本文關(guān)鍵詞：偽狂犬病毒SA215-T的構(gòu)建與神經(jīng)傳導(dǎo)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：偽狂犬病毒具有侵染神經(jīng)的能力,利用這一性質(zhì),該病毒已成功應(yīng)用于對內(nèi)臟、腺體和肌肉的神經(jīng)標(biāo)記。偽狂犬病毒減毒株神經(jīng)傳導(dǎo)是目前較熱門的研究方向。減毒株通常缺失了gE、gI和US9三個(gè)基因,其中g(shù)E和gI是偽狂犬病毒重要的毒力基因,缺失后可使宿主的致死時(shí)間更長,而US9的功能主要為協(xié)助gB等必需膜蛋白的順行轉(zhuǎn)運(yùn),缺失后的病毒在突觸間將執(zhí)行嚴(yán)格的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)。采用Lipofectamine#174; 3000轉(zhuǎn)染試劑,將PP63質(zhì)粒與偽狂犬病毒Fa基因組DNA共轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞,蝕斑篩選gI/gE/Us9重組缺失病毒,并命名為SA215-T。采用PCR、基因測序、western-blot、電鏡檢查和生長曲線測定重組病毒PRV SA215-T。結(jié)果：western-blot未見SA215-T與gE抗體發(fā)生顯色反應(yīng),其電鏡形態(tài)與野毒無明顯差異,重組病毒與親本毒在細(xì)胞中的生長曲線差異不明顯且達(dá)到了較高的病毒滴度。為探索三種不同偽狂犬毒株SA215-T,親本毒Fa和Bartha-K61對神經(jīng)的傳導(dǎo)作用,本實(shí)驗(yàn)以小鼠肱二頭肌反射為模型,統(tǒng)計(jì)了小鼠攻毒后的存活時(shí)間并建立了檢測脊髓偽狂犬病毒分布的免疫組化方法。結(jié)果：Fa小鼠平均存活時(shí)間為73.33h,與SA215-T(114.83h)或Bartha-K61 (120.67h)差異極顯著(P0.01)；瀕死小鼠脊髓與大腦經(jīng)PCR和免疫組化檢測,偽狂犬病毒主要位于頸椎C5-C6脊髓并集中分布于脊髓灰質(zhì)運(yùn)動神經(jīng)元池區(qū)(motomeuron pool),部分C5-C6脊髓經(jīng)PCR檢測為陽性,而免疫組化檢測為陰性。
【關(guān)鍵詞】：偽狂犬病毒 gE/gI基因 重組病毒SA215-T C5-C6脊髓 神經(jīng)傳導(dǎo)
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• ABSTRACT5-6
• 縮略詞表6-9
• 第一章 文獻(xiàn)綜述9-24
• 1 PRV9-22
• 1.1 PRV的概述9
• 1.2 對偽狂犬病毒認(rèn)識的歷程9-10
• 1.3 PRV的結(jié)構(gòu)分子生物學(xué)10-14
• 1.4 束路追蹤技術(shù)14-16
• 1.5 偽狂犬病毒神經(jīng)示蹤16-19
• 1.6 肌肉神經(jīng)調(diào)控19-20
• 1.7 免疫組化方法簡介20-22
• 3 研究的目的與意義22-24
• 第二章 偽狂犬病毒SA215-T的構(gòu)建24-39
• 1 材料24-26
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料24-25
• 1.2 主要儀器25-26
• 2 實(shí)驗(yàn)方法26-33
• 2.1 偽狂犬病毒SA215-T的構(gòu)建26-27
• 2.2 PP63質(zhì)粒的制備27-32
• 2.3 重組病毒形態(tài)學(xué)鑒定32-33
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-37
• 4. 討論與分析37-39
• 第三章 小鼠肱二頭肌神經(jīng)傳導(dǎo)研究39-50
• 1 主要材料、試劑與儀器39-40
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料39-40
• 1.2 主要儀器40
• 2 試驗(yàn)方法40-42
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-47
• 3.1 SA215-T神經(jīng)毒力試驗(yàn)42-43
• 3.2 PCR鑒定偽狂犬脊髓分布情況43-44
• 3.3 免疫組化條件的確定44-46
• 3.4 免疫組化結(jié)果與PCR結(jié)果比較46-47
• 4 討論47-50
• 全文總結(jié)50-51
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 附錄57-58
• 致謝58

