本文關(guān)鍵詞：幾種海洋經(jīng)濟(jì)動(dòng)物種質(zhì)資源超低溫冷凍保存研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：種質(zhì)資源是海水養(yǎng)殖生產(chǎn)、優(yōu)良品種培育及海洋漁業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。然而,隨著海水養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展,海洋動(dòng)物核心種質(zhì)鑒定和保護(hù)研究嚴(yán)重滯后的負(fù)面效應(yīng)日益突出。超低溫保存技術(shù)是種質(zhì)細(xì)胞長期保存的重要方法,相關(guān)理論與技術(shù)的發(fā)展,對(duì)于種質(zhì)資源的保護(hù)、遺傳改良以及養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展有著重要應(yīng)用價(jià)值和理論意義。1.太平洋鱈精液超低溫冷凍采用分步降溫法冷凍保存太平洋鱈(Gadus macrocephalus)精液,并用掃描電鏡和透射電鏡技術(shù)研究了精子的超微結(jié)構(gòu)損傷。分析了添加劑(蛋黃)及五種抗凍劑(PG(丙二醇)、DMSO(二甲基亞砜)、EG(乙二醇)、GLY(甘油)、MeOH(甲醇))不同濃度(8%、10%、12%、14%、16%、18%)對(duì)太平洋鱈精子冷凍保存效果的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,蛋黃能夠顯著提高太平洋鱈冷凍保存效果(P0.05)；在以HBSS為稀釋液,12%PG中添加10%蛋黃保存的凍融精子運(yùn)動(dòng)率最高(85.87%±1.6%),顯著高于其他凍存組(P0.05)。添加蛋黃的12%濃度的DMSO組解凍后精子運(yùn)動(dòng)速率較高,平均直線速度、平均曲線速度、平均路徑速度分別達(dá)到了(120.39±20.78)μm/s、(120.39±20.78)μm/s、 (155.64±12.02)μm/s,與其他各實(shí)驗(yàn)組差異顯著(P0.05)。通過掃描電鏡和透射電鏡觀察新鮮和凍融后的鱈魚精子發(fā)現(xiàn),鮮精中75.5%精子形態(tài)結(jié)構(gòu)正常、24.5%精子形態(tài)結(jié)構(gòu)異常；運(yùn)動(dòng)率最高的凍精中67%精子形態(tài)結(jié)構(gòu)正常、33%精子形態(tài)結(jié)構(gòu)異常。超低溫保存對(duì)太平洋鱈精子結(jié)構(gòu)產(chǎn)生了顯著影響,細(xì)胞膜破裂、線粒體腫脹變形,鞭毛脫落、斷裂。2.條紋鋸洦精液超低溫冷凍保存研究為建立條紋鋸洦(Centropristis striata)精液超低溫冷凍保存方法,實(shí)驗(yàn)采用計(jì)算機(jī)輔助精子分析系統(tǒng)(CASA)分析了六種抗凍保護(hù)劑(GLY[甘油]、DMSO[二甲基亞砜]、PG[丙二醇]、EG[乙二醇]、MeOH[甲醇]、DMA[二甲基乙酰胺])在四種不同濃度下(5、]0、]5、20%,v/v)對(duì)條紋鋸洦精液冷凍保存的效果。結(jié)果顯示：以HBSS為稀釋液,采用程序降溫儀分步降溫冷凍保存條紋鋸洦精液,37℃水浴解凍后的精子中,15%PG作為抗凍保護(hù)劑的精子運(yùn)動(dòng)率最高,達(dá)到93.1±0.9%,與鮮精差異不顯著(P0.05),15%PG作為抗凍保護(hù)劑的精子水浴解凍后精子的運(yùn)動(dòng)速度最高,平均直線速度、平均曲線速度、平均路徑速度分別達(dá)到了(88,3±0.3)μm/s、(76.2±0.5)μm/s、 (86.7±0.7)μm/s,與鮮精差異不顯著(P0.05)。在不同種類及不同濃度抗凍保護(hù)劑保護(hù)下,15%PG作為抗凍保護(hù)劑的精子解凍后1mmin內(nèi)運(yùn)動(dòng)率變化與鮮精差異不顯著(P0.05)。研究表明,15%PG為條紋鋸洦最佳抗凍保護(hù)劑,可用于條紋鋸洦精液的超低溫冷凍保存。3.