本文關(guān)鍵詞：抗禽多殺性巴氏桿菌中藥組方的篩選及顆粒劑的研制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：禽霍亂是由多殺性巴氏桿菌引起的一類禽類疾病,主要侵害家禽或野禽的接觸性疾病,又名禽巴氏桿菌病、禽出血性敗血癥。該病自然潛伏期一般2-9d,常呈現(xiàn)敗血性癥狀,發(fā)病率和死亡率很高,但也出現(xiàn)慢性或良性經(jīng)過。治療禽霍亂主要以西藥為主,雖然起到一定的治療效果,但西藥對家禽臟器有毒副作用,并且存在抗生素體內(nèi)殘留問題。而天然中藥既避免了對動物本身造成傷害,又不會造成藥物殘留。本實(shí)驗(yàn)從20味中藥中篩選出幾味抗菌活性較強(qiáng)的中藥,并進(jìn)行聯(lián)合抑菌實(shí)驗(yàn),篩選出有相加和協(xié)同作用的中藥組方評價其急性毒性和抗感染效果,并研制顆粒劑。主要內(nèi)容結(jié)果如下：1.20味中藥有效成分的提取及其對多殺性巴氏桿菌的體外抑菌活性研究：采用超聲波、乙醇回流、水浴加熱等方法對20味中藥的有效成分進(jìn)行提取,將提取出來的有效成分對多殺性巴氏桿菌進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn),測出中藥有效成分對多殺性巴氏桿菌的最小抑菌濃度(Minimal inhibitory concentration. MIC)和最小殺菌濃度(Minimal bactericidal concentration,MBC),并通過棋盤法測定中藥有效成分對多殺性巴氏桿菌的聯(lián)合抑菌效果。結(jié)果顯示：艾葉、黃連、黃柏、秦皮、地榆、虎杖6種中藥提取物對多殺性巴氏桿菌的最低抑菌濃度值(MIC)為7.8mg/mL；赤芍、何首烏、茵陳、射干、甘草、蒲公英、白鮮皮7種中藥提取物的MIC值范圍在15.6-31.25mg/mL；金銀花、柴胡、板藍(lán)根、夏枯草、穿心蓮、知母、苦參7種中藥提取物的MIC值大于等于62.5mg/mL。聯(lián)合抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明,黃連與艾葉、黃柏與艾葉、秦皮與艾葉、虎杖與艾葉的聯(lián)合抑菌指數(shù)(Fractiona Inhibitory Concentration Index, FICI) (FICI)≤0.5,黃柏與虎杖、秦皮與虎杖、黃連與虎杖的聯(lián)合抑菌指數(shù)(FICI)≥2；秦皮與黃柏、地榆與黃柏的聯(lián)合抑菌指數(shù)(FlCI)≥2。通過以上數(shù)據(jù)可以看出,黃連、黃柏、地榆、艾葉對多殺性巴氏桿菌均具有較好的體外抗菌活性;黃連與艾葉、黃柏與艾葉、地榆與艾葉為相加或協(xié)同作用；地榆和黃柏為拮抗作用。最終篩選出黃連、黃柏和艾葉三味中藥進(jìn)行組方。2.組方顆粒劑最佳提取工藝的研究：對中藥組方篩選出來的三味中藥黃連、黃柏和艾葉采用正交試驗(yàn)方法以浸膏得率、MIC和MBC作為評價指標(biāo)及數(shù)據(jù)處理的方差分析選出三味中藥的最佳提取工藝。最佳提取工藝結(jié)果為：黃連70%乙醇,料液比1：12,提取次數(shù)2次,每次1小時；黃柏70%乙醇,料液比1：7,提取次數(shù)3次,每次80min;艾葉50%乙醇,溫度70℃,提取時間2小時每次,料液比1：30。3.中藥組方提取物的急性毒性實(shí)驗(yàn)及其對人工感染多殺性巴氏桿菌的療效觀察：根據(jù)獸藥研究技術(shù)指導(dǎo)原則,對中藥組方提取物進(jìn)行大鼠急性毒性試驗(yàn),大鼠無任何反應(yīng)無死亡,即LD505000mg/kg。同時用小鼠進(jìn)行多殺性巴氏桿菌造模,以中藥組方提取物對造模的小鼠進(jìn)行高、中、低劑量組的抗感染實(shí)驗(yàn),小鼠按體重每l0g給藥O.1ml。高劑量組存活率為80%;中劑量組存活率為80%；低劑量組存活率為50%；對照組存活率20%。