本文關鍵詞：四川部分地區(qū)CIAV分子流行病學調查及CIAV與ALV-J共感染雞對疫苗免疫效果的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：雞傳染性貧血(Chicken Infectious Anemia, CIA)是由雞傳染性貧血病毒(Chicken Infectious Anemia Virus, CIAV)引起的雛雞傳染病,是危害養(yǎng)雞業(yè)的一種重要的免疫抑制性疾病。CIAV能引起所有日齡的雞感染,但本病特征性的臨床癥狀主要見于通過垂直傳播被感染的10～14日齡的雛雞。雞傳染性貧血(CIA)的主要臨床特征表現為死亡率增加、體重增重減緩、貧血、骨髓的再生障礙和胸腺萎縮。由CIAV感染導致的重大經濟損失常常與嚴重的免疫抑制或繼發(fā)感染導致的死亡率增加有關。2013年6月到2014年10月,從四川省的10個市縣共15個雞群采集了138份疑似雞傳染性貧血病病料,利用CIAV特異性引物進行PCR檢測。然后從陽性樣品中分離CIAV,并對分離毒株的全序列基因組測序分析。最后選擇一株代表分離株,感染1日齡SPF雛雞以觀察分離株的致病性。結果顯示28.26%(39/138)的樣品檢測出CIAV,并從檢測出CIAV的樣品中共分離11株CIAV。全序列基因組同源性分析表明,11個分離株的全序列基因組核苷酸同源性為98.1%～99.7%,與參考毒株的核苷酸同源性為96.2%～98.5%。VP1蛋白氨基酸同源性分析表明,這11株當地流行毒株VP1蛋白氨基酸序列同源性為99.1%-100%,與參考毒株的同源性為96.9%-99.3%。遺傳進化分析結果顯示,11個分離株同時處在一個分支上,且與美國分離株Del Ross株親緣性最近。分離株致病性研究結果顯示,所有的SPF雛雞在感染CIAV 15天后均表現出了不同程度的貧血,胸腺和骨髓萎縮,脾臟腫大。本實驗利用CIAV四川分離株CIAV-MZ株同ALV-J共感染1日齡雛雞,研究了兩種病毒混合感染對IB和ND疫苗的免疫效果以及對各自致病性的影響。ALV-J的存在加劇了CIAV感染所導致的貧血程度,在感染的第15天表現出了重度的貧血。同時,ALV-J的共感染也延長了雞只從貧血狀態(tài)恢復的時間,在感染病毒40天后依舊表現出一定程度的貧血。盡管ALV-J在免疫IB疫苗后的前1-2周可以誘導機體產生較高水平的抗體滴度,但CIAV的共存能明顯減弱ALV-J的這種能力,并加快IB抗體滴度在疫苗免疫后期從較高水平下降。CIAV的單獨感染在免疫ND疫苗后對HI抗體效價的生成影響不大,ALV-J的單獨感染則在免疫ND疫苗后的第四周抗體效價出現明顯下降,而CIAV與ALV-J的共感染則會導致抗ND的HI抗體效價下降時間提前。通過實驗發(fā)現,CIAV與ALV-J共感染也會相互作用增強致病性。其中,同時感染CIAV和ALV-J的雞只表現出了嚴重的胸腺萎縮,并出現了腺胃乳頭出血、心肌出血、腸道和胰腺出血等復雜的臨床癥狀。綜上結果表明,CIAV與ALV-J的共感染在免疫抑制上存在協(xié)同作用,而且能相互增強致病性。
【關鍵詞】：雞傳染性貧血病毒 分子流行病學 J亞群禽白血病病毒 致病性
【學位授予單位】：四川農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S858.31
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文縮略詞對照表8-13
• 第一部分 文獻綜述13-24
• 1 概論13-24
• 1.1 發(fā)生史13-14
• 1.2 病原學14-16
• 1.2.1 病原分類14
• 1.2.2 化學組成14-15
• 1.2.3 理化特性15
• 1.2.4 生物學特性15-16
• 1.3 基因組結構16
• 1.4 病毒蛋白16-18
• 1.5 臨床癥狀18
• 1.6 病理變化18-19
• 1.7 病毒的分離和鑒定19-20
• 1.7.1 病毒的分離19-20
• 1.7.2 病毒的鑒定20
• 1.8 流行特征20-22
• 1.8.1 易感動物和宿主范圍20-21
• 1.8.2 傳播方式21
• 1.8.3 繼發(fā)感染21-22
• 1.9 研究目的和意義22-24
• 第二部分 實驗內容24-52
• 實驗一 四川部分地區(qū)CIAV分子流行病學調查24-40
• 1 材料24-26
• 1.1 雞胚和雞24
• 1.2 病料24
• 1.3 主要儀器24
• 1.4 主要試劑和試劑盒24-25
• 1.5 試劑的配制25
• 1.6 引物的設計25-26
• 2 方法26-31
• 2.1 病料的采集和處理26
• 2.2 樣品上清液總DNA的提取26
• 2.3 常規(guī)PCR檢測CIAV26-27
• 2.4 CIAV的分離和鑒定27-28
• 2.4.1 樣品的采集和處理27
• 2.4.2 CIAV的分離27-28
• 2.5 CIAV分離株全序列基因組的測定28-31
• 2.5.1 CIAV分離株DNA的提取28
• 2.5.2 全序列基因組的分段擴增28-29
• 2.5.3 PCR產物的回收和純化29
• 2.5.4 目的片段的T-A克隆29
• 2.5.5 重組克隆質粒的轉化29-30
• 2.5.6 重組質粒的篩選和鑒定30
• 2.5.7 CIAV分離株全序列基因組的分析30-31
• 2.6 CIAV分離株致病性研究31
• 3 結果31-37
• 3.1 病料PCR檢測31-32
• 3.2 CIAV分離毒株全序列基因組擴增32-33
• 3.3 全序列基因組比對分析33-36
• 3.4 當地流行毒株與參考毒株VP1蛋白氨基酸序列比對分析36-37
• 3.5 CIAV分離毒株致病性研究37
• 4 討論37-40
• 實驗二 CIAV與ALV-J共感染雞對疫苗免疫效果的影響40-52
• 1 材料40
• 1.1 雞胚和雞40
• 1.2 毒株和疫苗40
• 1.3 常用試劑40
• 1.4 試劑的配制40
• 2 方法40-42
• 2.1 CIAV分離株SC-MZ株EID50的測定40-41
• 2.2 動物感染實驗的設計41
• 2.3 紅細胞壓積值和體重指數的檢測41
• 2.3.1 紅細胞壓積值(PCV)的測定41
• 2.3.2 體重指數的檢測41
• 2.4 IB和ND抗體滴度的測定41-42
• 2.5 脾臟和法氏囊指數的測定42
• 2.6 觀察臨床癥狀并制備病理切片42
• 3 結果42-49
• 3.1 EID50的測定42
• 3.2 紅細胞壓積值和體質量的測定42-44
• 3.2.1 紅細胞壓積值(PCV)測定42-43
• 3.2.2 體質量的測定43-44
• 3.3 IB-ND抗體滴度的測定44-46
• 3.3.1 間接ELISA法檢測IB抗體滴度44-45
• 3.3.2 ND抗體效價檢測45-46
• 3.4 脾臟和法氏囊指數的測定46-47
• 3.5 臨床癥狀及病理變化47-49
• 3.5.1 臨床癥狀47
• 3.5.2 病理變化47-49
• 4 討論49-52
• 結論52-53
• 參考文獻53-61
• 致謝61

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