發(fā)布時間：2017-05-12 13:17

  本文關(guān)鍵詞：黃帚橐吾內(nèi)生真菌的分離鑒定及其代謝產(chǎn)物抑菌活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：內(nèi)生真菌是一個新的有待開發(fā)的微生物資源。不僅能從傳統(tǒng)的藥用植物中分離到有益內(nèi)生真菌,在一些特殊環(huán)境下生長的其它植物也發(fā)現(xiàn)大量產(chǎn)活性代謝產(chǎn)物內(nèi)生真菌,內(nèi)生真菌對提高作物固氮、生物防控等方面起著重要的作用。本課題選擇黃帚橐吾為研究對象,對植株的根、莖、葉三種組織的內(nèi)生真菌進行分離純化及初步鑒定。選用沙門氏桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌三種病原細菌為供試菌,研究黃帚橐吾內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物的抑菌活性以及熱、PH、紫外光對發(fā)酵液抑菌活性穩(wěn)定性的影響；并對其抑菌活性較好的菌株進行了分子鑒定和發(fā)酵條件優(yōu)化,研究結(jié)果如下：1.通過組織分離法,采用MEA和察氏3種分離培養(yǎng)基,共分離純化得到黃帚橐吾內(nèi)生真菌67株,從分布情況來看,根部分離最多為36株,莖、葉分別得到19株和12株,經(jīng)典形態(tài)學(xué)分類方法進行初步鑒定,它們分屬于5目5科9屬,其中木霉屬和鐮孢屬為優(yōu)勢菌屬。2.對18株代表菌株發(fā)酵產(chǎn)物抑菌活性篩選研究發(fā)現(xiàn),有14株菌對至少一種供試細菌具有抑菌活性(抑菌圈8mm),占總數(shù)的77.78%。其中,27.78%對E.coli具有較好抑菌活性(抑菌圈12mm),16.67%對Salmonella具有較好抑菌活性,44.44%對S.aureus具有較好抑菌活性。對抑菌活性最好的菌株N2進行形態(tài)學(xué)和分子鑒定確定其分類地位,為半知菌門、絲孢目、叢梗孢科、木霉屬、棘孢木霉,最終定名為Trichoderma asperellum LB-N2 (Accession No:KM207842)。3.黃帚橐吾內(nèi)生真菌N2發(fā)酵液穩(wěn)定性結(jié)果顯示：抑菌活性成分熱穩(wěn)定性一般,60℃以下具有較好的穩(wěn)定性,在中性偏弱酸環(huán)境穩(wěn)定性最佳,紫外光照對發(fā)酵液影響較小,不同時間紫外光照下發(fā)酵液活性基本保持一致。4.對碳源和氮源的選擇上,黃帚橐吾內(nèi)生真菌N2對小分子類碳源和有機氮源的利用率最高,在此培養(yǎng)基中生長最快。5.對黃帚橐吾內(nèi)生真菌N2發(fā)酵液使用石油醚、正丁醇、乙酸乙酯三種不同極性試劑萃取,研究結(jié)果表明,N2發(fā)酵液不同萃取相對指示菌的抑菌活性大小差異顯著,乙酸乙酯相抑菌活性最佳,石油醚萃取相無抑菌活性。說明活性物質(zhì)屬強極性物質(zhì),主要集中于乙酸乙酯中。6.將菌株N2發(fā)酵液乙酸乙酯萃取相濃縮為浸膏,進行硅膠柱層析初步分離和抑菌活性跟蹤試驗,分離到2個較高活性組分用于進一步分離純化,薄層層析結(jié)果顯示為單一的褐色斑點,物質(zhì)類型初步定性鑒定為生物堿和萜類物質(zhì)。
【關(guān)鍵詞】：黃帚橐吾 內(nèi)生真菌 抑菌活性 分子鑒定 代謝產(chǎn)物
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S567.239;Q93
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-12
• 第一章 文獻綜述12-24
• 1 植物內(nèi)生真菌的研究進展12-17
• 1.1 植物內(nèi)生真菌的定義12
• 1.2 植物內(nèi)生真菌的生物多樣性12-13
• 1.3 內(nèi)生真菌生態(tài)學(xué)作用13-14
• 1.3.1 增強宿主抗性13-14
• 1.3.2 促進宿主生長發(fā)育14
• 1.3.3 增加宿主次生產(chǎn)物含量14
• 1.4 內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物的研究14-17
• 1.4.1 抗生素類物質(zhì)14-15
• 1.4.2 抗腫瘤物質(zhì)15
• 1.4.3 殺蟲類物質(zhì)15-16
• 1.4.4 植物生長調(diào)節(jié)劑16
• 1.4.5 抗氧化物質(zhì)16-17
• 1.4.6 其他類物質(zhì)17
• 2 橐吾屬植物的研究進展17-20
