赤芍作為傳統(tǒng)的中藥材,需求量大。近年來由于過度采挖導(dǎo)致野生資源匱乏,栽培赤芍成為解決市場供需的重要舉措。隨著赤芍栽培面積的擴(kuò)大,在栽培區(qū)域出現(xiàn)種質(zhì)混亂和相似品種混淆的現(xiàn)象。此外,栽培地區(qū)的環(huán)境因素對赤芍品質(zhì)的影響也不可忽視。因此,開展赤芍種群遺傳多樣性及赤芍有效成分與氣候因子的相關(guān)性研究,對建立赤芍野生資源保護(hù)區(qū)和加強赤芍品種選育以及赤芍生產(chǎn)區(qū)劃的制定具有重要意義。本研究利用ISSR和RAPD分子標(biāo)記對來自內(nèi)蒙古自治區(qū)、黑龍江省和吉林省等地的28個赤芍種群以及安徽省的1個白芍種群進(jìn)行遺傳變異和親緣關(guān)系的研究。同時測定了收集于內(nèi)蒙古自治區(qū)、黑龍江省、河北省等地區(qū)共計22份赤芍樣品的芍藥苷含量,并結(jié)合30年的年均降水和年日照時數(shù)等氣候因素,初步探究赤芍有效成分與氣候因子的相關(guān)性。研究結(jié)果如下:1、采用14個ISSR和14個RAPD引物對赤芍基因組DNA擴(kuò)增,擴(kuò)增出的總條帶數(shù)分別為257,215;多態(tài)性條帶分別為251,209;多態(tài)性比率分別為97.8%,97.2%。2、兩種分子標(biāo)記共同顯示野生赤芍種群的遺傳多樣性比栽培種群高,其中DL種群（內(nèi)蒙古自治區(qū)錫林郭勒盟多倫縣）的遺傳多樣性最高,可... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

從13個地區(qū)收集的赤芍種群分布圖（種群縮寫在表2.1中給出）

內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文13圖2.2引物ISSR9退火溫度篩選結(jié)果Figure2.2ScreeningresultsofprimerISSR9annealingtemperature2.2.3RAPD-PCR擴(kuò)增2.2.3.1RAPD反應(yīng)體系的建立DNA濃度按照2.2.2.1下的方法進(jìn)行篩眩RAPD分子標(biāo)記的擴(kuò)增是根據(jù)來明達(dá)等人[105]描述的方法進(jìn)行分析的，并做了一些小的修改。反應(yīng)體系總體積為25μL，包含2μLDNA模板（20ng/μL）、1.5μL引物、10μLddH2O和11.5μLPremixLATaq酶。PCR擴(kuò)增過程為：94℃預(yù)變性5min，以下過程需要進(jìn)行33個循環(huán)，94℃變性45s,引物最佳退火溫度復(fù)性45s，72℃延伸1.5min，循環(huán)結(jié)束后，72℃最后延伸7min。使用1.5%瓊脂糖凝膠觀察擴(kuò)增的DNA產(chǎn)物，并在UV光下觀察通過凝膠記錄系統(tǒng)記錄結(jié)果。2.2.3.2RAPD引物的篩選RAPD引物是從其他關(guān)于RAPD分子標(biāo)記文獻(xiàn)[106-109]中獲得的，用2個赤芍基因組DNA作為供試樣品進(jìn)行引物的初步篩選，最后選取14條穩(wěn)定、清晰和多態(tài)性條帶豐富的引物用于本實驗的研究，見表2.3。

內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文14表2.3實驗所用的RAPD引物及其序列Table2.3RAPDprimersandsequencesusedintheexperiment引物名稱引物序列（5′-3′）引物名稱引物序列（5′-3′）RAPD1CAGGCCCTTCRAPD8GTTACCGCGARAPD2CAAACGTCGGRAPD9CTGCGTGCTCRAPD3GTCGCCGTCARAPD10CAGCGAGTAGRAPD4GACGGATCAGRAPD11AAGGCCCCTGRAPD5GACGGATCAGRAPD12TGGTTGCGGARAPD6GTCGTTCCTGRAPD13TCGCTGCGGARAPD7ACCTCAGCTCRAPD14CTGTGTGCTC2.2.3.3RAPD引物退火溫度的優(yōu)化與2.2.2.3下的引物退火溫度優(yōu)化方法一樣。退火溫度分別為41℃、40.4℃、39.4℃、38.4℃、36.8℃、35.3℃、34.4℃和34.0℃，在退火溫度為39.4℃時，擴(kuò)增的條帶數(shù)較為豐富，條帶清晰，分辨率好，因此39.4℃是引物RAPD10的最佳退火溫度。如圖2.3所示。圖2.3引物RAPD10退火溫度篩選結(jié)果Figure2.3ScreeningresultsofprimerRAPD10annealingtemperature2.2.4赤芍中芍藥苷含量的測定2.2.4.1赤芍樣品前處理將收集的赤芍樣品清洗干凈，放入烘箱烘干，使用粉碎機(jī)將烘干的赤芍根樣品粉碎，并過60目篩，密封干燥保存。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3120476