番茄（Solanum lycopersicum）是我國主要蔬菜作物之一,是設(shè)施蔬菜生產(chǎn)中種植面積最大的蔬菜種類。然而設(shè)施番茄生產(chǎn)中,常因生物和非生物逆境脅迫而導(dǎo)致落葉,嚴(yán)重影響植株光合物質(zhì)生產(chǎn),進(jìn)而影響番茄產(chǎn)量和品質(zhì)。水通道蛋白作為運(yùn)輸水分的專一蛋白,它應(yīng)該具有與水分脅迫影響植物生長發(fā)育相關(guān)的眾多生理功能,其中包括調(diào)控植株衰老和器官脫落的功能,但迄今為止,它是否真正具有調(diào)控植物器官脫落作用卻鮮見研究報(bào)道。本研究試圖揭示番茄水通道蛋白在誘導(dǎo)葉片脫落中的作用,為未來通過調(diào)控水通道蛋白防止番茄葉片脫離奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.在番茄苗期,采用NaCl、PEG和HgCl₂（水通道蛋白抑制劑）水分脅迫方法,明確了NaCl、PEG處理可顯著促進(jìn)番茄離體葉片的脫落進(jìn)程,而HgCl₂處理可顯著延緩脫落進(jìn)程,說明水通道蛋白參與番茄葉片的脫落過程。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)有14個PIPs基因和10個TIPs基因在番茄葉片中表達(dá),并從中篩選出在番茄葉片脫落過程中顯著上調(diào)的三個基因SlPIP1;3、SlPIP1;5、SlTIP1;1。2.構(gòu)建了SlPIP1;3、SlPI... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

高等植物乙烯合成和感應(yīng)相互作用圖解

材料與方法122材料與方法2.1試驗(yàn)材料本研究所用到的番茄材料為“中蔬4號”，該種子為本課題組同學(xué)自交留種保存。SlPIP1;3、SlPIP1;5、SlTIP1;1啟動子GUS轉(zhuǎn)基因植株自行建立，相應(yīng)的背景植株為“中蔬4號”番茄。SlPIP1;3、SlPIP1;5、SlTIP1;1CRISPER-Cas9單基因敲除植株由百格基因公司提供。2.2試驗(yàn)方法2.2.1調(diào)控番茄葉柄脫落率的水分和SlAQP的功能測定試驗(yàn)植株為‘中蔬4號’。在最佳生長條件下，‘中蔬4號’在土壤上生長約6周，直到5或6片葉子發(fā)育成熟。取樣時(shí)間上午9:00時(shí)，選取各株系相同部位的葉柄，在葉片基部上下莖間切斷，將離體的葉柄插在培養(yǎng)基中（圖中長方形框所示位置為需要取樣的葉柄，箭頭所指位置為葉柄離區(qū)）。圖2番茄葉柄Fig.2Tomatopetiole

沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文13普通培養(yǎng)基處理：在此實(shí)驗(yàn)過程中將葉柄插入預(yù)先制備的瓊脂培養(yǎng)基中，接著轉(zhuǎn)入到長方形的玻璃培養(yǎng)箱中按照要求進(jìn)行培養(yǎng)，用水密封,25℃恒溫條件下培養(yǎng)一天。處理開始后每隔一天對葉柄外植體的脫落率相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行記錄，一個時(shí)間段的脫落率采集結(jié)束后，接著轉(zhuǎn)入到玻璃培養(yǎng)箱中進(jìn)行繼續(xù)培養(yǎng)。NaCl處理：準(zhǔn)備一個0.8%普通瓊脂培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中加入50mmol/L的NaCl模擬鹽脅迫。分別測1d、2d、3d、4d、5d、6d脫落率并記錄。PEG處理：準(zhǔn)備一個0.8%普通瓊脂培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中加入10%聚乙二醇6000（PEG-6000）模擬水分脅迫。分別測1d、2d、3d、4d、5d、6d脫落率并記錄。HgCl2處理：50μmol/L準(zhǔn)備一個0.8%普通瓊脂培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中加入50μmol/L。分別測1d、2d、3d、4d、5d、6d脫落率并記錄。圖3葉柄插在培養(yǎng)基中Fig.3Thepetioleisinsertedinthemedium2.2.2調(diào)控番茄葉柄脫落相關(guān)SlAQP基因的篩選2.2.2.1番茄總RNA的提取在此操作過程中按照實(shí)驗(yàn)要求將‘中蔬4號’番茄種子放入三角瓶中，然后轉(zhuǎn)入到水浴鍋中，在55℃條件下浸泡處理15min，其后在培養(yǎng)皿內(nèi)遮光48h進(jìn)行培養(yǎng)，種子萌發(fā)后播種，一直生長到四葉一心時(shí)，取葉柄離區(qū)，轉(zhuǎn)入到液氮環(huán)境下冷凍，Trizol法提取番茄總RNA的流程具體如下：

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]乙烯誘導(dǎo)番茄花柄脫落的相關(guān)蛋白篩選及關(guān)鍵蛋白S1CDPK5驗(yàn)證[D]. 張曉林.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015



本文編號：2961415