紅花為菊科紅花屬植物紅花（Carthamus tinctorius L.）的干燥花冠,是我國傳統(tǒng)中藥,具有抗腫瘤、抗氧化和抗炎等藥理作用。黃酮醇及其糖苷類化合物是紅花的主要活性成分之一。為探討紅花中黃酮醇苷的生物合成途徑,本研究對紅花黃酮醇苷代謝途徑中的關(guān)鍵酶如黃烷酮3-羥化酶（flavanone 3-hydroxylase,F3H）、黃酮醇合酶（flavonol synthase,FLS）及糖基轉(zhuǎn)移酶（glycosyltransferase,GT）進行了挖掘并對其催化特性進行了系統(tǒng)性研究。研究結(jié)果如下:成功從紅花中尋找并克隆了黃烷酮3-羥化酶（CtF3H）基因、黃酮醇合酶（CtFLS）基因及糖基轉(zhuǎn)移酶（UGT88B2）基因,并在大腸桿菌中實現(xiàn)了基因的外源表達。紅花黃烷酮3-羥化酶（CtF3H）能夠催化黃烷酮類化合物的C-3位羥基化,生成二氫黃酮醇。選擇多對手性異構(gòu)體的黃烷酮類化合物對CtF3H的催化特點進行了考察,體外酶促反應(yīng)結(jié)果表明:重組酶CtF3H可專一性識別S構(gòu)型的多個黃烷酮類底物包括（2S）-柚皮素、（2S）-圣草酚、（2S）-甘草素、（2S）-橙皮素和（2S）-杜鵑素,高效... 

【文章來源】：中央民族大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：122 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－３植物黃酮醇苷生物合成途徑示意圖??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ?ｐａｔｈｗａｙ?ｏｆ?ｆｌａｖｏｎｏｌ?ｇｌｕｃｏｓｉｄｅｓ?ｉｎ?ｐｌａｎｔｓ??１．３－酶Ｆ３Ｈ

紅花新鮮花瓣??轉(zhuǎn)錄組測序???Ｉ???ＲＮＡ的提取??１??ｆ黃烷１１３－羥化酶、黃酮醇合酶、＇??糖基轉(zhuǎn)移酶丨ｊ選基因的克隆??１??蛋白的表達純化??—酶功＾表征丨￣＞丨產(chǎn)物結(jié)構(gòu)鑒定１??酶學(xué)性Ｔ質(zhì)測定１?丨構(gòu)建￡程菌１??ｊ?：條件優(yōu)化??ｐＳ?ｐＳ?｜制備活Ａ化合物??最?ｓ舍??適?Ｓ屬??ｉ皿?？?網(wǎng)??度?ｐＨ?子??圖１－１０本課題研究的技術(shù)路線??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１０?Ｔｈｅ?ｔｅｃｈｎｉｃａｌ?ｒｏｕｔｅ?ｏｆ?ｔｈｉｓ?ｓｔｕｄｙ??１３??

Ｍ?１??■５：；１??１００（１?ＩＢＳ??圖２－２紅花花瓣總ＲＮＡ提取的瓊脂糖凝膠電泳圖．Ｍａｒｋｅｒ：?Ｉ＇ｍ瓜５ＫＤＮＡｍａｒｋｅｒ．??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?ｆｒｏｍ?ｓａｆｆｌｏｗｅｒ?ｐｅｔａｌｓ．?Ｍａｒｋｅｒ：?Ｔｒａｎｓ?５Ｋ?ＤＮＡ??ｍａｒｋｅｒ．??３．２?ＯＦＪ／／基因的擴增與載體構(gòu)建??基因全長擴増的瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果見圖２－３，條帶大小符合其開放閱讀框??（Ｏｐｅｎ?Ｒｅａｄｉｎｇ?Ｆｒａｍｅ，?ＯＲＦ）的基因長度（１０８６?ｂｐ）。??Ｍ?１??ｂｐ?ＨｊｊＨ??ｉｄ??圖２－３?ＣＶＦＪ／／基因全長擴增的瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果．１：ＱＦ３Ｈ；?Ｍａｒｋｅｒ：?７ｈｗｗ５ＫＤＮＡｍａｒｋｅｒ??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３．?ＣｔＦ３Ｈ?ｇｅｎｅ?ｆｕｌｌ－ｌｅｎｇｔｈ?ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ．??３．３?２－酮戊二酸依賴的雙加氧酶基因的生物信息學(xué)分析??通過ＭＥＧＡ７．０軟件分析己報道的其他植物來源的類黃酮生物合成途徑中的２－酮戊二??酸依賴的雙加氧酶的氨基酸序列（黃烷酮３－羥化酶Ｆ３Ｈ，黃酮醇合酶ＦＬＳ，黃酮合酶ＡＮＳ，??花青素合酶ＡＮＳ）之間的進化關(guān)系，建立Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｎｉｎｇ?Ｔｒｅｅ系統(tǒng)進化樹（圖２－４）。進??化樹分析表明，來源于植物的２－酮戊二酸依賴的雙加氧酶（Ｆ３Ｈ，ＦＬＳ，ＦＮＳ，ＡＮＳ）不同家族??之間的親緣關(guān)系距離較遠，但每個家族內(nèi)基因的同源性相對較高，進化關(guān)

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]紅花化學(xué)成分研究與活性評價[D]. 樂世俊.南京中醫(yī)藥大學(xué) 2015



本文編號：3345658