發(fā)布時(shí)間：2017-04-20 16:14

  本文關(guān)鍵詞：遼寧絨山羊新基因OCIAD2生物學(xué)功能研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：遼寧絨山羊是我國特有的遺傳物種,產(chǎn)絨量居全國之首,被譽(yù)為“國寶”,是動(dòng)物基因保護(hù)物種。遼寧絨山羊所產(chǎn)山羊絨是上乘的動(dòng)物纖維紡織原料,有著非常重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。在前期工作中,通過對(duì)遼寧絨山羊皮膚組織建庫測(cè)通獲得基因卵巢癌免疫抗原蛋白(OCIAD2)的全長序列。首先對(duì)OCIAD2基因利用生物信息學(xué)分析其核酸和氨基酸序列,并進(jìn)行理化性質(zhì)、疏水性分析、跨膜結(jié)構(gòu)域、磷酸化位點(diǎn)、保守結(jié)構(gòu)域、二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)、信號(hào)肽預(yù)測(cè)分析,以及亞細(xì)胞定位并建立進(jìn)化樹。再利用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)OCIAD2基因在其它內(nèi)臟器官中的表達(dá)情況,然后利用原位雜交技術(shù)檢測(cè)其特異性表達(dá)位點(diǎn),利用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)不同生長時(shí)期OCIAD2基因在初、次級(jí)毛囊中的表達(dá)含量。此外,檢測(cè)Noggin基因干擾后對(duì)OCIAD2基因表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:(1)生物信息學(xué)分析顯示:該基因能夠表達(dá)含有154個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì),為親水性蛋白;二級(jí)結(jié)構(gòu)主要以無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)(68.18%)為主;該蛋白質(zhì)為兩次跨膜蛋白,含有一個(gè)保守的蛋白結(jié)構(gòu)域,存在2個(gè)跨膜區(qū)域,無信號(hào)肽且最有可能定位在細(xì)胞核中;遼寧絨山羊OCIAD2基因與家綿羊OCIAD2基因同源性較高。(2)RT-PCR結(jié)果顯示:OCIAD2基因在心臟、腎臟、脾臟中顯著表達(dá),在皮膚中少量表達(dá),在肝臟和肺臟中幾乎不表達(dá)。(3)原位雜交結(jié)果顯示:OCIAD2基因在初、次級(jí)毛囊的內(nèi)根鞘均有強(qiáng)烈的表達(dá)。在毛囊周圍的基質(zhì)細(xì)胞中少量表達(dá),在毛干、外根鞘以及毛囊乳突中無表達(dá)。(4)熒光定量PCR結(jié)果顯示:毛囊在興盛期時(shí),OCIAD2基因在次級(jí)毛囊的表達(dá)約為初級(jí)毛囊的3.89倍(P0.01),毛囊在退行期時(shí),OCIAD2基因在初級(jí)毛囊的表達(dá)量約為次級(jí)毛囊的1.22倍(P0.01)。(5)Noggin基因敲減后,OCIAD2基因表達(dá)量增加,有利于提高絨山羊絨毛品質(zhì)。由以上結(jié)果可以得出以下結(jié)論:(1)通過對(duì)OCIAD2基因在生物信息學(xué),熒光定量以及原位雜交等方面的研究,推斷OCIAD2基因可能對(duì)絨的生長起著一定的調(diào)控作用。(2)干擾Noggin基因的表達(dá)后,OCIAD2基因的表達(dá)量上升。這些研究為后續(xù)分析OCIAD2基因?qū)|寧絨山羊絨毛的影響提供重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：遼寧絨山羊 OCIAD2基因 生物信息分析 熒光定量 原位雜交
【學(xué)位授予單位】：遼寧師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S827
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 1 緒論10-15
• 1.1 遼寧絨山羊10
• 1.2 絨山羊國內(nèi)外研究進(jìn)展10-11
• 1.3 OCIAD2研究進(jìn)展11-12
• 1.4 BMP及其介導(dǎo)的BMP信號(hào)通路12-13
• 1.4.1 BMP12
• 1.4.2 BMP信號(hào)通路12-13
• 1.5 Noggin基因概述13-14
• 1.6 本研究的目的及意義14-15
• 2 遼寧絨山羊OCIAD2基因序列分析15-24
• 2.1 序列來源15
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法15
• 2.3 OCIAD2的生物信息學(xué)分析15-23
• 2.4 討論23-24
• 3 遼寧絨山羊OCIAD2基因在不同組織中的表達(dá)情況24-30
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料24-25
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)樣本24
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器24-25
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法25-27
• 3.2.1 各組織總RNA的提取25
• 3.2.2 各組織總RNA的檢測(cè)25-26
• 3.2.3 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)26
• 3.2.4 PCR反應(yīng)26-27
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-29
• 3.3.1 RNA提取27-28
• 3.3.2 RT-PCR28-29
• 3.4 討論29-30
• 3.4.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論29
• 3.4.2 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)29-30
• 4 遼寧絨山羊OCIAD2基因在皮膚中的定位分析30-37
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料30-31
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)樣本及處理30
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器30-31
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法31-33
• 4.2.1 原位雜交相關(guān)試劑配方31
• 4.2.2 載玻片的處理31
• 4.2.3 制備皮膚組織石蠟切片31-32
• 4.2.4 探針的制備32
• 4.2.5 原位雜交預(yù)處理及探針雜交和檢測(cè)32-33
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-36
• 4.3.1 提取RNA結(jié)果33
• 4.3.2 原位雜交結(jié)果33-36
• 4.4 討論36-37
• 4.4.1 原位雜交結(jié)果討論36
• 4.4.2 原位雜交注意事項(xiàng)36-37
• 5 遼寧絨山羊OCIAD2基因在初次級(jí)毛囊中的定量分析37-43
• 5.1 實(shí)驗(yàn)材料37
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品37
• 5.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器37
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法37-38
• 5.2.1 初次級(jí)毛囊的總RNA提取37
• 5.2.2 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)37
• 5.2.3 Real Time PCR37-38
• 5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-41
• 5.3.1 RNA提取38-39
• 5.3.2 實(shí)時(shí)熒光定量39-41
• 5.4 討論41-43
• 5.4.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論41
• 5.4.2 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)41-43
• 6 Noggin基因干擾慢病毒及干擾Noggin基因后OCIAD2基因的表達(dá)研究43-53
• 6.1 實(shí)驗(yàn)材料43-44
• 6.1.1 實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞及慢病毒液43
• 6.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器43-44
• 6.2 實(shí)驗(yàn)方法44-46
• 6.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)44
• 6.2.2 目的病毒及陰性對(duì)照腺病毒感染目的細(xì)胞44
• 6.2.3 病毒感染后的細(xì)胞中抽提總RNA44
• 6.2.4 RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA44-45
• 6.2.5 qPCR引物設(shè)計(jì)45
• 6.2.6 qPCR實(shí)驗(yàn)45-46
• 6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-52
• 6.3.1 病毒感染前后細(xì)胞圖片46-48
• 6.3.2 RT-PCR預(yù)實(shí)驗(yàn)48-49
• 6.3.3 RNA抽提電泳圖49-50
• 6.3.4 qPCR數(shù)據(jù)分析50-52
• 6.4 討論52-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 附錄A 原位雜交相關(guān)試劑配方58-60
• 附錄B 不同時(shí)期 β-Actin、OCIAD2基因的擴(kuò)增曲線和融解曲線圖60-63
• 附錄C 目的病毒及陰性對(duì)照腺病毒感染目的細(xì)胞,病毒干擾后的細(xì)胞中抽提總RNA63-64
• 致謝64

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