本文關(guān)鍵詞：H5和H7亞型禽流感病毒熒光定量RT-PCR檢測方法的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：禽流感(Avian influenza,AI)是由A型流感病毒引起的一種人獸共患傳染病,呈世界性的存在和發(fā)生。其宿主范圍十分廣泛,主要宿主為水生禽類,同時(shí)也可以感染哺乳動(dòng)物和人類。一般情況下,禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)并不感染人類,但自1997年發(fā)生H5N1亞型禽流感病毒感染人類事件之后,相繼有不同亞型禽流感病毒感染人病例出現(xiàn)。尤其是2013年H7N9亞型流感病毒在我國的流行,不僅給家禽養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的損失,同時(shí)造成多起人類感染該病毒死亡的事件。因此,及時(shí)開展針對流感病毒的診斷研究,對防止流感大范圍流行,降低對動(dòng)物及人類生命安全的危害具有重要意義。熒光定量RT㧟PCR技術(shù)(Real-time RT-PCR)是一種新型的分子核酸檢測技術(shù)。本研究借助實(shí)驗(yàn)室已有工作平臺,建立了可以檢測H5和H7亞型禽流感病毒的熒光定量RT-PCR方法。根據(jù)H5N1亞型流感病毒HA和H7N9亞型流感病毒HA和NA基因序列,設(shè)計(jì)并合成相關(guān)探針和引物,建立了檢測H5和A型流感病毒雙重?zé)晒舛縍T-PCR和H7N9亞型及A型流感病毒三重?zé)晒舛縍T-PCR檢測方法。用背景清楚的H1~H16、N1~N9亞型A型流感病毒和多種其它病原評價(jià)兩種方法,均表現(xiàn)出了較好的特異性;在敏感性試驗(yàn)中,檢測10倍系列稀釋的H5N1和H7N9亞型病毒尿囊液的最高稀釋度可以達(dá)到10-5;在重復(fù)性試驗(yàn)中,兩種方法Cp值變異系數(shù)均2%,重復(fù)性較好;經(jīng)過分析大量臨床拭子的檢測結(jié)果,該檢測方法與病毒分離鑒定的符合度較高。獸用生物制品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可用于獸用微生物及其產(chǎn)物的定性鑒定或定量測定動(dòng)物疫病診斷試劑及獸用生物制品生物效價(jià)等特性值或驗(yàn)證檢驗(yàn)和診斷方法準(zhǔn)確性的參考品。本研究利用H5N1和H7N9亞型滅活病毒制備了標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),在熱穩(wěn)定性試驗(yàn)中,分別在-20℃、4℃、37℃不同溫度下保存一定時(shí)間,仍可以表現(xiàn)出較好的穩(wěn)定性;在反復(fù)凍融試驗(yàn)中,經(jīng)過反復(fù)16次凍融之后仍可以作為參考標(biāo)準(zhǔn),發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)較為穩(wěn)定;無菌試驗(yàn)鑒定符合要求,同時(shí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)滅活充分,可以為普通RT-PCR和熒光定量RT-PCR檢測方法提供參考。
【關(guān)鍵詞】：禽流感 熒光定量RT-PCR 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 英文縮略表9-10
• 第一章 引言10-18
• 1.1 禽流感病毒綜述10-13
• 1.1.1 AIV的組成結(jié)構(gòu)10-11
• 1.1.2 AIV主要蛋白11-13
• 1.2 AI流行概況13-14
• 1.2.1 H5亞型AI的流行及危害13
• 1.2.2 新型H7N9流感病毒的出現(xiàn)13-14
• 1.3 AIV的診斷14-16
• 1.3.1 病毒分離與鑒定14
• 1.3.2 血清學(xué)檢測方法14-15
• 1.3.3 分子生物學(xué)檢測方法15-16
• 1.4 生物制品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)概述16-17
• 1.4.1 基本定義16-17
• 1.4.2 分類17
• 1.4.3 作用17
• 1.5 研究的目的和意義17-18
• 第二章 H5和H7亞型AIV熒光定量RT-PCR檢測方法的建立18-30
• 2.1 試驗(yàn)材料18-20
• 2.1.1 病毒18-19
• 2.1.2 試劑19
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備19-20
• 2.2 試驗(yàn)方法20-22
• 2.2.1 設(shè)計(jì)引物和探針20
• 2.2.2 病毒核酸提取20-21
• 2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)品核酸RNA濃度的測定及拷貝數(shù)計(jì)算21
• 2.2.4 熒光定量RT-PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化21
• 2.2.5 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和病毒的定量21-22
• 2.2.6 性能評估22
• 2.3 試驗(yàn)結(jié)果22-29
• 2.3.1 熒光定量RT-PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化結(jié)果22
• 2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制22-25
• 2.3.3 性能評估25-29
• 2.4 討論29-30
• 第三章 H5和H7亞型AIV核酸檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備30-40
• 3.1 試驗(yàn)材料30
• 3.1.1 病毒30
• 3.1.2 試劑30
• 3.2 試驗(yàn)方法30-32
• 3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)半成品的制備與檢驗(yàn)30-31
• 3.2.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)候選品的制備與檢驗(yàn)31
• 3.2.3 病毒核酸的提取31-32
• 3.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)32
• 3.3 試驗(yàn)結(jié)果32-39
• 3.3.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)半成品的制備與檢驗(yàn)結(jié)果32-33
• 3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)候選品的制備與檢驗(yàn)結(jié)果33
• 3.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果33-39
• 3.4 討論39-40
• 第四章 全文結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-47
• 致謝47-48
• 作者簡歷48

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 丁麗霞;周海鈞;;生物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究和技術(shù)要求(上)[J];中國藥師;2007年03期

  本文關(guān)鍵詞：H5和H7亞型禽流感病毒熒光定量RT-PCR檢測方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：365065