昆蟲在長期演化過程中,形成了復雜的化學信息感知機制,高度發(fā)達的化學感受系統(tǒng)對于昆蟲與環(huán)境中的化學信息聯(lián)系具有重要作用。化學感受蛋白（chemosensory proteins,CSPs）可以識別寄主植物氣味揮發(fā)物和信息素組分,在昆蟲的化學感受系統(tǒng)中起著非常重要的作用,但目前對于其在化學感受系統(tǒng)中作用的分子機制并不明確。小地老虎Agrotis ipsilon（Hufnagel）屬于鱗翅目夜蛾科昆蟲,近年來在我國的發(fā)生危害日趨嚴重,主要為害玉米、棉花、高粱、煙草和蔬菜等作物幼苗。對該蟲的化學感受蛋白的功能解析有助于探索其化學感受的分子機制,也可為利用信息素調節(jié)其種群密度和發(fā)生范圍提供理論依據(jù)。更重要的是,可以為我們提供新的方法如通過干擾信息素類物質的識別過程對其進行有效防治。本文通過RT-PCR克隆了AipsCSP2基因,通過分析該基因序列可知其開放閱讀框長度為360 bp,編碼119個氨基酸,推導的氨基酸序列中有4個保守的半胱氨酸,符合典型的化學感受蛋白的結構特征;采用實時熒光定量qPCR技術研究了該基因在雌雄成蟲不同組織的表達量,發(fā)現(xiàn)其在雌蟲的性腺和雄蟲的附腺中特異高表達,在其他部位基... 

【文章來源】：河北農業(yè)大學河北省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１昆蟲識別氣味物質的假設模型（Ｌｅａｌ．?２０１３）??Ｆｉｇ．?１?Ｔｈｅ?ｈｙｐｏｔｈｅｔｉｃａｌ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ?ｉｎ?ｏｌｆａｃｔｏｒｙ?ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ?ｉｎ?ｉｎｓｅｃｔｓ?（Ｌｅａｌ．?２０１３）??①氣味分子進入感器淋巴液；②與氣味結合蛋白或化學感受蛋白結合：③ＯＢＰｓ／ＣＳＰｓ和氣味分子復合物共同激活??

?（ＡＮＳ）??Ｌ＇．ｘｃ．?３３７?ｎｍ．?Ｌ＇ｍ．?４０７－４１２?ｍｉｌ?Ｌｘｃ．?ｈ：?３８０?ｎｍ．?ｌｉｍ．?４６５?ｎｍ??ｌ??ＮＨ２?°?°??：丨：：Ｉ?丫：?、＿ｌ?°??ＯＨ??Ｉ?－?Ａｍｉｎｏａｎｔｈｒａｃｃｎｃ?＜?Ｉ?－?ＡＭＡ）?ｌ２－（＾－Ａｎｔｈｒｏｙｌ〇＼＼?ｓｔｅａｒｉｃ?ａｃｉｄ?（?ＡＳＡ）??／ｉｘｔ?２５６．?２８０．?２Ｖ５?ｎｍ．?／？；；？．?４Ｋ７－４９２?ｎｍ?３６０?ｎｍ．?Ｆｍｉ?ｋ：?４２５?ｎｍ??圖２化學感受蛋白結合實驗中常用探針化學結構和熒光特性（Ｇｕ．?２０１３）??Ｆｉｇ．２?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ?ａｎｄ?ｓｐｅｃｔｒａｌ?ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｐｒｏｂｅｓ?ｕｓｅｄ?ｉｎ?ｂｉｎｄｉｎｇ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ?ｏｆ?ｃｈｅｍｏｓｅｓｏｒ＞，??ｐｒｏｔｅｉｎｓ??１．３研究目的和意義??小地老虎ｄｇｒｏ／／．ｙ／／？７７ｏ？?（Ｈｕｆｎａｇｅｌ）屬于鱗翅目夜蛾科昆蟲。其別名有地蠶、土??蠶、黑地蠶、黑土蠶、地剪、切根蟲等，近些年來在我國的發(fā)生危害程度日趨嚴重，??已經(jīng)成為全國性的農業(yè)重要害蟲［６８】，其主要為害作物有玉米、棉花、高粱、煙草和蔬??菜等，同時也為害果園、花卉苗圃及草坪。小地老虎主要以幼蟲造成危害，白天潛伏??在土中，夜晚出來咬食作物幼苗接近地面的莖部，使整株死亡，造成缺苗斷壟，嚴重??時甚至會毀種［６９?７（）］。據(jù)報道，２０１０年青海省牧草良種繁殖場發(fā)生大面積小地老虎蟲??害，蟲害發(fā)生面積１０萬畝，人工草地蟲害最高密度達每平方米８６７頭，對該場種子??基地和退耕還

