水稻稻瘟病是由稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)引起的真菌性病害。廣泛分布于世界各水稻種植區(qū),發(fā)生時嚴(yán)重影響水稻產(chǎn)量,造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。稻瘟病菌在水稻各個生長時期均可發(fā)生,其中穗頸瘟危害最為嚴(yán)重。稻瘟病菌具有典型的侵染循環(huán),分生孢子通過風(fēng)、雨水傳播,落到植物表面,在合適的溫度濕度下形成附著胞;附著胞內(nèi)部積聚巨大的膨壓,形成侵染栓侵入寄主植物細(xì)胞,侵染菌絲在細(xì)胞間擴(kuò)展,引起病變,病斑形成新的分生孢子進(jìn)行再次侵染。AGC激酶是一類傳統(tǒng)的Ser/Thr蛋白激酶,在真核生物中高度保守。該家族很多激酶受TOR(target of rapamycin)調(diào)控,對細(xì)胞生長、發(fā)育以及生存具有重要的生理意義。本研究以稻瘟病菌AGC激酶為研究對象,通過基因敲除、表型分析、細(xì)胞學(xué)分析以及脅迫應(yīng)答等實驗,分析了AGC激酶在稻瘟病菌生長、發(fā)育和致病過程中的作用。通過同源序列比對,我們鑒定出22個AGC激酶家族基因,構(gòu)建了12個基因敲除載體,最終得到7個基因敲除突變體:ΔMo07012、ΔMo01260、ΔMo05074、ΔMo10181、ΔMo09519、ΔMo02757、ΔMo12408;其中M...

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圖1.1稻瘟病菌的侵染循環(huán)(WilsonandTalbot,2009)

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文2水稻葉片表皮。通過侵染菌絲侵染植物組織，引起稻瘟病的癥狀。在高溫高濕條件下，病害部位產(chǎn)生大量分生孢子，并通過風(fēng)、雨水傳播到新的寄主植物上，進(jìn)行再侵染(WilsonandTalbot,2009;周建明等,1999)。圖1.1稻瘟病菌的侵染循環(huán)(Wilsonan....

圖3.1基因敲除原理(Luetal.,2014)

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文27圖3.1基因敲除原理(Luetal.,2014)A.PKO1B骨架載體圖；B.利用ClonExpressTMMultiSOneStepCloningKit構(gòu)建敲除載體示意圖；C.ATMT同源替換目的基因原理圖；D.利用顯微鏡觀察GFP熒光，初步篩選轉(zhuǎn)化子；....

圖3.2稻瘟病菌AGC激酶基因敲除雙重PCR電泳驗證

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文283.1.2敲除突變體的篩選和驗證通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法（ATMT）將測序正確的目的載體轉(zhuǎn)入到稻瘟病菌，數(shù)天后在含草胺磷的抗性平板上長出轉(zhuǎn)化子，通過熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)化子有無熒光進(jìn)行初步篩選，選取不含熒光的轉(zhuǎn)化子到抗性平板上進(jìn)行二次篩眩數(shù)天后，提取轉(zhuǎn)化子的基因組....

圖3.3稻瘟病菌AGC激酶突變體菌落形態(tài)及相對生長速率

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文30圖3.3稻瘟病菌AGC激酶突變體菌落形態(tài)及相對生長速率A.AGC激酶突變體在CM平板上生長一周后的菌落形態(tài)；B.AGC激酶突變體的相對生長速率（相對生長速率=突變體的菌落生長直徑/野生型的菌落生長直徑），實驗獨(dú)立重復(fù)三次結(jié)果取平均值，利用SPSS進(jìn)行單因素....

本文編號：4005153