• 2.1 橐吾的概述17-18
• 2.2 橐吾的藥理作用18-20
• 2.2.1 毒性作用18
• 2.2.2 抗氧化作用18-19
• 2.2.3 鎮(zhèn)痛抗炎活性19
• 2.2.4 抗?jié)兓钚?/span>19
• 2.2.5 抗腫瘤、抗癌活性19-20
• 2.2.6 其他活性20
• 3 植物內(nèi)生真菌抑菌活性物質(zhì)研究進展20-22
• 3.1 生物堿類20
• 3.2 萜類物質(zhì)20-21
• 3.3 多肽類21
• 3.4 脂肪族類21
• 3.5 呋喃類21-22
• 3.6 其他類22
• 4 研究的主要內(nèi)容和意義22-24
• 4.1 研究的主要內(nèi)容22
• 4.2 研究的意義22-24
• 第二章 黃帚橐吾內(nèi)生真菌的分離純化24-33
• 1 材料24-25
• 1.1 植物樣本來源24
• 1.2 主要試劑24
• 1.3 主要儀器與設(shè)備24-25
• 1.4 培養(yǎng)基及其配制25
• 2 試驗方法25-27
• 2.1 內(nèi)生真菌的分離25-26
• 2.2 表面消毒效果檢查26
• 2.3 內(nèi)生真菌的純化26
• 2.4 菌株保藏26
• 2.5 內(nèi)生真菌的形態(tài)學(xué)鑒定26-27
• 3 結(jié)果與分析27-31
• 3.1 表面消毒效果的檢查27
• 3.2 內(nèi)生真菌分離結(jié)果27-31
• 4 討論31-33
• 4.1 表面消毒條件的確立31-32
• 4.2 內(nèi)生真菌分離純化32-33
• 第三章 抑菌活性菌株篩選與鑒定33-41
• 1 材料試劑與儀器33-35
• 1.1 材料33
• 1.2 主要試劑33-34
• 1.3 主要儀器34-35
• 2 試驗方法35-36
• 2.1 內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物制備35
• 2.2 菌懸液的制備35
• 2.3 抑菌活性菌種的篩選35
• 2.4 抑菌活性菌種的分子鑒定35-36
• 2.4.1 DNA的提取和純化35-36
• 2.4.2 瓊脂糖凝膠電泳36
• 2.4.3 ITS片段的PCR擴增36
• 2.4.4 ITS片段的測序36
• 3 結(jié)果與分析36-39
• 3.1 抑菌活性菌株的篩選36-38
• 3.2 活性菌株鑒定38-39
• 3.2.1 形態(tài)學(xué)鑒定38
• 3.2.2 內(nèi)生真菌N2分子鑒定38-39
• 4 討論39-41
• 4.1 抑菌活性菌株的篩選39-40
• 4.2 內(nèi)生真菌鑒定40-41
• 第四章 N2發(fā)酵液抑菌活性穩(wěn)定性及培養(yǎng)基優(yōu)化41-48
• 1 材料試劑與儀器41-42
• 1.1 材料41
• 1.2 主要試劑41
• 1.3 主要儀器41-42
• 2 試驗方法42-43
• 2.1 熱穩(wěn)定性分析42
• 2.2 酸堿穩(wěn)定性42
• 2.3 紫外光照射穩(wěn)定性42-43
• 2.4 碳源、氮源的篩選43
• 3 結(jié)果與分析43-46
• 3.1 熱穩(wěn)定性43
• 3.2 酸堿穩(wěn)定性43-44
• 3.3 紫外光照穩(wěn)定性44
• 3.4 不同碳源對菌株N2生長影響44-45
• 3.5 不同氮源對菌株N2生長影響45-46
• 4 討論46-48
• 4.1 發(fā)酵液穩(wěn)定性分析46-47
• 4.2 不同碳源氮源對菌株N2的影響47-48
• 第五章 發(fā)酵液活性物質(zhì)提取、分離和初步鑒定48-54
• 1 試劑與儀器48-49
• 1.1 主要試劑48
• 1.2 主要儀器48-49
• 2 試驗方法49-51
• 2.1 活性物質(zhì)極性分析49
• 2.2 活性物質(zhì)的初步分離49-50
• 2.2.1 硅膠柱層析49-50
• 2.2.2 薄層層析50
• 2.3 有效活性物質(zhì)定性分析50-51
• 2.3.1 黃酮類物質(zhì)檢測50
• 2.3.2 生物堿類檢測50-51
• 2.3.3 酚類物質(zhì)檢測51
• 2.3.4 蒽醌類物質(zhì)檢測51
• 2.3.5 萜類物質(zhì)檢測51
• 3 結(jié)果與分析51-53
• 3.1 抑菌活性物質(zhì)極性分析51-52
• 3.2 乙酸乙酯萃取相的提取分離52-53
• 3.3 組分3和4的分離純化與初步鑒定53
• 4 討論53-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻55-63
• 致謝63-64
• 攻讀碩士間發(fā)表的論文64-65
• 附錄65-66