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1 劉博濤;宋昌軍;劉翊中;;偽狂犬病毒致病機(jī)理的研究進(jìn)展[J];西北民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2008年04期

2 彭蕓蕓;仲曉寧;李春蕾;;偽狂犬病毒載體的研究進(jìn)展[J];山東畜牧獸醫(yī);2013年05期

3 丁建華,付烈振,王家富,羅滿林,謝小虎,張楚瑜;偽狂犬病毒表達(dá)載體的構(gòu)建[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1997年06期

4 李建;曹娟;廖園園;劉潔;朱微;秦偉;秦紅剛;漆世華;謝紅玲;;偽狂犬病毒單克隆抗體的制備和鑒定[J];中國獸藥雜志;2014年03期

5 曹瑞兵;周國棟;周海霞;包晶晶;陳溥言;;豬β干擾素在畢赤酵母中的分泌表達(dá)及其對偽狂犬病毒的抑制作用[J];微生物學(xué)報(bào);2006年03期

6 黃現(xiàn)青;魏戰(zhàn)勇;高曉平;韓慶功;崔艷紅;;表面活性素體外抗偽狂犬病毒活性研究[J];生物學(xué)雜志;2009年04期

7 田志軍;仇華吉;倪健強(qiáng);周艷君;蔡雪輝;周國輝;王云峰;童光志;;表達(dá)豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其生物學(xué)特性分析(英文)[J];遺傳學(xué)報(bào);2005年12期

8 童武;張青占;鄭浩;劉飛;姜一峰;單同領(lǐng);周艷君;童光志;;免疫后發(fā)病仔豬中偽狂犬病毒的分離和鑒定[J];中國動物傳染病學(xué)報(bào);2013年03期

9 汪銘書，，郭萬柱，婁高明，費(fèi)恩閣，宣華;偽狂犬病毒閩A株基因文庫的構(gòu)建及物理圖譜分析[J];中國病毒學(xué);1994年04期

10 汪銘書,郭萬柱,婁高明,費(fèi)恩閣,宣華;偽狂犬病毒閩A株基因文庫的構(gòu)建及物理圖譜的分析[J];西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);1999年S2期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王金果;涂健;趙德明;;酸化條件對偽狂犬病毒清除效果的檢測[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2010年學(xué)術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(下冊)[C];2010年

2 王卓妍;朱家明;任芙蓉;;噻唑橙對血漿中偽狂犬病毒滅活效果的研究[A];中國輸血協(xié)會第五屆輸血大會論文專集（摘要篇）[C];2010年

3 郝鵬;阿蘭;;PK-15、ST細(xì)胞增殖偽狂犬弱毒效果的比較[A];首屆中國獸藥大會——獸醫(yī)生物制品學(xué)、獸醫(yī)微生物學(xué)學(xué)術(shù)論壇論文集（2008）[C];2008年

4 林春麗;王英;張寶琚;烏日娜;韓小梅;袁智慧;;不同的保存條件對偽狂犬病毒感染力的影響實(shí)驗(yàn)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2010年學(xué)術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(下冊)[C];2010年

5 江云波;方六榮;肖少波;張輝;潘永飛;羅銳;李彬;陳煥春;;表達(dá)豬繁殖與呼吸綜合征病毒兩種膜相關(guān)蛋白重組偽狂犬病毒的免疫反應(yīng)和免疫保護(hù)研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2006學(xué)術(shù)年會論文集（上冊）[C];2006年

