本文關(guān)鍵詞：貽貝閉殼肌—殼界面結(jié)構(gòu)和粘結(jié)機理的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：貽貝閉殼肌的“疤痕”位置(AMS)是閉殼肌粘結(jié)貝殼的固著點。它是一個非常重要的有機-無機界面和應(yīng)力分布區(qū)域。疤痕是最重要的應(yīng)力分布位點,與肌腱-骨骼的粘附相連的位點結(jié)構(gòu)相似。盡管最近有一些關(guān)于這方面的研究,但對于貽貝“疤痕”的結(jié)構(gòu)和礦物組成還不是非常了解。對厚殼貽貝Mytilus coruscus疤痕的結(jié)構(gòu)、有機質(zhì)和礦物結(jié)構(gòu)研究發(fā)現(xiàn),疤痕中存在分層結(jié)構(gòu),有機質(zhì)和以不同形式存在的礦物質(zhì)。在Mytilus coruscus的AMS位置柱狀層和珍珠層中,文石是其碳酸鈣礦物的主要存在形式,也有少量方解石的存在。這與同屬于貽貝屬的Mytilus galloprovincialis的實驗結(jié)果比較相似,只不過文石相對含量稍有區(qū)別。有機質(zhì)的研究表明至少有一種分子量約為70 kDa的蛋白質(zhì)優(yōu)先存在于該柱狀層中。另外,我們通過研究三種雙殼類的AMS位置：Mytilus coruscus, Chlamys farreri和Ruditapes philippinarum。結(jié)果顯示這三種雙殼類生物的AMS處的結(jié)構(gòu)是非常不同的。通過掃描電子顯微鏡,我們發(fā)現(xiàn)Mytilus coruscus和Chlamys farreri的AMS處,在片層狀的珍珠層上方,有一層柱狀層,特別是在Mytilus coruscus的AMS位置,這個界面層更加規(guī)則。原子力顯微鏡顯示,這些雙殼類中的AMS位置的殼結(jié)構(gòu)比起其他珍珠層位置更為光滑。紅外光譜和X射線衍射顯示AMS位置柱狀層的物質(zhì)組成和珍珠層是有細微區(qū)別的,雖然二者都主要由文石構(gòu)成,但AMS位置柱狀層文石含量更高。通過十二烷基苯磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳對蛋白進行分離分析表明,在Mytilus coruscus的AMS界面高度有序的柱狀層中,有一種分子量大約在70 kDa的特異性蛋白。我們對這種分子量為70 kDa蛋白的提純方法進行了摸索,主要方法是利用8 M尿素溶液對貝殼粉進行粗提,再用高壓液相色譜法(HPLC)對蛋白進一步提純。C8反相色譜柱對蛋白純化的效果較好,基本能從多種蛋白中分離出70 kDa和100 kDa兩種蛋白。這兩種蛋白性質(zhì)相近,各種色譜柱均較難分離。最終,采取凝膠洗脫的方法,獲得純凈的70 kDa蛋白。對這種蛋白進一步的分析表明,它具有很高含量的天冬氨酸Asx(Asp+Asn),谷氨酸Glx(Glu+Gln)和甘氨酸Gly。對它的蛋白質(zhì)凝膠樣品鑒定的結(jié)果表明,這種70 kDa的特異性蛋白與貽貝的兩組基因gi|XXXXX|comp269280_c1_seq1orf=823-3420(-)和gi|XXXXX|comp267300_c0_seq1 orf=2-1066(-)都有很大的關(guān)系。在蛋白純化過程中,一直較難以分離的70 kDa和100 kDa蛋白之間也存在著一定的聯(lián)系�；騡i|XXXXX|comp269280-c1_seq1 orf=823-3420(-)與這兩組蛋白的合成都有一定的聯(lián)系。在貽貝閉殼肌-殼界面處存在的特異性70 kDa蛋白的粘附性質(zhì)等相關(guān)性質(zhì)還有待于進一步探究,但可以確認,這種蛋白在有機-無機界面之間的粘結(jié)一定發(fā)揮了重要的作用。對于貽貝足蛋白的相關(guān)粘附性研究可以為進一步實驗提供一些借鑒和啟發(fā)。AMS位置的這種特殊結(jié)構(gòu)和組成對這個特殊應(yīng)力點的穩(wěn)定性,粘結(jié)和功能方面都可能發(fā)揮了很重要的作用。
【關(guān)鍵詞】：軟體動物貝殼 閉殼肌-殼界面 殼蛋白 殼微觀結(jié)構(gòu)
【學(xué)位授予單位】：中國海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S917.4
