發(fā)布時間：2017-06-20 12:20

  本文關(guān)鍵詞：藥用植物西洋參和太子參不定根反應(yīng)器培養(yǎng)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：西洋參(Panax quinquefolium L.)和太子參(Pseudostellaria heterophylla)屬于大宗類藥材,在醫(yī)藥、食品、化妝品等大健康領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用,因此,國內(nèi)外市場對兩者的需求量很大。本文以實驗室的西洋參和太子參不定根為材料,進(jìn)行了鼓泡式生物反應(yīng)器培養(yǎng)的研究。在西洋參不定根研究中。添加不同濃度(0-20 mg/L MJ)的茉莉酸甲酯誘導(dǎo)子后,人參皂苷的含量明顯提高,尤其是5 mg/LMJ效果最為顯著,為對照組的4.61倍。確定添加5 mg/LMJ,培養(yǎng)5天提取總RNA,進(jìn)行差異表達(dá)基因分析,結(jié)果表明MJ誘導(dǎo)西洋參不定根中人參皂苷相關(guān)基因差異表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)皂苷積累。并進(jìn)行了從0.5 L搖瓶到3 L和5L鼓泡式反應(yīng)器的放大培養(yǎng),和搖瓶相比,反應(yīng)器內(nèi)生物量、多糖和皂苷含量有了顯著的提高。進(jìn)一步考察了三種不同(60°圓錐型,90°圓錐型,180。球型)的鼓泡式反應(yīng)器和反應(yīng)器培養(yǎng)條件對西洋參不定根的影響,得到最佳反應(yīng)器為90°圓錐型鼓泡式生物反應(yīng)器,最佳培養(yǎng)條件分別為0.5 vvm的通氣量、3%的蔗糖、1MS培養(yǎng)基的鹽強度、1.5g/L的接種量。第20天補加500 mL的培養(yǎng)基,不定根干重增殖率高于對照組,總皂苷產(chǎn)率和多糖產(chǎn)率都達(dá)到最大值(30.96 mg/L,673.43 mg/L),分別為對照組的5.12倍2.66倍。西洋參兩步培養(yǎng)法獲得了較高的皂苷產(chǎn)率(102.37mg/L)分別是補料組和對照組的3.31倍和16.95倍。西洋參中皂苷和多糖抗氧化活性研究表明：西洋參不定根中皂苷和多糖的DPPH清除率(98.53%,87.24%)均高于栽培西洋參。在太子參反應(yīng)器培養(yǎng)中,進(jìn)行了反應(yīng)器培養(yǎng)條件的考察。不定根培養(yǎng)的最佳反應(yīng)器為90。圓錐型鼓泡式反應(yīng)器,最佳培養(yǎng)條件為0.3vvm的通氣量、1.5g/L的接種量和3/4 MS培養(yǎng)基的鹽強度。本研究為西洋參和太子參大規(guī)模培養(yǎng)提供了數(shù)據(jù)支持。
【關(guān)鍵詞】：西洋參 太子參 不定根 誘導(dǎo)子 反應(yīng)器 培養(yǎng)條件
【學(xué)位授予單位】：天津科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S567.53
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 1 前言9-25
• 1.1 藥用植物組織培養(yǎng)的研究進(jìn)展9-17
• 1.1.1 藥用植物的快速繁殖及大田生產(chǎn)9-11
• 1.1.2 藥用植物懸浮細(xì)胞培養(yǎng)及工業(yè)化生產(chǎn)11-12
• 1.1.3 藥用植物毛狀根培養(yǎng)及工業(yè)化生產(chǎn)12-13
• 1.1.4 藥用植物不定根培養(yǎng)及工業(yè)化生產(chǎn)13-17
• 1.2 人參皂苷生物合成途經(jīng)及關(guān)鍵酶研究17-19
• 1.2.1 人參皂苷生物合成途徑17-18