結(jié)論：中藥組方無毒；高、中劑量組對感染禽多殺性巴氏桿菌小鼠有一定抗感染活性,為中藥組方制劑的研發(fā)提供了理論依據(jù)。4.組方顆粒劑的制備及其質(zhì)量控制：采用正交設(shè)計(jì)方法對組方顆粒劑的輔料：a—-乳糖、可溶性淀粉和糊精按照不同比例進(jìn)行篩選,通過重復(fù)性實(shí)驗(yàn)和顆粒劑常規(guī)檢查建立其質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn),并用高壓液相色譜和紫外分光光度計(jì)對小檗堿含量進(jìn)行測定。結(jié)果表明：中藥組方藥液與輔料最佳配比為1：5,色譜條件乙腈-磷酸二氫鉀溶液(30：70,v/v)；柱溫30柱溫為30℃；流速為1.0mL·min-1;測波長為265nm;進(jìn)樣量為20μL,1g組方顆粒劑中小檗堿含量約為18.67ug。結(jié)論：按照正交試驗(yàn)篩選輔料的顆粒劑大小均勻、含水量、溶化性均符合藥典要求,其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在規(guī)定范圍內(nèi)。
【關(guān)鍵詞】：多殺性巴氏桿菌 正交試驗(yàn) 顆粒劑 急性毒性試驗(yàn) 療效觀察
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S853.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-13
• 第一章 文獻(xiàn)綜述及研究目的13-19
• 1 文獻(xiàn)綜述13-17
• 1.1 多殺性巴氏桿菌病研究概況13-16
• 1.1.1 多殺性巴氏桿菌病原學(xué)13
• 1.1.2 多殺性巴氏桿菌病流行病學(xué)13-14
• 1.1.3 多殺性巴氏桿菌病發(fā)病機(jī)理14
• 1.1.4 多殺性巴氏桿菌病的臨床癥狀及病理變化14-15
• 1.1.5 多殺性巴氏桿菌病的危害15-16
• 1.2 多殺性巴氏桿菌病的防治16
• 1.2.1 西藥對多殺性巴氏桿菌病的防治概況16
• 1.2.2 中藥對多殺性巴氏桿菌病的防治概況16
• 1.3 中藥顆粒劑的概述16-17
• 2 本實(shí)驗(yàn)研究的目的與意義17-18
• 3 論文設(shè)計(jì)思路18-19
• 第二章 中藥有效成分的提取及其對禽多殺性巴氏桿菌的體外抑菌活性研究19-27
• 1 材料與方法19-23
• 1.1 材料19-20
• 1.1.1 菌種與培養(yǎng)基19
• 1.1.2 主要儀器設(shè)備19-20
• 1.1.3 中藥材20
• 1.2 方法20-23
• 1.2.1 中藥提取物制備20-22
• 1.2.2 藥液制備22
• 1.2.3 細(xì)菌菌液制備22
• 1.2.4 各中藥有效成分對多殺性巴氏桿菌MIC、MBC的測定22-23
• 1.2.5 聯(lián)合抑菌實(shí)驗(yàn)23
• 1.2.6 聯(lián)合抑菌效果評價23
• 2 結(jié)果與分析23-26
• 2.1 20 種中藥提取物抗菌活性研免23-24
• 2.2 中藥提取物對多殺性巴氏桿菌的體外聯(lián)合抑菌活性24-26
• 3. 討論26-27
• 第三章 組方提取物中三味中藥最佳提取工藝研究27-39
• 1 材料與方法27-31
• 1.1 材料27-28
• 1.1.1 藥材27
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)菌種27
• 1.1.3 試劑、器材27-28
• 1.2 方法28-31
• 1.2.1 三味中藥薄層鑒定28-29
• 1.2.2 黃連有效成分最佳提取工藝篩選29
• 1.2.3 黃柏有效成分最佳提取工藝篩選29-30
• 1.2.4 艾葉有效部位最佳提取工藝篩選30
• 1.2.5 黃連、黃柏、艾葉對多殺性巴氏桿菌體外藥敏實(shí)驗(yàn)30-31
• 2 結(jié)果與分析31-37