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 郭良棟;內(nèi)生真菌研究進展[J];菌物系統(tǒng);2001年01期

2 任安芝,高玉葆;禾草類內(nèi)生真菌的研究進展[J];微生物學(xué)通報;2004年02期

3 何穎;談鋒;謝建平;;紅豆杉內(nèi)生真菌產(chǎn)紫杉醇研究進展[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2006年03期

4 孫端方;冉雪琴;王嘉福;;一株產(chǎn)紫杉醇羅漢松內(nèi)生真菌的分離和鑒定[J];微生物學(xué)報;2008年05期

5 嚴菊芬;王素萍;齊寧波;陳君;毛俊;楊樹林;;藥用植物內(nèi)生真菌研究進展[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2012年S1期

6 古海剛;白紅進;曾艷波;常東東;梅文莉;;中國紅樹植物角果木內(nèi)生真菌的分離及其初步鑒定[J];微生物學(xué)雜志;2012年06期

7 梁宇,高玉葆;內(nèi)生真菌對植物生長發(fā)育及抗逆性的影響[J];植物學(xué)通報;2000年01期

8 陳賢興,陳析豐,南旭陽,何獻武;喜樹果內(nèi)生真菌的分離與鑒定[J];河南科學(xué);2003年04期

9 孫翔;李文超;郭守玉;郭良棟;;內(nèi)生真菌V．中國樹木和地衣內(nèi)生真菌三個新記錄屬種(英文)[J];菌物學(xué)報;2007年02期

10 侯奎;劉玉軍;陸榮;劉小娟;周蕓;樊美珍;;葛內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物清除自由基活性的研究[J];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2008年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 郭良棟;;內(nèi)生真菌研究進展與展望[A];中國菌物學(xué)會第四屆會員代表大會暨全國第七屆菌物學(xué)學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2008年

2 張琦;嚴鑄云;汪楊麗;陳新;萬德光;;家種和野生丹參內(nèi)生真菌初步比較[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會第九屆中藥鑒定學(xué)術(shù)會議論文集——祝賀中華中醫(yī)藥學(xué)會中藥鑒定分會成立二十周年[C];2008年

3 陳法軍;黃永青;葉萬輝;;內(nèi)生真菌及其意義[A];生物多樣性研究進展——首屆全國生物多樣性保護與持續(xù)利用研討會論文集[C];1994年

4 嚴鑄云;戴國君;馬云桐;張琦;陳新;萬德光;;丹參內(nèi)生真菌與其有效成分的相關(guān)性研究[A];第九屆全國藥用植物及植物藥學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

5 陳鵲;魏超;吳衛(wèi);;藥用新資源—內(nèi)生真菌[A];全國第9屆天然藥物資源學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

