本文關(guān)鍵詞：兩種多糖對齊口裂腹魚腸道消化酶、形態(tài)及菌群的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本文研究了不同魚齡齊口裂腹魚(體重在100～300g之間(大魚：300±0.15g,中魚：200±0.15g,小魚：100±0.15g)腸道形態(tài)及菌群,包括：腸道中嗜水氣單胞菌、乳酸桿菌、芽孢桿菌的分離鑒定及其產(chǎn)酶能力的研究,不同魚齡魚齊口裂腹魚后腸腸道菌群的PCR-DGGE結(jié)果分析以及不同魚齡齊口裂腹魚腸道組織形態(tài)的分析。同時,研究了日糧中添加氧化魔芋葡甘聚糖(Oxidized Konjac Glucomannan, OKGM)和抗性淀粉(Resistant Starch, RS):0(對照組)、3.2%(氧化魔芋葡甘聚糖高劑量組H-OKGM)、1.6%(氧化魔芋葡甘聚糖中劑量組M-OKGM)、0.8%(氧化魔芋葡甘聚糖低劑量組L-OKGM)、6.4%(檸檬酸抗性淀粉高劑量組H-RS)、3.2%(檸檬酸抗性淀粉低劑量組L-RS)對齊口裂腹魚腸道消化酶、腸道形態(tài)、后腸腸道菌群的PCR-DGGE結(jié)果以及對嗜水氣單胞菌、芽孢桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量的影響,以期為OKGM和RS這兩種多糖作為功能性添加劑的進一步開發(fā)利用提供理論依據(jù)。主要結(jié)果如下：1、齊口裂腹魚腸道形態(tài)及菌群分析結(jié)果：從健康齊口裂腹魚腸道中分離的3株氣單胞菌菌株,均為致病性嗜水性氣單胞菌；分離到的三株芽孢桿菌中YB-08為解淀粉芽孢桿菌,YB-03和YB-20為枯草芽孢桿菌,三株菌株均能產(chǎn)蛋白酶和淀粉酶,且產(chǎn)酶能力穩(wěn)定,產(chǎn)酶活性高；分離到的6株乳酸菌中RS-01和RS-04為短乳桿菌(Lactobacillus brevis),分離株RS-02和RS-06為棒狀乳酸桿菌(Lactobacillus coryniformis),分離株RS-03和RS-09為彎曲乳酸桿菌(Lactobacillus curvatus);大、中、小魚腸道菌群的PCR-DGGE結(jié)果表明,大、中、小魚相似性系數(shù)均處在中等相似范圍內(nèi),但是中魚組和小魚組的相似度更高,且魚齡對齊口裂腹魚腸道菌群的豐富度有一定影響,大魚組腸道內(nèi)容物微生物菌群多樣性最豐富；腸道組織切片結(jié)果表明,腸道腸絨毛高度、內(nèi)環(huán)肌層厚度、外縱肌層厚度均隨魚齡增長而提高,但是小魚前、中腸粘膜上皮高度均高于大、中魚(p0.05)。2、兩種多糖對腸道基礎(chǔ)指標(biāo)和消化酶的影響：飼料中不同OKGM和RS的添加量對齊口裂腹魚的腸長指數(shù)和腸體指數(shù)無顯著影響(p0.05)。飼料中添加OKGM和RS對齊口裂腹魚后腸腸道蛋白酶活力具有顯著影響,且添加量不同影響效果也不同；對中、后腸淀粉酶活力具有顯著影響,且OKGM的影響效果要大于相同添加量的RS；對前腸脂肪酶活力無明顯影響,但是能明顯提高中腸脂肪酶活力顯著降低后腸脂肪酶活力。不同劑量的OKGM在中腸與后腸中的作用效果不同,中腸中隨著劑量增加而增加,后腸中劑量的效果最好。3、兩種多糖對腸形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響：對腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響：1)前腸：飼料中添加OKGM均可顯著提高前腸腸絨毛高度、粘膜上皮高度(p0.05)和降低內(nèi)環(huán)肌層厚度、外縱肌層厚度,且L-OKGM組作用效果最明顯；飼料中添加RS均降低了前腸腸絨毛高度、粘膜上皮高度、內(nèi)環(huán)肌層厚度、外縱肌層厚度,且L-RS組作用效果大于H-RS組。