植物內(nèi)生真菌與宿主植物長(zhǎng)期共存,進(jìn)化出了獨(dú)特的代謝機(jī)制。從這些代謝產(chǎn)物中尋找具有藥用價(jià)值的活性分子,是當(dāng)前新藥及成藥前體來(lái)源的重要途徑。藥用植物內(nèi)生真菌來(lái)源于傳統(tǒng)藥用植物,更有可能產(chǎn)生具有生物活性的代謝產(chǎn)物。其中,雜二萜化合物由于普遍具有抗癌抗腫瘤等活性,受到廣泛關(guān)注。本文以聚酮-二萜（PK-DTs）雜化分子為目標(biāo),從云南梁王山產(chǎn)滇重樓Paris polyphylla var.yunnanensis植株內(nèi)分離得到的34株內(nèi)生真菌中篩選了適合我們研究的基因簇:經(jīng)過(guò)基因組測(cè)序和生物信息學(xué)分析,并與已知雜二萜化合物生物合成途徑相關(guān)的基因簇進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn),其中一株內(nèi)生真菌Aspergillus versicolor0312的第19基因簇可能與雜二萜化合物的生物合成途徑有關(guān)。據(jù)此,我們用異源表達(dá)策略開(kāi)展了該基因簇的天然產(chǎn)物研究:在滇重樓內(nèi)生真菌0312的基因組內(nèi)鑒定了chevalon E（1）及其氧化衍生物的生物合成基因簇,并在異源表達(dá)宿主Aspergillus oryzae NSAR1中成功地重構(gòu)了該生物合成途徑。研究發(fā)現(xiàn),兩種細(xì)胞色素P450單加氧酶cle2和cle4,能將chevalon E... 

【文章來(lái)源】：云南民族大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：112 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

本研究所用技術(shù)路線

云南民族大學(xué)碩士學(xué)位論文23圖3.1滇重樓內(nèi)生真菌Aspergillusversicolor0312（左）和Aspergillusfelis0260（右）據(jù)此，我們對(duì)這兩株內(nèi)生真菌進(jìn)行了新一代全基因組測(cè)序。3.2.1全基因組測(cè)序?yàn)榱藢ふ褹spergillusversicolor0312和Aspergillusfelis0260中適合基因組挖掘研究的雜二萜因簇，我們將這兩株內(nèi)生真菌進(jìn)行了第三代全基因組測(cè)序。我們偶然發(fā)現(xiàn)0312菌株在不同培養(yǎng)基中生長(zhǎng)狀態(tài)差別很大，因此，對(duì)其進(jìn)行了培養(yǎng)基的篩選實(shí)驗(yàn)：利用實(shí)驗(yàn)室常用的MEA培養(yǎng)基、PDB培養(yǎng)基、DPY培養(yǎng)基，在搖床內(nèi)使用相同條件振蕩培養(yǎng)（圖3.2），觀察發(fā)現(xiàn)PDB培養(yǎng)基生長(zhǎng)狀態(tài)最佳，長(zhǎng)得最快，并且菌絲均勻，其次是MEA培養(yǎng)基，而在DPY培養(yǎng)基內(nèi)長(zhǎng)得最差。隨后，我們又對(duì)恒溫?fù)u床設(shè)置了不同的溫度，觀察發(fā)現(xiàn)0312在25℃，200rpm/min條件下，長(zhǎng)得最快，溫度升高，反而極大地抑制了其生長(zhǎng)，低于25℃，生長(zhǎng)也比較緩慢。因此，25℃，200rpm/min是0312菌株最佳的培養(yǎng)條件。圖3.2對(duì)Aspergillusversicolor0312篩選培養(yǎng)基

云南民族大學(xué)碩士學(xué)位論文23圖3.1滇重樓內(nèi)生真菌Aspergillusversicolor0312（左）和Aspergillusfelis0260（右）據(jù)此，我們對(duì)這兩株內(nèi)生真菌進(jìn)行了新一代全基因組測(cè)序。3.2.1全基因組測(cè)序?yàn)榱藢ふ褹spergillusversicolor0312和Aspergillusfelis0260中適合基因組挖掘研究的雜二萜因簇，我們將這兩株內(nèi)生真菌進(jìn)行了第三代全基因組測(cè)序。我們偶然發(fā)現(xiàn)0312菌株在不同培養(yǎng)基中生長(zhǎng)狀態(tài)差別很大，因此，對(duì)其進(jìn)行了培養(yǎng)基的篩選實(shí)驗(yàn)：利用實(shí)驗(yàn)室常用的MEA培養(yǎng)基、PDB培養(yǎng)基、DPY培養(yǎng)基，在搖床內(nèi)使用相同條件振蕩培養(yǎng)（圖3.2），觀察發(fā)現(xiàn)PDB培養(yǎng)基生長(zhǎng)狀態(tài)最佳，長(zhǎng)得最快，并且菌絲均勻，其次是MEA培養(yǎng)基，而在DPY培養(yǎng)基內(nèi)長(zhǎng)得最差。隨后，我們又對(duì)恒溫?fù)u床設(shè)置了不同的溫度，觀察發(fā)現(xiàn)0312在25℃，200rpm/min條件下，長(zhǎng)得最快，溫度升高，反而極大地抑制了其生長(zhǎng)，低于25℃，生長(zhǎng)也比較緩慢。因此，25℃，200rpm/min是0312菌株最佳的培養(yǎng)條件。圖3.2對(duì)Aspergillusversicolor0312篩選培養(yǎng)基

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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