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 1 文獻綜述11-26
• 1.1 殼的結(jié)構(gòu)12-14
• 1.1.1 珍珠層的結(jié)構(gòu)12-13
• 1.1.2 交叉片狀層的結(jié)構(gòu)13
• 1.1.3 葉片層結(jié)構(gòu)13-14
• 1.1.4 柱狀層結(jié)構(gòu)14
• 1.1.5 光輝層14
• 1.2 軟體動物貝殼中的有機基質(zhì)14-18
• 1.2.1 糖和酯14-15
• 1.2.2 軟體動物殼中的基質(zhì)蛋白15-18
• 1.3 貽貝足蛋白18-25
• 1.3.1 貽貝的附著18-19
• 1.3.2 貽貝足絲19-25
• 1.4 選題意義和研究內(nèi)容25-26
• 1.4.1 選題意義25
• 1.4.2 研究內(nèi)容25-26
• 2 厚殼貽貝Mytilus coruscus閉殼肌-殼界面機構(gòu)與組成26-47
• 2.1 實驗材料和實驗方法26-28
• 2.1.1 樣品準備26-27
• 2.1.2 掃描電子顯微術(shù)27
• 2.1.3 原子力顯微術(shù)27
• 2.1.4 X射線衍射儀27
• 2.1.5 傅里葉轉(zhuǎn)換紅外光譜27-28
• 2.1.6 聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)蛋白分析28
• 2.1.7 蛋白印跡法和氨基酸分析28
• 2.2 結(jié)果和討論28-45
• 2.2.1 掃描電鏡結(jié)果與分析28-32
• 2.2.2 原子力顯微鏡結(jié)果與分析32-35
• 2.2.3 AMS界面位置和珍珠層的傅里葉紅外光譜結(jié)果與分析35-41
• 2.2.4 AMS界面位置和珍珠層的X射線衍射結(jié)果與分析41-43
• 2.2.5 蛋白質(zhì)分析43-45
• 2.3 結(jié)論45-47
• 3 貽貝閉殼肌-殼界面特異性蛋白的提取與純化47-63
• 3.1 貽貝閉殼肌-殼界面特異性蛋白的提取47-53
• 3.1.1 貽貝AMS粉末樣品溶液處理47
• 3.1.2 十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢驗樣品所含蛋白47-48
• 3.1.3 HPLC分離提純蛋白48-51
• 3.1.4 凝膠洗脫分離提純蛋白51-53
• 3.2 Bradford法測定蛋白樣品溶液的蛋白濃度53-56
• 3.2.1 試劑與器材53
• 3.2.2 實驗過程53-54
• 3.2.3 實驗數(shù)據(jù)及處理54-55
• 3.2.4 實驗結(jié)果分析55-56
• 3.3 其它蛋白常用色譜柱的分離效果探究56-63
• 3.3.1 實驗儀器與方法56-57
• 3.3.2 結(jié)果與討論57-62
• 3.3.3 結(jié)論62-63
• 4 貽貝粘性蛋白粘結(jié)機理的研究63-69
• 4.1 貽貝足蛋白粘結(jié)機理63-65
• 4.1.1 DOPA的粘結(jié)作用63-64
• 4.1.2 粘性蛋白的相互作用64-65
• 4.2 與骨骼-肌腱粘結(jié)機理之間的聯(lián)系65-67
• 4.3 貽貝-閉殼肌粘結(jié)機理67-69
• 5 貽貝閉殼肌-殼界面特異性蛋白的相關(guān)鑒定69-74
• 5.1 蛋白質(zhì)凝膠樣品分離69-72
• 5.1.1 工藝流程69
• 5.1.2 實驗步驟69-71
• 5.1.3 結(jié)果71
• 5.1.4 討論分析71-72
• 5.2 氨基酸組分分析72-74
• 5.2.1 實驗步驟72
• 5.2.3 實驗結(jié)果72-73
• 5.2.4 討論分析73-74
• 6 總結(jié)74-76
• 參考文獻76-84
• 致謝84-85
• 個人簡歷、發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果85

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 楊一先;干貝加工法[J];科學(xué)養(yǎng)魚;1986年01期

2 沈妍;劉偉;湛W歐

本文編號：333271