6 魏振明;陳霖普;戴朝杰;李怡英;;偽狂犬病毒弱毒株若干生物學(xué)特性（摘要）[A];福建省畜牧獸醫(yī)學(xué)會第七次會員代表大會暨學(xué)術(shù)研討會論文集[C];1994年

7 嚴(yán)琳;牟帆;陳煥春;;重組豬白細(xì)胞介素2在小鼠模型中對偽狂犬病毒弱毒疫苗的佐劑效應(yīng)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物微生態(tài)學(xué)分會第三屆第七次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

8 何雁南;王蕩;徐卓菲;姚清俠;司有輝;錢平;陳煥春;;豬瘟、口蹄疫重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其生物學(xué)特性[A];2006年度學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2006年

9 田志軍;仇華吉;童光志;蔡雪輝;倪健強(qiáng);周艷君;王云峰;;表達(dá)豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白的重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其鑒定[A];全國首屆動物生物技術(shù)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

10 田志軍;仇華吉;倪健強(qiáng);周艷君;蔡雪輝;孔令達(dá);王云峰;童光志;;表達(dá)豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白的重組偽狂犬病毒構(gòu)建及其生物學(xué)特性分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2003年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 宋云峰;豬2型圓環(huán)病毒核酸疫苗及重組偽狂犬病毒二價(jià)基因工程疫苗的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

2 徐建祥;偽狂犬病毒IE180基因反義RNA轉(zhuǎn)基因動物研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2000年

3 宋巖;表達(dá)PRV-vp4基因的重組桿狀病毒和重組偽狂犬病毒的構(gòu)建[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

4 田志軍;表達(dá)PRRSV GP5蛋白的重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其免疫效力的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

5 黃偉堅(jiān);偽狂犬病毒上海株P(guān)K～-缺失株及PK～-gG～-雙缺失株的構(gòu)建及免疫原性初步研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

6 郭洪;偽狂犬病毒IE180和EP0基因的表達(dá)調(diào)控[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

7 謝立蘭;偽狂犬病毒和豬傳染性胃腸炎病毒誘導(dǎo)β干擾素產(chǎn)生的分子機(jī)制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

8 聶浩;弓形蟲—偽狂犬病毒重組二價(jià)基因工程疫苗研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

9 肖少波;偽狂犬病毒gC基因“自殺性”DNA疫苗及VP22蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)的免疫增強(qiáng)效應(yīng)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

10 韓乃君;轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的偽狂犬病毒重組狂犬病疫苗構(gòu)建與免疫研究[D];吉林大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 郭佃磊;檢測抗偽狂犬病毒抗體膠體金免疫層析方法的建立及初步評價(jià)[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 李元果;圈養(yǎng)野生動物偽狂犬病病毒分離、鑒定與基因分析[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 喬小改;基于microRNA表達(dá)譜的偽狂犬病毒及其基因缺失株與PK-15細(xì)胞互作的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 李碧;偽狂犬病毒SA215-T的構(gòu)建與神經(jīng)傳導(dǎo)研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 呂蔚;偽狂犬病毒閩A株單克隆抗體的制備及初步鑒定[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

6 汪招雄;應(yīng)用單抗夾心ELISA檢測偽狂犬病毒和胸膜肺炎放線桿菌毒素ⅢA在巴斯德畢赤酵母中的表達(dá)及檢測方法研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

7 劉俊磊;偽狂犬病毒基因組在潛伏感染中的時(shí)空表達(dá)[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

8 謝西鋒;銀加強(qiáng)膠體金標(biāo)記技術(shù)檢測偽狂犬病毒的研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

9 龍曉婷;偽狂犬病毒在潛伏感染豬體內(nèi)的組織分布[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

10 尹貽鑫;偽狂犬病毒沿神經(jīng)元細(xì)胞軸突運(yùn)輸?shù)某醪窖芯縖D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：偽狂犬病毒SA215-T的構(gòu)建與神經(jīng)傳導(dǎo)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：277087