• 1.2.2 人參皂苷合成途徑中的相關(guān)酶的基因的研究18-19
• 1.3 西洋參組織培養(yǎng)進(jìn)展19-22
• 1.3.1 愈傷組織培養(yǎng)研究20
• 1.3.2 西洋參懸浮細(xì)胞培養(yǎng)研究20-21
• 1.3.3 西洋參毛狀根組織培養(yǎng)研究21
• 1.3.4 西洋參冠癭組織培養(yǎng)研究21-22
• 1.3.5 西洋參不定根培養(yǎng)研究22
• 1.4 太子參組織培養(yǎng)進(jìn)展22-23
• 1.4.1 太子參快速繁殖研究23
• 1.4.2 太子參懸浮細(xì)胞培養(yǎng)研究23
• 1.5 立題依據(jù)及本項研究的意義23-25
• 2 材料與方法25-37
• 2.1 材料25
• 2.1.1 西洋參不定根25
• 2.1.2 太子參不定根25
• 2.2 主要試劑25-26
• 2.3 實驗儀器26-27
• 2.4 實驗方法27-33
• 2.4.1 西洋參不定根的搖瓶培養(yǎng)27
• 2.4.2 茉莉酸甲酯(MJ)對西洋參不定根生物量和皂苷合成的影響27-29
• 2.4.3 鼓泡式生物反應(yīng)器培養(yǎng)西洋參不定根的研究29-31
• 2.4.4 DPPH法測定西洋參中皂苷和多糖抗氧化性31
• 2.4.5 太子參不定根的搖瓶繼代培養(yǎng)31
• 2.4.6 鼓泡式生物反應(yīng)器培養(yǎng)太子參不定根的研究31-33
• 2.5 分析方法33-37
• 2.5.1 不定根鮮重的測定方法33
• 2.5.2 不定根干重的測定方法33
• 2.5.3 增殖倍數(shù)的測定33
• 2.5.4 氧氣消耗速率測定33
• 2.5.5 培養(yǎng)基中電導(dǎo)率(Electrical conductivity,EC)的測定33
• 2.5.6 不定根多糖含量測定方法33-34
• 2.5.7 西洋參皂苷含量HPLC法分析34-35
• 2.5.8 DPPH法測定西洋參中皂苷與多糖抗氧化活性35
• 2.5.9 太子參不定根中皂苷分析35-36
• 2.5.10 太子參不定根中氨基酸含量的測定36-37
• 3 結(jié)果與討論37-65
• 3.1 西洋參不定根搖瓶培養(yǎng)中SOUR的變化37
• 3.2 MJ對西洋參不定根生物量和代謝產(chǎn)物合成的影響37-40
• 3.2.1 不同濃度MJ對西洋參不定根生物量及代謝產(chǎn)物合成的影響37-38
• 3.2.2 MJ誘導(dǎo)下的西洋參差異基因38-40
• 3.3 反應(yīng)器培養(yǎng)西洋參不定根40-55
• 3.3.1 西洋參不定根的逐級放大培養(yǎng)40-41
• 3.3.2 不同類型反應(yīng)器對西洋參不定根培養(yǎng)的影響41-43
• 3.3.3 通氣量43-46
• 3.3.4 碳源46-48
• 3.3.5 鹽強度48-50
• 3.3.6 接種量50-52
• 3.3.7 補料培養(yǎng)52-53
• 3.3.8 兩步培養(yǎng)53-55
• 3.4 西洋參不定根中皂苷和多糖對DPPH自由基的清除作用55-56
• 3.5 反應(yīng)器培養(yǎng)太子參不定根56-65
• 3.5.1 不同類型鼓泡型反應(yīng)器對太子參不定根的影響56-58
• 3.5.2 通氣量對太子參不定根的影響58-60
• 3.5.3 接種量對太子參不定根的影響60-62
• 3.5.4 鹽強度對太子參不定根的影響62-65
• 4 結(jié)論65-66
• 5 展望66-67
• 6 參考文獻(xiàn)67-77
• 7 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況77-78
• 8 致謝78

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本文編號：465636