農(nóng)產(chǎn)品玉米赤霉醇ELISA檢測試劑盒的研制與應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：492071