?河北農業(yè)大學碩士學位（畢業(yè)）論文???３結果和分析??３．１小地老虎的基因克隆??３．１．１提�。遥危翗悠窓z測??�。玻停烫崛〉男〉乩匣⒂鸹螅刺斓拇菩鄢上x的頭部（去除觸角）、胸部、腹部（去??除性腺或附腺）、足、翅、觸角、喙、下唇須、性腺及附腺組織ＲＮＡ樣品和雌成蟲羽??化后０￣６的性腺組織ＲＮＡ樣品進行瓊脂糖凝膠檢測（見圖３，圖４，圖５），電泳條??帶清晰，另�。玻蓿逃梦⒘糠止夤舛扔嫓y定濃度及ＯＤ２６０／２８０比值，結果表明，ＲＮＡ質??量及完整性較好，所提�。遥危恋模希模玻叮埃玻福氨戎翟冢保�？２．０之間，純度較高，可以??用于后續(xù)的基因克隆工作。??Ｍｌ?２?３?４?５?６?７?８??．＾Ｓ：?ｍｉｌ??圖３小地老虎雌成蟲組織ＲＮＡ樣品檢測??Ｆｉｇ．３?ＲＮＡ?ｓａｍｐｌｅｓ?ｆｒｏｍ?ｆｅｍａｌｅ?ａｄｕｌｔｓ?ｏｆ?Ａｇｒｏｔｉｓ?ｉｐｓｉｌｏｎ??Ｍ：?ＭａｒｋｅｒＤ２０００；丨：頭（去除觸角）；２：胸；３：足；４：翅；５：觸角；６：喙；７：下唇須；８：腹（去除性腺）??１?２３４５６７８９?１０?１Ｍ２?１３?１４?１５?１６?１７?Ｍ??：、、￣＾?丨：：??５Ｓ?＾?冗?＿雲(yún)馨｜廠；＇：ｌ■蚊．．?＿ｉ｜ｉ｜??圖４小地老虎雄成蟲組織提�。遥危翗悠窓z測??Ｆｉｇ．４?ＲＮＡ?ｓａｍｐｌｅｓ?ｆｒｏｍ?ｍａｌｅ?ａｄｕｌｔｓ?〇｛Ａｇｒｏｔｉｓ?ｉｐｓｉｌｏｎ??１：頭（去除觸角）；２：胸；３：腹（去除附腺）；４：足；５：翅；６－８：附腺；９－１１：觸角；１２－１４：喙；１５－１７：下??唇須；Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ?Ｄ２０００??２０??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]椰子織蛾CSP基因的克隆與序列分析[J]. 袁遠,高熹,喜超,楊志新,雷騰云,張連根,朱家位.  江蘇農業(yè)科學. 2019(03)
[2]仁扇舟蛾化學感受蛋白cDNA的克隆、序列分析及時空表達[J]. 李慧,顧天滋,陳昌宇,黃開茹,田朔,趙旭東,郝德君.  林業(yè)科學. 2018(04)
[3]小地老虎的發(fā)生與防治技術研究[J]. 郭海琴.  種子科技. 2017(09)
[4]家蠶化學感受蛋白CSP16的表達及結合特性分析[J]. 郭興國,陳瑩,邢秋婷,邢萬靜,闞云超,喬惠麗.  昆蟲學報. 2016(06)
[5]昆蟲化學感受蛋白及其功能研究進展[J]. 徐浩智,游銀偉,張龍.  農業(yè)生物技術學報. 2015(01)
[6]昆蟲化學感受蛋白[J]. 龔亮,陳永,程功,鐘國華.  昆蟲知識. 2009(04)
[7]小地老虎的發(fā)生與防治[J]. 陳建忠.  安徽農業(yè). 2003(03)
[8]小地老虎對幾類殺蟲劑的毒力反應及其抗藥性變化[J]. 韓召軍.  植物保護學報. 1986(02)

博士論文
[1]沙蔥螢葉甲嗅覺相關蛋白的鑒定及功能研究[D]. 李玲.內蒙古農業(yè)大學 2019
[2]華山松大小蠹化學感受蛋白和味覺受體基因功能研究[D]. 李竹梅.西北農林科技大學 2018
[3]東方粘蟲化學感受蛋白的功能分析[D]. 安妮拉（Aneela Younas）.華中農業(yè)大學 2018
[4]西花薊馬嗅覺相關蛋白鑒定及功能研究[D]. 張治科.中國農業(yè)科學院 2015
[5]棉鈴蟲及其天敵大草蛉和中華通草蛉嗅覺相關基因的克隆與功能研究[D]. 李兆群.南京農業(yè)大學 2015
[6]小地老虎性信息素通訊的分子和細胞機制[D]. 谷少華.中國農業(yè)科學院 2013
[7]小地老虎性信息素的提取、鑒定及相關生物學研究[D]. 向玉勇.貴州大學 2007

碩士論文
[1]小地老虎黑色素信號通路關鍵基因研究[D]. 楊洋.華東師范大學 2019
[2]松褐天牛氣味結合蛋白及化學感受蛋白的功能分析[D]. 黃曉峰.華中農業(yè)大學 2018
[3]蘋果小吉丁蟲化學感受蛋白基因的克隆、表達及功能分析[D]. 孫可可.西北農林科技大學 2018
[4]桃蚜報警信息素結合蛋白的鑒定及功能分析[D]. 王倩.中國農業(yè)科學院 2018
[5]中黑盲蝽嗅覺相關蛋白鑒定及非典型嗅覺受體基因分析[D]. 崔歡歡.中國農業(yè)科學院 2016
[6]苜蓿盲蝽化學感受蛋白AlinCSP7-8免疫定位及氣味結合特性[D]. 馬曉玉.南京農業(yè)大學 2014
[7]家蠶化學感受蛋白BmorCSP9在幼蟲和蛹期的表達分析[D]. 荊譞.河南農業(yè)大學 2014



本文編號：3597558