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FGF23對雞成骨細(xì)胞礦化的作用及其分子機(jī)理

發(fā)布時間:2020-12-08 17:29
  磷對家禽生產(chǎn)至關(guān)重要,不僅能促進(jìn)骨骼的正常生長發(fā)育,還能保證良好的蛋殼品質(zhì)。作為骨源性激素,成纖維細(xì)胞生長因子23(Fibroblast growth factor 23,FGF23)能夠抑制哺乳動物腎臟中磷酸鹽的重吸收,促進(jìn)磷酸鹽的排出,是機(jī)體內(nèi)調(diào)控磷代謝的關(guān)鍵因子。因此研究FGF23如何調(diào)控家禽磷代謝及其骨骼發(fā)育,對深入了解FGF23作用機(jī)制以及生產(chǎn)實(shí)踐有重要意義。本論文研究了影響雞成骨細(xì)胞FGF23 mRNA表達(dá)的因素以及過表達(dá)FGF23腺病毒對成骨細(xì)胞礦化的影響,初步確定了FGF23在調(diào)控雞成骨細(xì)胞礦化的中的作用。1.調(diào)控雞成骨細(xì)胞FGF23表達(dá)的因素分析體外培養(yǎng)雞骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow stem cells,BMSCs),并誘導(dǎo)其分化為成骨細(xì)胞。在誘導(dǎo)細(xì)胞分化的第8天,使用茜素紅S染色,可以觀察到大量紅色礦化結(jié)節(jié),表明大多BMSCs已經(jīng)被誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞。為了探究影響成骨細(xì)胞FGF23表達(dá)的因素,使用β-甘油磷酸鈉(β-glycerol phosphate disodium salt,β-Gly,5mM、10M、20mM)、氯化鈣(Calcium chlo... 

【文章來源】: 呂正天 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)

【文章頁數(shù)】:79 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

FGF23對雞成骨細(xì)胞礦化的作用及其分子機(jī)理


總RNA電泳圖

反應(yīng)條件,管家基因


FGF23對雞成骨細(xì)胞礦化的作用及其分子機(jī)理20標(biāo)準(zhǔn)曲線:隨機(jī)取對照組、不同處理組的cDNA混合,制作5個濃度梯度(依次進(jìn)行5×倍比稀釋):1×、5×、25×、125×、625×。按照上述PCR步驟進(jìn)行擴(kuò)增,得到管家基因和個目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線(本論文中管家基因?yàn)棣?actin,如圖2-3)。根據(jù)斜率(k)計算擴(kuò)增效率,計算公式為:擴(kuò)增效率e=101/(-k)-1。標(biāo)準(zhǔn)曲線中斜率k在-3至-3.5之間,RT-PCR的擴(kuò)增效率在0.9-1.1之間時,說明引物擴(kuò)增效果最佳。當(dāng)目的基因的擴(kuò)增效率和持家基因的擴(kuò)增效率相同時(即二者的斜率相差不超過0.2),以β-actin的表達(dá)水平作為內(nèi)參,采用“平均相對表達(dá)量=2-△△Ct”計算該基因的相對表達(dá)量。為了消除不同PCR板之間的差異,每個批次擴(kuò)增目的基因的同時都會添加管家基因,而且每個樣品作兩個重復(fù),即每個樣品可得到兩個Ct值,取兩個Ct值計算平均值來作為該樣品的Ct值進(jìn)行分析統(tǒng)計。圖2-2Real-TimePCR反應(yīng)條件Fig2-2ThermalcyclerprotocolofReal-TimePCR圖2-3β-actin擴(kuò)增曲線Figure2-3Amplificationcurveofβ-actin

擴(kuò)增曲線,管家基因,效率,標(biāo)準(zhǔn)曲線


FGF23對雞成骨細(xì)胞礦化的作用及其分子機(jī)理20標(biāo)準(zhǔn)曲線:隨機(jī)取對照組、不同處理組的cDNA混合,制作5個濃度梯度(依次進(jìn)行5×倍比稀釋):1×、5×、25×、125×、625×。按照上述PCR步驟進(jìn)行擴(kuò)增,得到管家基因和個目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線(本論文中管家基因?yàn)棣?actin,如圖2-3)。根據(jù)斜率(k)計算擴(kuò)增效率,計算公式為:擴(kuò)增效率e=101/(-k)-1。標(biāo)準(zhǔn)曲線中斜率k在-3至-3.5之間,RT-PCR的擴(kuò)增效率在0.9-1.1之間時,說明引物擴(kuò)增效果最佳。當(dāng)目的基因的擴(kuò)增效率和持家基因的擴(kuò)增效率相同時(即二者的斜率相差不超過0.2),以β-actin的表達(dá)水平作為內(nèi)參,采用“平均相對表達(dá)量=2-△△Ct”計算該基因的相對表達(dá)量。為了消除不同PCR板之間的差異,每個批次擴(kuò)增目的基因的同時都會添加管家基因,而且每個樣品作兩個重復(fù),即每個樣品可得到兩個Ct值,取兩個Ct值計算平均值來作為該樣品的Ct值進(jìn)行分析統(tǒng)計。圖2-2Real-TimePCR反應(yīng)條件Fig2-2ThermalcyclerprotocolofReal-TimePCR圖2-3β-actin擴(kuò)增曲線Figure2-3Amplificationcurveofβ-actin

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]蛋雞缺磷癥的誘因、癥狀及治療措施[J]. 賈飛.  中國畜禽種業(yè). 2019(07)
[2]Decreased osteogenesis of adult mesenchymal stem cel s by reactive oxygen species under cyclic stretch: a possible mechanism of age related osteoporosis[J]. Jiali Tan,Xin Xu,Zhongchun Tong,Jiong lin,Qiujun Yu,Yao Lin,Wei Kuang.  Bone Research. 2015(01)
[3]家禽磷營養(yǎng)研究進(jìn)展與應(yīng)用[J]. 韓進(jìn)誠,王玉玲,王家慶,施傳信,姚軍虎.  飼料工業(yè). 2009(15)
[4]植酸磷和植酸酶研究進(jìn)展[J]. 賀建華.  動物營養(yǎng)學(xué)報. 2005(01)



本文編號:2905416

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