太平洋牡蠣精液的超低溫保存研究本研究篩選了六種抗凍保護(hù)劑(GLY[甘油],DMSO[二甲基亞砜],PG[丙二醇],EG[乙二醇],DMA[二甲基乙酰胺],MeOH[甲醇])及其五種不同濃度(6%,8%,10%,12%,14%,V/V)、三種稀釋液(無鈣HBSS,人工海水[ASW],過濾海水[FSW])、四種稀釋比例(1：1,1：2,1：4,1：6)、三種添加劑(蔗糖,葡萄糖,海藻糖)、三個(gè)分步降溫程序(程序A,程序B,程序C)對(duì)太平洋牡蠣(Crassostrea gigas)精液冷凍保存的影響,成功建立了太平洋牡蠣精液超低溫保存方法：以10%DMSO為抗凍保護(hù)劑,無鈣HBSS為稀釋液,1：4的稀釋比例,添加0.45mol/L的海藻糖,采用分布降溫法冷凍保存太平洋牡蠣的精液,37℃水浴解凍后精液運(yùn)動(dòng)率達(dá)到71.27%±3.24%,顯著高于其它實(shí)驗(yàn)組(P0.05),受精率和孵化率分別達(dá)到95.04%±1.99%、93.33%±1.33%,與鮮精(88.89%±15.16%,94.90%±0.95%)、程序冷凍前精液(95.96%±2.15%,92.67%±14.83%)差異不顯著(P0.05),證明該太平洋牡蠣精液超低溫保存方法可以應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐和科學(xué)研究中。4.太平洋牡蠣精子超低溫冷凍后超微結(jié)構(gòu)損傷研究采用程序降溫儀分步降溫冷凍保存太平洋牡蠣精液,并用掃描電鏡、透射電鏡研究了精子的超微結(jié)構(gòu)損傷。超低溫冷凍保存后太平洋牡蠣精子的運(yùn)動(dòng)率、受精率及孵化率與鮮精無顯著差異。鮮精中84.5%的精子形態(tài)結(jié)構(gòu)正常,凍精中73%的精子形態(tài)結(jié)構(gòu)正常。形態(tài)結(jié)構(gòu)正常的精子表現(xiàn)為頂體、質(zhì)膜、線粒體與鞭毛結(jié)構(gòu)完整、染色質(zhì)形狀規(guī)則,頂體、線粒體及中心粒結(jié)構(gòu)正常,鞭毛形態(tài)完整、微管結(jié)構(gòu)清晰；形態(tài)結(jié)構(gòu)異常的精子表現(xiàn)為頂體脫落、解體,精子頭部質(zhì)膜膨脹、破裂、染色質(zhì)腫脹、破裂、解體,線粒體移位、脫落、膨脹,嵴退化或消失,鞭毛彎折、斷裂,微管解聚。結(jié)果顯示,以10% DMSO為抗凍保護(hù)劑,HBSS溶液為稀釋液,1：4的稀釋比例,添加海藻糖,采用分步降溫法冷凍保存,對(duì)太平洋牡蠣精子具有較好的抗凍保護(hù)作用,合適的凍存方法可以有效的保護(hù)太平洋牡蠣精子冷凍過程中結(jié)構(gòu)損傷。本研究將有助于太平洋牡蠣種質(zhì)資源的收集保存及應(yīng)用。5.太平洋牡蠣擔(dān)輪幼蟲的超低溫保存研究本實(shí)驗(yàn)研究了六種抗凍保護(hù)劑GLY(甘油)、DMSO(二甲基亞砜)、PG(丙二醇)、EG(乙二醇)、DMA(二甲基乙酰胺)和MET(甲醇)在三種不同濃度下(5%、10%、15%,v/v)對(duì)太平洋牡蠣擔(dān)輪幼蟲的毒性作用及冷凍保存的影響。太平洋牡蠣擔(dān)輪幼蟲毒性實(shí)驗(yàn)證明：抗凍保護(hù)劑的種類和濃度對(duì)太平洋牡蠣擔(dān)輪幼蟲產(chǎn)生的毒性強(qiáng)弱不同,在抗凍保護(hù)劑濃度為5%時(shí),GLY、DMSO、 PG、EG對(duì)太平洋牡蠣的毒性作用顯著低于其他抗凍保護(hù)劑(P0.05)；隨著抗凍保護(hù)劑濃度增加到10%,GLY、DMSO、EG、MET對(duì)太平洋牡蠣擔(dān)輪幼蟲的毒性作用顯著低于其他抗凍保護(hù)劑(P0.05)；而抗凍保護(hù)劑濃度為15%時(shí),GLY、DMSO對(duì)太平洋牡蠣擔(dān)輪幼蟲的毒性作用顯著低于其他抗凍保護(hù)劑(P0.05),且隨著抗凍保護(hù)劑濃度的升高,其對(duì)太平洋牡蠣擔(dān)輪幼蟲的毒性作用也增大。太平洋牡蠣擔(dān)輪幼蟲的超低溫冷凍保存實(shí)驗(yàn)證明：以10% DMSO作為抗凍保護(hù)劑,采用分步降溫法冷凍保存太平洋牡蠣擔(dān)輪幼蟲,28℃水浴解凍后擔(dān)輪幼蟲運(yùn)動(dòng)率達(dá)到(73.00±2.00)%,顯著高于其他實(shí)驗(yàn)組(P0.05),其次為GLY組,且各濃度間差異不顯著(P0.05)。該研究為太平洋牡蠣及其他貝類胚胎保存提供了科學(xué)依據(jù),在貝類遺傳育種和生物技術(shù)等方面具有一定的應(yīng)用前景,具有重要的生產(chǎn)實(shí)踐價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：海洋動(dòng)物 種質(zhì) 精子 胚胎 超低溫冷凍保存