6 陸濤;高龍;紀燕玲;王志偉;;溫度處理對鵝觀草種子內(nèi)生真菌垂直傳播能力的影響[A];中國菌物學(xué)會第五屆會員代表大會暨2011年學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

7 張猛;;小麥和玉米內(nèi)生真菌的分離與鑒定[A];中國植物病理學(xué)會2006年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2006年

8 陳賢興;陳析豐;南旭陽;何獻武;;喜樹果內(nèi)生真菌的分離與鑒定[A];全面建設(shè)小康社會：中國科技工作者的歷史責(zé)任——中國科協(xié)2003年學(xué)術(shù)年會論文集（上）[C];2003年

9 楊民和;王國紅;;茶樹內(nèi)生真菌資源及其利用潛力[A];第四屆全國微生物資源學(xué)術(shù)暨國家微生物資源平臺運行服務(wù)研討會論文集[C];2012年

10 嚴鑄云;郭曉恒;宋杰;;瀕危中藥替代品的新資源——內(nèi)生真菌[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會第九屆中藥鑒定學(xué)術(shù)會議論文集——祝賀中華中醫(yī)藥學(xué)會中藥鑒定分會成立二十周年[C];2008年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李曉彬;五株內(nèi)生真菌的化學(xué)成分及其生物活性研究[D];山東大學(xué);2015年

2 宋梅玲;野大麥內(nèi)生真菌共生體耐鹽性的生理機制研究[D];蘭州大學(xué);2015年

3 周連玉;基于代謝組學(xué)的中華羊茅-內(nèi)生真菌共生體響應(yīng)低溫脅迫的生化機制[D];蘭州大學(xué);2015年

4 馬敏芝;多年生黑麥草—內(nèi)生真菌共生體抗病性及其對根腐離蠕孢（Bipolaris sorokiniana）抗病機制的研究[D];蘭州大學(xué);2015年

5 陳麗;醉馬草內(nèi)生真菌分子檢測、基因型及產(chǎn)堿多樣性的研究[D];蘭州大學(xué);2015年

6 易曉華;除蟲菊內(nèi)生真菌分離、鑒定及其代謝產(chǎn)物抑菌活性研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2008年

7 胡克興;石斛屬藥用植物內(nèi)生真菌多樣性研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

8 何璐;苦參內(nèi)生真菌抑菌物質(zhì)純化鑒定及作用機制研究[D];沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

9 袁志林;疣粒野生稻（Oryza granulata）內(nèi)生真菌資源挖掘、系統(tǒng)發(fā)育分析和功能初探[D];浙江大學(xué);2010年

10 朱敏杰;內(nèi)蒙古中東部草原羊草內(nèi)生真菌多樣性及其對宿主生理生態(tài)特性的影響[D];南開大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬聰聰;三尖杉兩株內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物的研究[D];陜西科技大學(xué);2015年

2 李婷;黑果枸杞內(nèi)生真菌R43的次生代謝產(chǎn)物的研究[D];陜西科技大學(xué);2015年

3 向建輝;黃連內(nèi)生真菌中小檗堿的分離與鑒定[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

4 毛光瑞;陜西核桃內(nèi)生真菌多樣性及其抑菌活性初步研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

5 張影珍;貓兒屎內(nèi)生真菌DS58次生代謝產(chǎn)物的研究[D];陜西科技大學(xué);2015年

6 孝杰;三株中藥內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物研究[D];蘭州大學(xué);2015年

7 趙曉靜;禾草內(nèi)生真菌顯微結(jié)構(gòu)及其檢測方法的研究[D];蘭州大學(xué);2015年

8 韓陽;兩株植物內(nèi)生真菌和一種藥用植物的活性成分研究[D];山東大學(xué);2015年

9 龔倩;銀杏內(nèi)生真菌抗菌、抑菌活性的初步研究[D];安徽工程大學(xué);2015年

10 周燕燕;紫玉盤內(nèi)生真菌Arthrinium sp.次級代謝產(chǎn)物研究[D];廣東藥學(xué)院;2015年

  本文關(guān)鍵詞：黃帚橐吾內(nèi)生真菌的分離鑒定及其代謝產(chǎn)物抑菌活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：359891