三色堇（Viola tricolor）是世界上著名的草本花卉,被譽(yù)為“花壇皇后”,耐寒喜涼爽氣候,適宜的生長(zhǎng)溫度在14²5℃,夏季高溫對(duì)三色堇生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生不利影響,導(dǎo)致觀賞價(jià)值降低,較長(zhǎng)時(shí)間高溫脅迫甚至?xí)䦟?dǎo)致植株死亡。非生物脅迫耐受的分子調(diào)控機(jī)制依賴于特定相關(guān)基因的激活和調(diào)控。植物熱激轉(zhuǎn)錄因子（Heat stress transcription factor,HSF）在高溫脅迫響應(yīng)和賦予脅迫耐受性中起著至關(guān)重要的作用。本試驗(yàn)利用耐熱性較好的三色堇自交系DFM-16和熱敏感自交系08H作為研究材料,利用RACE技術(shù)從葉片中分離了VtHSFB2b基因,比較分析了這兩個(gè)材料中該基因的序列結(jié)構(gòu)及高溫應(yīng)答表達(dá)水平的特征,并通過(guò)亞細(xì)胞定位及擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化方法研究該基因的功能。主要研究結(jié)果如下:1.DFM-16材料中VtHSFB2b基因cDNA序列是1439 bp,08H材料中VtHSFB2b基因cDNA序列是1397 bp,兩個(gè)材料中VtHSFB2b基因的開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)度相同均為975 bp,但存在24個(gè)堿基的差異,兩者預(yù)測(cè)編碼的324個(gè)氨基酸中也相應(yīng)存在6個(gè)氨基酸差異,其氨基... 

【文章來(lái)源】：河南科技學(xué)院河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

HSF基本結(jié)構(gòu)

三色堇熱激轉(zhuǎn)錄因子基因VtHSFB2b的克隆及遺傳轉(zhuǎn)化12圖2-1兩個(gè)材料的田間表型圖注：a.DFM-16四月中旬b.DFM-16六月上旬c.08H四月中旬d.08H六月上旬Fig.2-1FieldphenotypesofthetwomaterialsNote:a.DFM-16inmid-Aprilb.DFM-16inearlyJunec.08Hinmid-Aprild.08Hinearly-June2.1.2菌株和質(zhì)粒大腸桿菌(Escherichiacoli）DH5α(CodeNo：9057)及載體pMD18-T(CodeNo：6011)均從TaKaRa生物公司購(gòu)買。2.1.3主要試劑植物總RNA提取試劑盒(CodeNo：DP432)購(gòu)自天根生化公司、反轉(zhuǎn)錄試劑盒(CodeNo：RR047A)、小量質(zhì)粒提取試劑盒(CodeNo：9760)、凝膠回收試劑盒（CodeNo：9762）、Taq酶、dNTP購(gòu)自TaKaRa公司；2×EsTaqMasterMix(CodeNo：CW0690S)購(gòu)自康為世紀(jì)公司；DNAmarker、Loadingbuffer、安芐青霉素(Amp)、X-Gal和IPTG購(gòu)自索萊寶adbc

第二章三色堇熱激轉(zhuǎn)錄因子基因VtHSFB2b的克隆和序列分析21圖2-2三色堇葉片總RNA電泳圖注：1-2.DFM-16材料RNA3-4.08H材料RNAFig.2-2TotalRNAelectrophoresisofpansyleavesNote：1-2.DFM-16RNA3-4.08HRNA2.3.2DFM-16材料中VtHSFB2b基因3"和5"序列擴(kuò)增根據(jù)己經(jīng)獲得的VtHSFB2b基因的保守區(qū)核苷酸序列，利用巢式PCR引物，一對(duì)外引物和一對(duì)內(nèi)引物，以反轉(zhuǎn)錄合成的三色堇cDNA為模板，分別對(duì)DFM-16材料和08H材料中VtHSFB2b基因的3"和5"末端進(jìn)行兩輪PCR的擴(kuò)增，結(jié)果顯示DFM-16材料中VtHSFB2b基因擴(kuò)增產(chǎn)物3"端約是700bp，5"端約是1200bp（圖2-3a）。08H材料中VtHSFB2b基因擴(kuò)增產(chǎn)物3"端約是700bp左右，5"端約是1200bp左右（圖2-3b）。b

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[9]大花三色堇和角堇對(duì)高溫脅迫的生理響應(yīng)[J]. 陳宏志,杜曉華,穆金艷,賈文慶,劉會(huì)超.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(06)
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碩士論文
[1]三色堇熱激蛋白70（VtHSP70）基因克隆及熱脅迫下應(yīng)答分析[D]. 牛楊莉.河南科技學(xué)院 2019
[2]三色堇小分子熱激蛋白基因克隆及表達(dá)分析[D]. 楊雅萍.河南科技學(xué)院 2019
[3]菠菜HsfA1和HsfBs基因的功能研究[D]. 董雪芳.上海師范大學(xué) 2019
[4]菊花熱激轉(zhuǎn)錄因子CmHSFA4和CmHSFB1基因克隆及功能鑒定[D]. 張煥茹.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[5]非洲狗牙根CtHsfA2b基因耐熱功能研究[D]. 黃婉璐.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[6]三色堇熱激蛋白70（HSP70）基因的克隆及生物信息學(xué)分析[D]. 黃伶俐.河南科技學(xué)院 2014
[7]鷹嘴豆熱激轉(zhuǎn)錄因子CarHSFB2的序列與功能分析[D]. 楊斌.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[8]鷹嘴豆熱激轉(zhuǎn)錄因子CarHSFB2的克隆與功能驗(yàn)證[D]. 成慧穎.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



本文編號(hào)：2904740