• 2.1 三味中藥的薄層鑒定31-32
• 2.1.1 黃連的薄層鑒定31
• 2.1.2 黃柏的薄層鑒定31
• 2.1.3 艾葉的薄層鑒定31-32
• 2.2 黃連有效成分提取工藝優(yōu)選32-33
• 2.3 黃柏有效成分提取工藝優(yōu)選33-35
• 2.4 艾葉有效成分提取工藝優(yōu)選35-36
• 2.5 最優(yōu)組合驗(yàn)證36-37
• 3 討論37-39
• 第四章 抗禽多殺性巴氏桿菌中藥組方提取物的急性毒性實(shí)驗(yàn)和抗感染活性研究39-44
• 1 材料與方法39-41
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物與藥品39
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法39-41
• 1.2.1 組方比例的研究39-40
• 1.2.2 藥敏實(shí)驗(yàn)40
• 1.2.3 急性毒性實(shí)驗(yàn)40-41
• 1.2.4 抗感染實(shí)驗(yàn)41
• 2 結(jié)果與分析41-43
• 2.1 藥敏實(shí)驗(yàn)41-42
• 2.2 經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)42
• 2.3 抗感染活性42-43
• 3 討論43-44
• 第五章 抗禽多殺性巴氏桿菌中藥組方顆粒劑的研制及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究44-55
• 1 材料與方法44-48
• 1.1 材料44-45
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)藥品44
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器44-45
• 1.2 方法45-48
• 1.2.1 藥液制備45
• 1.2.2 正交實(shí)驗(yàn)篩選顆粒劑最佳輔料比45-46
• 1.2.3 總輔料量與藥液比例研究46
• 1.2.4 組方顆粒劑的制備46
• 1.2.5 組方顆粒劑的評價標(biāo)準(zhǔn)46-47
• 1.2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)47
• 1.2.7 顆粒劑的常規(guī)檢查47
• 1.2.8 顆粒劑中小檗堿含量測定47-48
• 2 結(jié)果與分析48-53
• 2.1 總輔料量與藥液比例研究48
• 2.2 正交實(shí)驗(yàn)篩選顆粒劑輔料配比及重復(fù)性實(shí)驗(yàn)48-49
• 2.3 顆粒劑的常規(guī)檢查49-50
• 2.3.1 粒度檢查49-50
• 2.3.2 含水量檢查50
• 2.4 顆粒劑中的小檗堿含量鑒定50-53
• 2.4.1 方法專屬性研究50-51
• 2.4.2 線性關(guān)系的研究51-52
• 2.4.3 精密度試驗(yàn)研究52
• 2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)52
• 2.4.5 樣品含量測52-53
• 3 討論53-55
• 第六章 結(jié)論與創(chuàng)新55-57
• 1 結(jié)論55-56
• 2 創(chuàng)新56-57
• 參考文獻(xiàn)57-63
• 致謝63-64
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文64

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  本文關(guān)鍵詞：抗禽多殺性巴氏桿菌中藥組方的篩選及顆粒劑的研制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：332958