水稻極易受到低溫和蟲害等的影響而減產(chǎn),提高水稻的抗低溫和抗蟲能力,一直都是水稻研究的熱點(diǎn)。不飽和脂肪酸含量的提高能夠增強(qiáng)植物對(duì)低溫脅迫的效應(yīng)。豆科凝集素具有凝集細(xì)胞、沉淀多糖和蛋白質(zhì)等獨(dú)特的生理功能,在農(nóng)作物抗蟲中獲得了廣泛的關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)前期獲得了不飽和脂肪酸含量提高的轉(zhuǎn)大豆FAD3水稻,本文通過(guò)表型分析、抗冷生理生化指標(biāo)檢測(cè)、基因表達(dá)分析等方法比較低溫脅迫下大豆FAD3轉(zhuǎn)基因植株與野生型植株的差異。同時(shí)利用原核表達(dá)及蛋白純化技術(shù),獲得了豆科凝集素Le4蛋白,并分析了Le4蛋白的殺蟲效應(yīng)。其主要結(jié)果如下:1.大豆FAD3轉(zhuǎn)基因水稻的抗冷效應(yīng)分析1)利用PCR技術(shù)結(jié)合潮霉素篩選獲得了GmFAD3轉(zhuǎn)基因純和株系（編號(hào):TransFAD3）。在15℃低溫條件下,觀察并統(tǒng)計(jì)了TransFAD3和野生型植株的種子的萌發(fā)率,結(jié)果表明TransFAD3種子的低溫萌發(fā)率明顯高于野生型,約為野生型的7倍。進(jìn)一步對(duì)低溫下TransFAD3表型進(jìn)行了觀察,發(fā)現(xiàn)4℃低溫處理后,野生型水稻葉片萎蔫現(xiàn)象明顯比TransFAD3嚴(yán)重,常溫恢復(fù)生長(zhǎng)7天后,TransFAD3轉(zhuǎn)基因水稻幼苗大部分恢復(fù)生長(zhǎng),其存活率遠(yuǎn)高于... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 概述
    1.2 寒冷環(huán)境對(duì)水稻的影響
        1.2.1 形態(tài)結(jié)構(gòu)與水稻抗寒性
        1.2.2 膜系統(tǒng)與水稻抗寒性
        1.2.3 滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)與水稻抗寒性
        1.2.4 保護(hù)酶系統(tǒng)與水稻抗寒性
        1.2.5 相關(guān)基因與水稻抗寒性
    1.3 FAD基因家族
    1.4 GmFAD3基因
    1.5 蟲害對(duì)水稻的影響
        1.5.1 蟲害對(duì)水稻影響的研究現(xiàn)狀
        1.5.2 水稻抗蟲相關(guān)基因
    1.6 豆科凝集素家族及其在抗蟲中的應(yīng)用
    1.7 GmLe4基因
    1.8.本實(shí)驗(yàn)的研究目的及意義
第二章 轉(zhuǎn)GmFAD3基因水稻與野生型水稻低溫條件下耐冷性分析
    2.1 材料、試劑及儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 GmFAD3轉(zhuǎn)基因植株純和性的鑒定
        2.2.2 低溫條件下水稻種子和幼苗耐冷醒表型鑒定方法
        2.2.3 低溫脅迫下水稻中GmFAD3基因的表達(dá)量分析方法
        2.2.4 低溫脅迫下GmFAD3轉(zhuǎn)基因水稻及野生型水稻生理生化指標(biāo)的測(cè)定方法
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 轉(zhuǎn)基因水稻純和系植株的鑒定結(jié)果
        2.3.2 15℃低溫條件下GmFAD3轉(zhuǎn)基因水稻與野生型水稻種子萌發(fā)率
        2.3.3 10℃低溫條件下GmFAD3轉(zhuǎn)基因水稻及野生型水稻的表達(dá)量差異及生理生化指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果
        2.3.4 4℃低溫條件下GmFAD3轉(zhuǎn)基因水稻及野生型水稻的表型變化、表達(dá)量差異及生理生化指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果
第三章 豆科凝集素Le4蛋白的抗蟲性分析
    3.1 材料、試劑及儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 Le4基因原核誘導(dǎo)表達(dá)
        3.2.2 檢測(cè)Le4基因表達(dá)產(chǎn)物存在形式
        3.2.3 Le4蛋白質(zhì)純化
        3.2.4 SDS-PAGE電泳檢測(cè)Ni柱純化后的Le4蛋白質(zhì)
        3.2.5 Western Blot分析OsRab7蛋白的表達(dá)
        3.2.6 Le4純化蛋白的抗蟲實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 Le4基因誘導(dǎo)表達(dá)PAGE圖
        3.3.2 Le4蛋白純化PAGE圖
        3.3.3 Le4蛋白純化Western Blot分析
        3.3.4 Le4純化蛋白抗蟲性分析
    3.4 小結(jié)
第四章 討論與展望
    4.1 GmFAD3基因與水稻抗冷性
    4.2 GmLe4蛋白與水稻抗蟲性
致謝
參考文獻(xiàn)
附表
攻讀學(xué)位期間的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]植物凝集素研究與展望[J]. 蔡茜茜,李巧玲,劉舒云,汪少蕓.  食品科學(xué)技術(shù)學(xué)報(bào). 2013(06)
[2]超氧化物歧化酶（SOD）的特征及在植物抗逆性方面的研究進(jìn)展[J]. 馬偉榮,童軍茂,單春會(huì).  食品工業(yè). 2013(09)
[3]低溫脅迫對(duì)黃連膜脂過(guò)氧化作用和抗氧化酶活性的影響[J]. 李品明,孫玉芳,楊丙賢,宗學(xué)鳳,王三根.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2011(15)
[4]CBF基因調(diào)控植物抗冷徑途的研究進(jìn)展[J]. 呂勝男,生吉萍,趙丹瑩,申琳.  西北植物學(xué)報(bào). 2011(06)
[5]低溫脅迫對(duì)水稻苗期SOD、POD活性的影響[J]. 王蘭,蔡千蕙.  湖南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(11)
[6]植物抗寒性研究進(jìn)展[J]. 王會(huì)良,何華平,龔林忠,王富榮,孫中海.  湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(06)
[7]低溫脅迫對(duì)玉米幼苗脯氨酸、丙二醛含量及電導(dǎo)率的影響[J]. 王瑞,馬鳳鳴,李彩鳳,陳勝勇,侯靜.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2008(05)
[8]植物脂肪酸去飽和酶及其編碼基因研究進(jìn)展[J]. 戴曉峰,肖玲,武玉花,吳剛,盧長(zhǎng)明.  植物學(xué)通報(bào). 2007(01)
[9]2005年長(zhǎng)江流域稻區(qū)褐飛虱暴發(fā)成災(zāi)原因分析[J]. 程家安,祝增榮.  植物保護(hù). 2006(04)
[10]低溫脅迫對(duì)水稻幼苗抗寒性生理生化指標(biāo)的影響[J]. 李海林,殷緒明,龍小軍.  安徽農(nóng)學(xué)通報(bào). 2006(11)

碩士論文
[1]大豆馴化過(guò)程中葉片差異表達(dá)蛋白基因的單核苷酸多態(tài)性[D]. 謝琳.南昌大學(xué) 2013
[2]馴化和育種對(duì)大豆葉片蛋白質(zhì)組的影響[D]. 鄭維薇.南昌大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3269668