煙粉虱Bemisia tacbaci（Gennadius）屬半翅目（Hemiptera）粉虱科（Aleyraodidae）,是一類世界性重大農(nóng)業(yè)害蟲。煙粉虱傳播的雙生病毒科（Geminiviridae）菜豆金黃花葉病毒屬（Begomovirus）病毒給我國農(nóng)作物生產(chǎn)構(gòu)成巨大的威脅。菜豆金黃花葉病毒屬病毒經(jīng)煙粉虱以持久循環(huán)型方式傳播,它們的外殼蛋白（coat protein,CP）是目前唯一已知參與病毒被煙粉虱特異性傳播的結(jié)構(gòu)蛋白。CP可能通過和煙粉虱蛋白發(fā)生復(fù)雜的相互作用來侵染煙粉虱中腸、唾液腺等組織,從而使病毒成功傳播。另外,已知番茄黃曲葉病毒（Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV）進(jìn)入煙粉虱體內(nèi)后能激活煙粉虱自噬和抗菌肽等免疫反應(yīng),這些免疫反應(yīng)不利于病毒的侵染及積累�，F(xiàn)階段有關(guān)煙粉虱-菜豆金黃花葉病毒屬病毒互作的研究比較少,我們對二者復(fù)雜互作關(guān)系的認(rèn)識還較為淺顯�；诖�,本研究借助酵母雙雜交核系統(tǒng)篩選了可能和TYLCV CP互作的煙粉虱蛋白,并利用同位素標(biāo)記相對和絕對定量（isobaric tags for relative and absolut... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1雙生病毒基因組結(jié)構(gòu)圖

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文通過酵母雙雜交核系統(tǒng)篩選與TYLCVCP互作的煙粉虱蛋白31圖3.1酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與TYLCVCP互作的煙粉虱蛋白。（A）酵母雙雜交系統(tǒng)流程圖；（B）煙粉虱cDNA文庫插入片段的PCR鑒定；（C）使用TYLCVCP抗體通過蛋白質(zhì)印跡檢測pGBKT7-TYLCVCP在酵母菌株中表達(dá)（≈46kDa）；（D）誘餌載體pGBKT7-TYLCVCP自激活檢測。pGBKT7-p53和pGADT7-LargeT為陽性對照，pGBKT7-p53和pGADT7為陰性對照。Fig3.1IdentificationofwhiteflythatinteractwithTYLCVCPusingtheY2Hsystem.(A)Schematicdiagramofworkflowforthesystem.(B)PCRidentificationofinsertsintheprimarywhiteflycDNAlibrary.(C)ExpressionofpGBKT7-TYLCVCPinyeastwasidentifiedusingwesternblotbyantibodyofTYLCVCP(≈46kDa).(D)Auto-activationdetectionofbaitvectorpGBKT7-TYLCVCPinyeast.pGBKT7-p53andpGADT7-LargeTwereusedaspositivecontrols;pGBKT7-p53andpGADT7wereusedasnegativecontrols.

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文通過酵母雙雜交核系統(tǒng)篩選與TYLCVCP互作的煙粉虱蛋白33SD/-Trp-Leu-His-Ade（含有X-α-Gal和AbA）選擇性培養(yǎng)基上生長且變藍(lán)，則說明兩個蛋白之間存在互作（圖3.2A），并構(gòu)建互作蛋白之間的網(wǎng)絡(luò)圖（圖3.2B）。圖3.2煙粉虱蛋白與TYLCVCP蛋白之間的相互作用。（A）采用酵母雙雜交核系統(tǒng)驗(yàn)證TYLCVCP與篩選得到的煙粉虱蛋白之間的互作。pGBKT7-TYLCVCP和15個獵物質(zhì)粒分別共轉(zhuǎn)酵母菌株，并在DDO和QDO/X/A兩種選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)生長，pGBKT7-p53和pGADT7-LargeT作為陽性對照（+），pGBKT7-p53和pGADT7作為陰性對照（-）；（B）15個候選煙粉虱蛋白與TYLCVCP蛋白的互作網(wǎng)絡(luò)。該網(wǎng)絡(luò)使用Cytoscape生成，紅線表示從數(shù)據(jù)庫搜索工具中預(yù)測的互作（STRING9.1；http://stringdb.org），黑線代表從酵母雙雜交核系統(tǒng)中驗(yàn)證的互作蛋白。Fig3.2InteractionsbetweenwhiteflyproteinsandTYLCVCP.(A)VerificationofinteractionsbetweenTYLCVCPandidentifiedwhiteflyproteinsusingY2Hassay.TYLCVCPand15respectivepreyproteinswereusedtocotransformyeastforgrowthonDDOandQDO/X/Aselectivemedium.pGBKT7-p53andpGADT7-LargeTwereusedaspositivecontrols(+);pGBKT7-p53andpGADT7wereusedasnegativecontrols(-).(B)Proteininteractionnetworkanalysisof15candidatewhiteflyproteinsandTYLCVCP.ThisnetworkwasgeneratedwithCytoscape.Theredlinemeanstheinteractionpredictedfromthedatabasesearchtoolfortheretrievalofinteractingproteins(STRING9.1;http://stringdb.org)，andtheblacklinestandsfortheinteractionsupportedbyY2Hassaysystem.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3059223