發(fā)布時間：2020-10-29 10:01

　　 本文旨在從生姜中分離內(nèi)生細菌,探明其生物多樣性,進而篩選高效植物促生細菌,為開發(fā)內(nèi)植物生細菌資源提供基礎。以采自貴州貴陽、重慶、四川雅安、眉山等地的生姜為材料,采用常規(guī)方法分離生姜內(nèi)生細菌,應用BOX-PCR和16S rDNA PCR-RFLP,16S rDNA序列分析技術研究生姜內(nèi)生細菌的遺傳多樣性和系統(tǒng)發(fā)育地位,進而篩選具有生防和促生功能的生姜內(nèi)生細菌,探明其產(chǎn)IAA、溶磷和產(chǎn)載體能力,并通過玉米盆栽試驗驗證菌株的促生效果。獲得了以下結果：1.從采自貴州貴陽、重慶、四川雅安、四川眉山等地的生姜中共分離到57株內(nèi)生細菌,BOX-PCR和16S rDNA PCR-RFLP研究了生姜內(nèi)生細菌的遺傳多樣性,進而選取34株代表菌測定了16S rRNA基因全序列,結果表明,生姜內(nèi)生細菌具有豐富的遺傳多樣性,分屬于α變形菌綱(a-Proteobacteria)、β變形菌綱(β-Proteobacteria)、γ變性菌綱(y-Proteobacteria)和厚壁菌門(Firmicutes)的蒼白桿菌屬(Ochrobactrum)、不動桿菌屬(Acinetobacter)、窄食單胞菌屬(Stenotrophomonas)、腸桿菌屬Enterobacter)、沙雷氏菌屬(Serratia)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、土壤桿菌屬(Agrobacterium)以及Tetrathiobacter等9個屬。2.測定了34株代表菌株的生防功能,結果表明,有11株內(nèi)生菌拮抗番茄早疫病(Alternaria solani),14株內(nèi)生菌對小麥赤霉病菌(Fusarium graminearum)有拮抗作用,11株內(nèi)生菌對黃瓜炭疽病菌((Colletotrichum turcium)有拮抗作用；其中7株菌同時能拮抗3種病原菌。34株細菌的促生試驗表明,有16株具有產(chǎn)IAA的能力,包括蒼白桿菌屬(Ochrobactrum)、土壤農(nóng)桿菌屬(Agrobacterium)、不動桿菌屬(Acinetobacter)、窄食單胞菌屬(Stenotrophomonas)、沙雷氏菌屬(Serratia)以及芽孢桿菌屬(Bacillus)的菌株,IAA產(chǎn)量介于1.02-45.35μg/mL之間；18株菌具有產(chǎn)鐵載體的能力,其產(chǎn)鐵載體活性單位為9.47-70.66%之間；16株菌具有溶解無機磷的能力,包括蒼白桿菌屬(Ochrobactrum)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、不動桿菌屬(Acinetobacter)、沙雷氏菌屬(Serratia)以及芽孢桿菌屬(Bacillus)的菌株,在添加5g/LCa-P、2g/LAl-P和1g/LFe-P的發(fā)酵液中,有效磷含量分別介于9.32-233.05μg/mL、1.14-9、和2.98-55.42 μg/mL之間。3.盆栽試驗驗證菌株QW11 (Pseudomonas sp.、QW40 (Ochrobactrum sp.)、QW45 (Serratia sp.、QW48 (Ochrobactrum sp.)、QW52 (Bacillus sp.)和QW57 (Pseudomonassp.)其對玉米的促生效果,結果表明,單接種促生菌,玉米株高、葉面積、地上部分和地下部分干重分別比對照增加17.57-37.61%、20.52-48.54%、25.62-49.64%和6.16-62.72%；植株氮、磷以及鉀含量分別增加26.76-79.18%、26.32-85.53%和8.40-26.59%。接種促生細菌結合施肥,玉米株高、葉面積、地上部分干重和地下部分干重分別比對照增加了11.26-27.85%、4.96-30.34%、9.79-34.04%和16.95-48.91%;植株全氮、全磷和全鉀含量分別比對照增加]1.05-85.01%,5.63-30.28%和2.64-20.30%。同時,接種促生細菌可增加根際細菌數(shù)量,提高土壤微生物量碳、氮及磷。
【學位單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：S632.5;Q93
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 引言
    1.2 植物內(nèi)生細菌的定義
    1.3 植物內(nèi)生細菌的分布及起源
    1.4 植物內(nèi)生細菌的分離方法
        1.4.1 表面消毒
        1.4.2 樣品的處理及表面消毒有效性的檢測
        1.4.3 分離培養(yǎng)基的選擇
    1.5 植物內(nèi)生細菌的生物多樣性
    1.6 植物內(nèi)生細菌與宿主間的生物學作用
    1.7 立題依據(jù)及研究內(nèi)容
        1.7.1 立題依據(jù)
        1.7.2 研究內(nèi)容
        1.7.3 技術路線
第二章 生姜內(nèi)生細菌的分離及多樣性分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實驗樣品采集
        2.1.2 分離培養(yǎng)基
        2.1.3 主要試劑及儀器
        2.1.4 生姜內(nèi)生細菌分離與純化
        2.1.5 內(nèi)生細菌DNA的提取
        2.1.6 BOX-PCR指紋圖譜分析
        2.1.7 內(nèi)生細菌16S rDNA ARDRA分析
        2.1.8 內(nèi)生細菌的16S rDNA序列分析
        2.1.9 數(shù)據(jù)處理
    2.2 結果與分析
        2.2.1 內(nèi)生細菌的分離純化
        2.2.2 內(nèi)生細菌基因組DNA的提取以及16S rDNA序列擴增
        2.2.3 菌株BOX-PCR分析
        2.2.4 內(nèi)生細菌的ARDRA結果分析
        2.2.5 代表菌株16S rDNA序列分析和系統(tǒng)發(fā)育樹的構建
    2.3 討論
第三章 生防促生菌株篩選
    3.1 材料與方法
        3.1.1 供試菌株
        3.1.2 主要試劑與培養(yǎng)基
        3.1.3 生防菌株篩選
        3.1.4 促生菌株篩選
        3.1.5 數(shù)據(jù)處理
    3.2 結果與分析
        3.2.1 菌株對病原菌拮抗效果分析
        3.2.2 菌株的促生能力分析
    3.3 討論
第四章 生姜內(nèi)生促生細菌對玉米的促生能力分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 供試材料
        4.1.2 供試菌株
        4.1.3 盆栽試驗設計
        4.1.4 盆栽試驗各種指標的測定
        4.1.5 數(shù)據(jù)處理
    4.2 結果與分析
        4.2.1 盆栽試驗各種形態(tài)學參數(shù)分析
        4.2.2 玉米植株吸收營養(yǎng)元素分析
        4.2.3 米根際土壤中微生物數(shù)量分析
        4.2.4 玉米根際土壤理化特性分析
        4.2.5 玉米根際土壤的微生物量碳、氮、磷分析
    4.3 討論
第五章 全文結論與研究建議
    5.1 全文結論
    5.2 研究建議
參考文獻
致謝
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本文編號：2860746