本文關(guān)鍵詞：仿刺參生長相關(guān)基因的克隆與表達(dá)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：仿刺參(Apostichopus japonicus)俗稱刺參,屬于棘皮動(dòng)物門(Echinodermata),海參綱(Holothuroidea),循手目(Aspidochirota),刺參科(Stichopodidae),仿刺參屬(Apostichopus)。仿刺參是一種非常重要的海洋經(jīng)濟(jì)棘皮動(dòng)物,近十幾年仿刺參生長的研究取得較大進(jìn)展,尤其是水溫、鹽度、光照、附著基、養(yǎng)殖密度和餌料等環(huán)境因素對刺參生長影響的相關(guān)研究已經(jīng)較多和深入,在遺傳和發(fā)育生物學(xué)方面的研究也有一定進(jìn)展。但是,關(guān)于生長方面的分子遺傳學(xué)研究非常少。細(xì)胞周期蛋白B(Cyclin B)、卵泡抑素(Follistatin,Fst)和下效應(yīng)蛋白(Tensilin)基因是參與生長調(diào)控的相關(guān)基因,在刺參的生長發(fā)育過程中起著重要作用。Cyclin B主要通過控制細(xì)胞分裂G2/M這個(gè)轉(zhuǎn)換點(diǎn)來調(diào)控細(xì)胞分裂,是真核細(xì)胞周期運(yùn)轉(zhuǎn)中起關(guān)鍵作用的調(diào)控因子。卵泡抑素是一種富含半胱氨酸的糖基化單鏈多肽,是轉(zhuǎn)化生長因子β超家族成員之一,抑制促卵泡素(FSH)的分泌。下效應(yīng)蛋白是一種膠原纖維結(jié)合蛋白,是由仿刺參真皮的內(nèi)部的一層異變的膠原組織產(chǎn)生。本實(shí)驗(yàn)以仿刺參為原料,利用分子生物學(xué)技術(shù),首次克隆了cyclin B、follistatin、tensilin基因,獲得了3個(gè)基因cDNA全序列。通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),cyclin B基因包含一個(gè)717bp的開放閱讀框,編碼一個(gè)由238個(gè)氨基酸組成的蛋白,follistatin基因包含一個(gè)1254bp的開放閱讀框,編碼一個(gè)由417個(gè)氨基酸組成的蛋白,tensilin基因包含一個(gè)822bp的開放閱讀框,編碼一個(gè)由273個(gè)氨基酸組成的蛋白。對這三種基因編碼的蛋白質(zhì)進(jìn)行預(yù)測分析。Cyclin B包括一個(gè)CYCLIN功能結(jié)構(gòu)域,無信號肽無跨膜結(jié)構(gòu)域。Follistatin包括6個(gè)功能結(jié)構(gòu)域,按順序分別是FOLN、KAZAL、FOLN、KAZAL、FOLN、KAZAL結(jié)構(gòu)域,有信號肽無跨膜結(jié)構(gòu)域。Tensilin包括一個(gè)NTR功能結(jié)構(gòu)域,有信號肽無跨膜結(jié)構(gòu)域。用實(shí)時(shí)定量PCR(Real-Time qPCR)技術(shù),對cyclin B、follistatin、tensilin基因在大小仿刺參不同組織的表達(dá)量分別進(jìn)行研究。發(fā)現(xiàn)cyclin B基因在大個(gè)體仿刺參中的相對表達(dá)量要略高于小個(gè)體的表達(dá)量,體液和肌肉中差異極顯著,在呼吸樹中差異顯著。follistatin基因在小個(gè)體仿刺參中各組織相對表達(dá)量要略高,在腸中表達(dá)量差異顯著,其余差異不顯著。小個(gè)體仿刺參體壁最高為1.14,呼吸樹為0.047。tensilin基因在呼吸樹的表達(dá)量最高為1.14,體液的表達(dá)量最低為0.067。利用基因組步移(Genome Walking)方法,對cyclin B基因進(jìn)行了啟動(dòng)子的克隆,得到了2564bp的啟動(dòng)子序列,利用啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測程序進(jìn)行預(yù)測,預(yù)測結(jié)果顯示有7個(gè)結(jié)合位點(diǎn),分別為v-Myb、HNF-1、Evi-1、Elk-1、NF-Y、HNF、USF。
【關(guān)鍵詞】：仿刺參 細(xì)胞周期蛋白B基因 卵泡抑素基因 下效應(yīng)蛋白基因
【學(xué)位授予單位】：遼寧師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S917.4
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 1.前言9-15
• 1.1 仿刺參概述9-12
• 1.1.1 仿刺參的特征簡介9
• 1.1.2 仿刺參的養(yǎng)殖現(xiàn)狀及存在的問題9-10
• 1.1.3 仿刺參生長發(fā)育以及再生相關(guān)基因研究進(jìn)展10-11
• 1.1.4 仿刺參生長相關(guān)問題的解決辦法和展望11
• 1.1.5 仿刺參生長相關(guān)問題的研究意義11-12
• 1.2 生長相關(guān)基因cyclin B、follistatin、tensilin介紹12-15
• 1.2.1 Cyclin B的作用機(jī)制12-13
• 1.2.2 Follistatin作用機(jī)制及研究情況13-14
• 1.2.3 Tensilinz功能與研究情況簡介14-15
• 2.材料及方法15-27
• 2.1 材料15-16
• 2.1.1 仿刺參的取樣15
• 2.1.2 主要儀器與設(shè)備15-16
• 2.1.3 主要試劑16
• 2.2 方法16-27
• 2.2.1 仿刺參不同組織總RNA和DNA的提取16-19
• 2.2.2 3′ RACE擴(kuò)增19-20
• 2.2.3 5′ RACE擴(kuò)增20-22
• 2.2.4 內(nèi)含子的擴(kuò)增22-23
• 2.2.5 啟動(dòng)子的擴(kuò)增23-25
• 2.2.6 實(shí)時(shí)定量PCR25-27
• 3.結(jié)果27-43
• 3.1 PCR擴(kuò)增結(jié)果及序列分析27-32
• 3.2 cDNA序列信息學(xué)分析32-40
• 3.2.1 氨基酸序列32-35
• 3.2.2 編碼蛋白的信號肽預(yù)測35-37
• 3.2.3 跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測37-39
• 3.2.4 功能結(jié)構(gòu)域預(yù)測39-40
• 3.3 cyclin B基因啟動(dòng)子序列轉(zhuǎn)錄結(jié)合位點(diǎn)分析預(yù)測40-41
• 3.4 實(shí)時(shí)定量PCR41-43
• 4.討論43-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況51-52
• 致謝52

【相似文獻(xiàn)】

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9 江曙光;常亞青;田q

本文編號：435178