【學(xué)位授予單位】：中國海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S917.4
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-15
• 前言15-17
• 第一章 文獻(xiàn)綜述17-28
• 1. 海洋動(dòng)物種質(zhì)冷凍保存研究意義17-19
• 2. 海洋動(dòng)物種質(zhì)超低溫保存的研究現(xiàn)狀19-24
• 2.1 魚類精子冷凍保存技術(shù)研究現(xiàn)狀20
• 2.2 貝類精子冷凍保存技術(shù)研究現(xiàn)狀20-21
• 2.3 海水魚類胚胎冷凍保存技術(shù)研究現(xiàn)狀21-23
• 2.4 貝類胚胎和卵子冷凍保存技術(shù)研究現(xiàn)狀23-24
• 3. 冷凍保存對(duì)海洋動(dòng)物種質(zhì)質(zhì)量影響的研究現(xiàn)狀24-25
• 4. 冷凍保存對(duì)種質(zhì)形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響25-26
• 5. 冷凍保存時(shí)間對(duì)種質(zhì)生理活性的影響26
• 6. 本研究的內(nèi)容和意義26-28
• 第二章 太平洋鱈精液超低溫冷凍方法的建立及精子超微結(jié)構(gòu)分析28-40
• 1. 材料和方法28-29
• 1.1 樣品采集28
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法28-29
• 1.3 鮮精與凍精的活力測(cè)定29
• 1.4 鮮精與凍精的超微結(jié)構(gòu)觀察29
• 1.5 數(shù)據(jù)處理29
• 2. 結(jié)果29-36
• 2.1 添加劑蛋黃對(duì)精子運(yùn)動(dòng)率的作用29-31
• 2.2 抗凍劑種類和濃度對(duì)運(yùn)動(dòng)率的影響31
• 2.3 抗凍劑種類和濃度對(duì)精子活力的影響31-34
• 2.4 抗凍劑種類和濃度對(duì)運(yùn)動(dòng)率的影響34-36
• 2.4.1 掃描電鏡觀察結(jié)構(gòu)正常和異常的精子34-35
• 2.4.2 透射電鏡觀察結(jié)構(gòu)正常和結(jié)構(gòu)異常的精子35-36
• 3. 討論36-39
• 3.1 抗凍劑種類和濃度對(duì)運(yùn)動(dòng)率的影響36-37
• 3.2 抗凍劑種類和濃度對(duì)精子活力的影響37-38
• 3.3 抗凍劑種類和濃度對(duì)精子運(yùn)動(dòng)速度的影響38
• 3.4 太平洋鱈鮮精及凍精的超微結(jié)構(gòu)38-39
• 4. 小結(jié)39-40
• 第三章 條紋鋸洦精液超低溫冷凍保存研究40-49
• 1 材料和方法40-41
• 1.1 樣品采集40
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法40-41
• 1.3 鮮精與凍精的活力測(cè)定41
• 1.4 數(shù)據(jù)處理41
• 2 結(jié)果41-45
• 2.1 抗凍劑種類和濃度對(duì)精子運(yùn)動(dòng)率的影響41-42
• 2.2 抗凍劑種類和濃度對(duì)精子運(yùn)動(dòng)性能的影響42-44
• 2.3 不同濃度不同種類的抗凍劑對(duì)精子激活后運(yùn)動(dòng)率的影響44-45
• 3 討論45-49
• 3.1 抗凍劑種類和濃度對(duì)精子運(yùn)動(dòng)率的影響45-46
• 3.2 抗凍劑種類和濃度對(duì)精子運(yùn)動(dòng)速度的影響46-47
• 3.3 不同濃度和種類抗凍劑激活時(shí)間對(duì)精子運(yùn)動(dòng)率的影響47-49
• 第四章 太平洋牡蠣精液的超低溫保存研究49-61
• 1 材料與方法49-52
• 1.1 太平洋牡蠣的采集49-50
• 1.2 精液活力的檢測(cè)50
• 1.3 抗凍保護(hù)液的配制50
• 1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)50-52
• 1.4.1 抗凍保護(hù)劑種類對(duì)太平洋牡蠣精液冷凍保存的影響50
• 1.4.2 抗凍劑濃度對(duì)太平洋牡蠣精液冷凍保存效果的影響50
