提高家蠶的產絲量是蠶絲業(yè)幾千年來一直追求的目標。家蠶的絲腺是合成和分泌蠶絲蛋白的器官,是整個蠶絲業(yè)的生物學基礎。因此,探明家蠶絲腺形成和發(fā)育的分子調控機制具有重要的理論意義和實踐意義。Slit是一類在進化上高度保守的分泌型糖蛋白,它與受體Roundabout（Robo）在神經軸突導向、神經元的遷移、血管生成、癌細胞轉移、白細胞趨化等多種生理病理過程中具有調節(jié)作用。家蠶絲腺被認為是果蠅唾液腺的進化同源器官�，F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn),Slit及其受體Robo在果蠅唾液腺發(fā)育中發(fā)揮著重要作用,但是在家蠶絲腺中的功能研究還未有相關報道。Tbx20是一種進化上高度保守的轉錄因子,是T-box轉錄因子家族成員之一,在調控心臟發(fā)生、控制細胞遷移、促進細胞增殖等過程中扮演著重要角色。在果蠅胚胎發(fā)育過程中,Tbx20的同源基因midline能夠調控唾液腺的導向遷移,也可以同時調控神經系統(tǒng)中slit和robo基因的表達,但對于Tbx20在家蠶中的功能目前還不清楚。本研究基于前期在家蠶中已鑒定并克隆的Bmslit和Bmrobo（Bmrobo1a、Bmrobo1b、Bmrobo2/3）以及Bmtbx20基因,通過qPCR... 

【文章來源】：山東農業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

家蠶幼蟲絲腺組織示意圖

?確種Γ??魷赴?是?蚣負醣幌赴?瞬悸?Ｕ獠喚齟俳?慫肯儐赴?諍酥手?淶?物質交流，也為絲蛋白的合成、分泌和運輸提供了有利的條件。家蠶絲腺的這種特殊的細胞分裂方式與果蠅唾液腺細胞相同，都是功能高度特異化的結果。另外，家蠶絲腺與果蠅唾液腺都起源于下唇節(jié)并且在功能上存在很多相似性，因此被認為是果蠅唾液腺的進化同源器官。在發(fā)育至17-18期的家蠶胚胎中，下唇節(jié)出現(xiàn)絲腺基板，然后內陷并向背部和后部遷移，到胚胎26-27期絲腺完全形成；同樣，果蠅唾液腺的形成也包括形態(tài)發(fā)生、內嵌、管腔延伸以及遷移4個階段（圖1-2）。研究表明，大量基因的表達在家蠶絲腺和果蠅唾液腺之間是保守的，因此對于兩者的研究可以相互借鑒和參考。圖1-2果蠅唾液腺和家蠶絲腺形態(tài)發(fā)生示意圖（Dhawanetal.,2003a;Pirragliaetal.,2010）A：家蠶絲腺胚胎期的形成模式圖，Md：下顎節(jié)，Mx：上顎節(jié)，Lb：下唇節(jié)，T：胸節(jié)，A：腹節(jié)；B：從腹面觀察的果蠅胚胎不同時期唾液腺。Fig.1-2SchematicdiagramofthemorphogenesisofsilkglandofsilkwormandDrosophilasalivaryglandA:Thepatternoftheformationofsilkglandintheembryonicstageofsilkworm,Md:mandibularnode,Mx:maxillarynode,Lb:lowerlipnode,T:thoracicnode,A:abdominalnode;B:salivaryglandindifferentstagesofDrosophilaembryoobservedfromtheabdomen.1.1.3家蠶絲腺發(fā)育的調控機理家蠶絲腺的生長和發(fā)育受胰島素、營養(yǎng)信號通路和激素的調控（崔為正等,1991;Maetal.,2011）。胰島素和營養(yǎng)信號通路能夠調控家蠶幼蟲末期絲腺的迅速生長，使絲蛋白在短時間內大量合成。添食（或注射）保幼激素或蛻皮激素對5齡家蠶絲腺的生長速率以及蛋白質含量都有著顯著的影響。目前，許多在絲腺中表達的基因也已被鑒定出來并?

家蠶幼蟲前部絲腺中的表達變化為了研究Bmslit和Bmrobo1a、Bmrobo1b、Bmrobo2/3在家蠶前部絲腺發(fā)育中的作用，分別取3齡起蠶、3齡盛食期、3齡眠蠶、5齡起蠶、5齡3天及5齡末期的前部絲腺，采用qPCR測定了Bmslit、Bmrobo1a、Bmrobo1b以及Bmrobo2/3的表達變化。結果顯示，Bmslit、Bmrobo1a、Bmrobo1b和Bmrobo2/3這4個基因在以上6個發(fā)育時期的前部絲腺中均有表達。其中，Bmslit在家蠶3齡起蠶、3齡眠蠶和5齡末期的表達量較高，其他發(fā)育時期的表達量較低（圖3-1A）。Bmrobo1a在3齡眠期和5齡末期高表達，其次是3齡盛食期表達量較高（圖3-1B）。Bmrobo1b和Bmrobo2/3在前部絲腺中的表達模式極為相似，除在家蠶3齡眠蠶特異性高表達外，其他發(fā)育時期表達量較低，以家蠶5齡3天為參照，Bmrobo1b和Bmrobo2/3在家蠶3齡眠蠶的相對表達量為27.82和27.29倍（圖3-1C、D）。該試驗結果表明，4個基因在3齡眠期均呈現(xiàn)高表達。圖3-1Bmslit和Bmrobo基因在家蠶幼蟲前部絲腺中的表達變化A：Bmslit在家蠶幼蟲前部絲腺中的表達；B：Bmrobo1a在家蠶幼蟲前部絲腺中的表達；C：Bmrobo1b在家蠶幼蟲前部絲腺中的表達；D：Bmrobo2/3在家蠶幼蟲前部絲腺中的表達；1：3齡起蠶；2：3齡盛食期；3：3齡眠蠶；4：5齡起蠶；5：5齡3天；6：5齡末期；小寫字母不同表示差異顯著（P<0.05）；大寫字母不同表示差異極顯著（P<0.01）；圖3-2、圖3-3、圖3-18同。Fig.3-1ExpressionchangesofBmslitandBmrobogenesintheanteriorsilkglandofthesilkwormlarvaA:TheexpressionofBmslitintheanteriorsilkglandofthesilkwormlarva;B:TheexpressionofBmrobo1aintheanteriorsilkglandofthesilkwormlarva;C:TheexpressionofBmrobo1bintheanteriorsilkglandofthesilkwormlarva;D:The

【參考文獻】：
期刊論文
[1]昆蟲保幼激素和蛻皮激素對家蠶絲腺生長的影響[J]. 崔為正,吳載德,徐俊良.  江蘇蠶業(yè). 1991(02)

碩士論文
[1]家蠶神經軸突導向因子Robo的功能研究[D]. 李曉童.山東農業(yè)大學 2015
[2]黑腹果蠅midline基因在胚胎時期唾液腺遷移過程中的功能分析[D]. 程乾.山東農業(yè)大學 2015
[3]家蠶T-box基因Bmtbx20與Bmtbx1的功能研究[D]. 梁曉.山東農業(yè)大學 2015



本文編號：2961363