發(fā)布時(shí)間：2021-06-10 13:46

　　韭菜遲眼蕈蚊Bradysia odoriphaga是我國(guó)特有的根蛆類害蟲(chóng),尤喜食韭菜,分布廣泛卻又難以防治。目前韭菜遲眼蕈蚊的防治手段大多為化學(xué)防治,不科學(xué)用藥不僅使昆蟲(chóng)的抗藥性增加,而且極易導(dǎo)致人、畜中毒以及環(huán)境污染等問(wèn)題。因此,尋找綠色、安全、環(huán)保的韭菜遲眼蕈蚊防治方法至關(guān)重要。在飼養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)韭菜遲眼蕈蚊以產(chǎn)單一性別后代為主,產(chǎn)雙性別后代較少,其性別決定機(jī)制及其應(yīng)用價(jià)值引起我們的研究興趣。本研究以韭菜遲眼蕈蚊為研究對(duì)象,對(duì)性別決定關(guān)鍵基因Botra2及其功能進(jìn)行了初步研究,得到的主要結(jié)論如下:1、分離并鑒定了韭菜遲眼蕈蚊Botra2基因,得到了2個(gè)Botra2轉(zhuǎn)錄本且均為性別非特異性剪接。2、Botra2基因在整個(gè)韭菜遲眼蕈蚊的生長(zhǎng)發(fā)育期（卵、幼蟲(chóng)、蛹、成蟲(chóng)）均有表達(dá),蛹期和成蟲(chóng)期均有顯著高表達(dá),四齡幼蟲(chóng)到蛹期這一階段表達(dá)量突增,且雌成蟲(chóng)中的表達(dá)量高于雄成蟲(chóng)。3、沉默了韭菜遲眼蕈蚊Botra2基因后,韭菜遲眼蕈蚊雌雄蟲(chóng)體內(nèi)Botra2表達(dá)量均顯著下調(diào),且雌蟲(chóng)體內(nèi)的Botra2得到了更好的抑制。4、對(duì)RNA干擾后的韭菜遲眼蕈蚊成蟲(chóng)進(jìn)行內(nèi)生殖器、外部形態(tài)測(cè)量以及雌蟲(chóng)產(chǎn)卵量、后代孵化率統(tǒng)計(jì)... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同目昆蟲(chóng)性別決定調(diào)控通路Fig.1Regulationpathwayofsexdeterminationindifferentordersofinsects（Sawanthetal.,2016）

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文3.2Botra2基因剪接體檢測(cè)為了驗(yàn)證Botra2基因在雌雄個(gè)體中是否存在不同的剪接形式，因此設(shè)計(jì)特異性引物A1-F/R（見(jiàn)表2）于雌雄tra2基因模板中進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在雌雄體內(nèi)分別存在兩條片段大小不一的條帶，隨后進(jìn)行切膠回收、單克隆等試驗(yàn)，菌液PCR擴(kuò)增結(jié)果經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)如圖3所示。圖3Botra2剪接體電泳圖Fig.3AgarosegelelectrophoresisofBotra2spliceBotra2基因在雌雄個(gè)體中存在幾乎同等大小的兩種長(zhǎng)度片段，分別位于500～750bp、250～500bp，且前者在雌蟲(chóng)中的表達(dá)量比雄蟲(chóng)中高，隨后對(duì)其進(jìn)行產(chǎn)物純化后送測(cè)，得到了無(wú)雌雄特異性的兩個(gè)剪接體Botra2-α、Botra2-β（圖4），NCBI登錄號(hào)分別為MT733528、MT733529。圖4韭菜遲眼蕈蚊tra2基因剪接體左側(cè)立體方框代表擴(kuò)增得到的Botra2基因mRNA，相同顏色表示完全相同的堿基序列；右側(cè)平面方框代表保守結(jié)構(gòu)域RRM。Fig.4Splicesoftra2geneofmusculariatarsalisinBradysiaodoriphagaThestereoboxontheleftrepresentstheamplifiedBotra2mRNA,andthesamecolorrepresentstheidenticalbasesequence.Theright-handplaneboxrepresentstheconservativedomainRRM.Botra2-α編碼區(qū)長(zhǎng)為729bp，包含起始和終止密碼子，ORF編碼243個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，高度保守結(jié)構(gòu)的RRM結(jié)構(gòu)域位于334～567bp處，編碼78個(gè)氨基酸；Botra2-βBotra2-β25

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文基于蛋白質(zhì)序列進(jìn)行韭菜遲眼蕈蚊tra2系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)構(gòu)建，包含雙翅目、鞘翅目、鱗翅目、膜翅目在內(nèi)的4科30種昆蟲(chóng)，MEGA7.0建樹(shù)，ggtree進(jìn)行美化，結(jié)果如下：圖6基于蛋白質(zhì)序列的韭菜遲眼蕈蚊tra2系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)韭菜遲眼蕈蚊tra2基因位于圖右方紅色分支標(biāo)注內(nèi)。Fig.6Tra2phylogenetictreebasedonproteinsequenceTra2geneofBradysiaodoriphagaislocatedintheredbranchattherightofthefigure.系統(tǒng)發(fā)育分析發(fā)現(xiàn)，由韭菜遲眼蕈蚊tra2基因編碼的兩個(gè)TRA2蛋白，與雙翅目Bradysiacoprophila、Sciaraocellaris的同源序列，三者組成一支獨(dú)立的分子簇，與雙翅目中其他幾種蚊子，埃及伊蚊、白紋伊蚊、斯氏按蚊親緣關(guān)系較近，而與雙翅目黑腹果蠅的tra2基因同源關(guān)系稍遠(yuǎn)，這意味著二者的TRA2蛋白可能在功能行使中也會(huì)存在較大差異（圖6）。27

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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[6]韭菜遲眼蕈蚊性別分化、性腺染色體行為與唾腺染色體形態(tài)的初步研究[D]. 楊景娟.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006
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