• 1.4.3 三種稀釋液對(duì)精液冷凍效果的影響50-51
• 1.4.4 精液與抗凍液稀釋比例對(duì)太平洋牡蠣精液冷凍保存效果的影響51
• 1.4.5 不同降溫程序?qū)豪鋬霰４嫘Ч挠绊?/span>51
• 1.4.6 抗凍添加劑對(duì)精液冷凍效果的影響51-52
• 1.4.7 受精率和孵化率的測(cè)定52
• 1.4.8 統(tǒng)計(jì)分析52
• 2 結(jié)果52-57
• 2.1 抗凍劑種類對(duì)太平洋牡蠣精液冷凍保存效果的影響52-53
• 2.2 抗凍劑濃度對(duì)太平洋牡蠣精液保存效果的影響53-54
• 2.3 稀釋液種類對(duì)太平洋牡蠣精液保存效果的影響54
• 2.4 不同稀釋比例對(duì)太平洋牡蠣精液保存效果的影響54-55
• 2.5 不同添加劑對(duì)太平洋牡蠣精液保存效果的影響55
• 2.6 不同降溫程序?qū)μ窖竽迪牼罕４嫘Ч挠绊?/span>55-56
• 2.7 太平洋牡蠣精液超低溫保存對(duì)受精率和孵化率的影響56-57
• 3 討論57-61
• 3.1 不同抗凍劑種類對(duì)太平洋牡蠣精液保存效果的影響57
• 3.2 不同抗凍劑濃度對(duì)太平洋牡蠣精液保存效果的影響57-58
• 3.3 不同稀釋液對(duì)太平洋牡蠣精液保存效果的影響58
• 3.4 不同稀釋比例對(duì)太平洋牡蠣精液保存效果的影響58-59
• 3.5 不同添加劑對(duì)太平洋牡蠣精液保存效果的影響59
• 3.6 不同降溫速率對(duì)太平洋牡蠣精液保存效果的影響59-60
• 3.7 太平洋牡蠣精液超低溫冷凍對(duì)受精率和孵化率的影響60-61
• 第五章 太平洋牡蠣精子超低溫冷凍后超微結(jié)構(gòu)損傷研究61-74
• 1 材料與方法61-63
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料62
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法62-63
• 1.2.1 精子的超低溫凍存及解凍62
• 1.2.2 鮮精與凍精的活力測(cè)定62
• 1.2.3 受精率和孵化率的測(cè)定62
• 1.2.4 鮮精與凍精的超微結(jié)構(gòu)觀察62-63
• 1.3 數(shù)據(jù)處理63
• 2 結(jié)果63-70
• 2.1 太平洋牡蠣鮮精及凍精的受精率、孵化率及運(yùn)動(dòng)率63
• 2.2 太平洋牡蠣鮮精及凍精的超微結(jié)構(gòu)63-70
• 2.2.1 太平洋牡蠣精子冷凍前后掃描電鏡超微結(jié)構(gòu)63-65
• 2.2.2 太平洋牡蠣精子冷凍前后透射電鏡超微結(jié)構(gòu)65-70
• 3 討論70-72
• 4. 小結(jié)72-74
• 第六章 太平洋牡蠣擔(dān)輪幼蟲的超低溫保存研究74-83
• 1. 材料與方法75-76
• 1.1 太平洋牡蠣擔(dān)輪幼蟲的采集75
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法75-76
• 1.3 太平洋牡蠣擔(dān)輪幼蟲活力測(cè)定76
• 1.4 數(shù)據(jù)處理76
• 2 結(jié)果76-80
• 2.1 不同濃度及種類的抗凍保護(hù)劑對(duì)太平洋牡蠣擔(dān)輪幼蟲的毒性作用76-77
• 2.2 抗凍保護(hù)劑濃度及種類對(duì)太平洋牡蠣擔(dān)輪幼蟲超低溫保存的影響77-79
• 2.3 太平洋牡蠣擔(dān)輪幼蟲超低溫保存方法的篩選79-80
• 3 討論80-83
• 3.1 抗凍保護(hù)劑種類和濃度對(duì)太平洋牡蠣擔(dān)輪幼蟲的毒性作用80-81
• 3.2 太平洋牡蠣擔(dān)輪幼蟲的超低溫保存81-83
• 參考文獻(xiàn)83-95
• 致謝95-96
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷96-97
• 論文及專利發(fā)表情況97-98

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 莫棣華;;草魚、■魚、鳙魚、鰱魚精液超低溫冷凍技術(shù)研究鑒定會(huì)在順德縣舉行[J];畜牧獸醫(yī)科技;1983年02期

2 孫振久;王鳴;;辣椒莖尖超低溫冷凍貯藏研究[J];陜西農(nóng)業(yè)科學(xué);1990年02期

3 早坂昭二;鲇l⑶а，

本文編號(hào)：333249