2)中腸：飼料中添加OKGM可提高中腸腸絨毛高度降低中腸內(nèi)環(huán)肌層厚度、外縱肌層厚度,H-OKGM組和M-OKGM組均降低中腸粘膜上皮高度,但L-OKGM可提高中腸粘膜上皮高度；飼料中添加RS降低了中腸腸絨毛高度、粘膜上皮高度、內(nèi)環(huán)肌層厚度、外縱肌層厚度,且H-RS組的腸絨毛有輕微損傷。3)后腸；飼料中添加OKGM能提高后腸腸絨毛高度、內(nèi)環(huán)肌層厚度、外縱肌層厚度,但對粘膜上皮高度有所降低,不同劑量之間無顯著差異；RS能降低后腸絨毛高度、粘膜上皮高度、外縱肌層厚度,但對內(nèi)環(huán)肌層厚度有所提高,且兩個劑量組除了腸絨毛高度外其它指標(biāo)均有明顯差異。4、兩種多糖對后腸腸道菌群的影響：RS和RS添加量對齊口裂腹魚腸道菌群的相似性系數(shù)無明顯影響,低劑量的OKGM組與對照組的相似性系數(shù)最低(67.2),OKGM中、高劑量之間無顯著差異；低劑量的RS組與對照組的相似性系數(shù)為76.2,高劑量的OKGM組與對照組的相似性系數(shù)為68.6。飼料中添加OKGM可提高齊口裂腹魚后腸腸道菌群的多樣性,且1.6%的OKGM組較對照組提高了10.20%。飼料中相同添加量的RS會降低腸道菌群多樣性指數(shù),但是未達(dá)到顯著水平(p0.05)。5、兩種多糖對腸道嗜水氣單胞菌屬和芽孢桿菌屬的數(shù)量的影響：RS和OKGM均能有效抑制齊口裂腹魚體內(nèi)中、后腸嗜水氣單菌的生長,其中后腸效果最明顯。并且隨著多糖添加量的增加,體內(nèi)抑菌效果也有所增強。RS和OKGM均能有效促進齊口裂腹魚體內(nèi)前、中、后腸芽孢桿菌、乳酸桿菌的生長,且后腸效果最明顯。并且添加量的不同,效果也有所不同。
【關(guān)鍵詞】：氧化魔芋葡甘聚糖 抗性淀粉 消化酶 腸道形態(tài) 腸道菌群
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S917.4
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 符號說明9-13
• 1 文獻(xiàn)綜述13-21
• 1.1 魚類腸道菌群的概述13-14
• 1.1.1 魚類腸道菌群的形成及分布13
• 1.1.2 魚類腸道菌群的生理功能13-14
• 1.1.2.1 營養(yǎng)與輔助消化作用13-14
• 1.1.2.2 防御功能14
• 1.2 益生元及其對腸道健康影響的概述14-18
• 1.2.1 益生元概念及種類14-16
• 1.2.2益生元對腸道健康的影響16-18
• 1.3 益生元在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用18
• 1.4 研究目的及意義18-20
• 1.5 技術(shù)路線20-21
• 2 材料與方法21-36
• 2.1 主要原料及試劑21
• 2.2 主要試劑的配制21-24
• 2.2.1 DGGE主要試劑的配制22-23
• 2.2.2 消化酶測定相關(guān)試劑的配制23-24
• 2.3 主要儀器及設(shè)備24
• 2.4 試驗方法24-36
• 2.4.1 不同魚齡齊口裂腹魚腸道樣品的采集24-25
• 2.4.2 氣單胞菌的分離鑒定25-26
• 2.4.3 芽孢桿菌的分離鑒定26-28
• 2.4.4 乳酸桿菌的分離鑒定28
• 2.4.5 不同魚齡齊口裂腹魚腸道菌群的DGGE分析28-30
• 2.4.6 不同魚齡齊口裂腹魚組織切片的觀察30-31
• 2.4.7 動物的飼養(yǎng)及管理31-32
• 2.4.8 養(yǎng)殖試驗樣品的采集32
• 2.4.9 養(yǎng)殖試驗組腸道基礎(chǔ)指標(biāo)測定32-33
• 2.4.10 養(yǎng)殖試驗組腸道消化酶的測定33-34
• 2.4.11 養(yǎng)殖試驗組后腸腸道菌群變化的DGGE分析34-35
• 2.4.12 養(yǎng)殖試驗組腸道組織切片的制作35
• 2.4.13 養(yǎng)殖試驗組腸道菌群數(shù)量的變化35-36
• 2.4.14 數(shù)據(jù)處理36
• 3 結(jié)果與分析36-65
• 3.1 氣單胞菌的分離鑒定36-39
• 3.1.1 氣單胞菌分離及菌落形態(tài)36-37
• 3.1.2 齊口裂腹魚腸道中氣單胞菌的多重PCR檢測37-38
• 3.1.3 氣單胞菌16S rRNA、aer和AHH的克隆及序列分析38-39
• 3.1.4 氣單胞菌16S rRNA的進化起源分析39
• 3.2 芽孢桿菌的分離鑒定及產(chǎn)酶能力分析39-43
• 3.2.1 菌落及菌體的形態(tài)特征39-40
• 3.2.2 細(xì)菌的16S rDNA測定及序列分析40-41
• 3.2.3 產(chǎn)酶規(guī)律研究結(jié)果41-43
• 3.3 乳酸桿菌的分離鑒定43-45
• 3.3.1 乳酸桿菌形態(tài)特征43
• 3.3.2 乳酸桿菌的16S rDNA測定及序列分析43-45
• 3.4 不同魚齡齊口裂腹魚后腸腸道菌群的PCR-DGGE結(jié)果分析45-47
• 3.4.1 齊口裂用腹魚腸道微生物16S rDNA的V3區(qū)PCR擴增結(jié)果45-46
• 3.4.2 齊口裂腹魚后腸腸道菌群的PCR-DGGE指紋圖譜的建立、聚類分析及相似性系數(shù)分析46-47
• 3.5 不同魚齡齊口裂腹魚腸道組織切片觀察及測量結(jié)果47-49
• 3.5.1 前腸腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)47-48
• 3.5.2 中腸腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)48-49
• 3.5.3 后腸腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)49
• 3.6 OKGM和RS對齊口裂腹魚腸體指數(shù)和腸重指數(shù)的影響49-50
• 3.7 OKGM和RS對齊口裂腹魚腸道消化酶活力的影響50-52
• 3.7.1 OKGM和RS對齊口裂腹魚蛋白酶活力的影響50-51
• 3.7.2 OKGM和RS對齊口裂腹魚淀粉酶活力的影響51
• 3.7.3 OKGM和RS對齊口裂腹魚脂肪酶活力的影響51-52
• 3.8 OKGM和RS對齊口裂腹魚腸道形態(tài)的影響52-57
• 3.8.1 對前腸腸道形態(tài)的影響52-54
• 3.8.2 對中腸腸道形態(tài)的影響54-55
• 3.8.3 對后腸腸道形態(tài)的影響55-57
• 3.9 齊口裂腹魚后腸腸道菌群的PCR-DGGE結(jié)果分析57-60
• 3.9.1 齊口裂用腹魚后腸道微生物16S rDNA的V3區(qū)PCR擴增結(jié)果57
• 3.9.2 齊口裂用腹魚后腸腸道菌群的PCR-DGGE指紋圖譜的建立、聚類分析及相似性系數(shù)分析57-59
• 3.9.3 齊口裂用腹魚后腸腸道菌群的多樣性分析59-60
• 3.10 OKGM和RS對齊口裂腹魚腸道微生物的影響60-64
• 3.10.1 對腸道中嗜水氣單胞菌的影響60-62
• 3.10.2 對腸道中芽孢桿菌的影響62-64
• 3.11 對腸道中乳酸桿菌的影響64-65
• 4 討論65-71
• 4.1 齊口裂腹魚腸道特定細(xì)菌的分離鑒定65-67
• 4.2 齊口裂腹魚腸道菌群的PCR-DGGE及腸道組織結(jié)構(gòu)分析67-68
• 4.3 兩種多糖對齊口裂腹魚腸道消化酶的影響68-69
• 4.4 兩種多糖對齊口裂腹魚腸道結(jié)構(gòu)的影響69-70
• 4.5 兩種多糖對齊口裂腹魚腸道微生物的影響70-71
• 5 結(jié)論與展望71-72
• 5.1 結(jié)論71-72
• 5.2 展望72
• 參考文獻(xiàn)72-79
• 致謝79

【相似文獻(xiàn)】

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