本文關(guān)鍵詞：偽狂犬病毒SA215-T的構(gòu)建與神經(jīng)傳導研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：偽狂犬病毒具有侵染神經(jīng)的能力,利用這一性質(zhì),該病毒已成功應(yīng)用于對內(nèi)臟、腺體和肌肉的神經(jīng)標記。偽狂犬病毒減毒株神經(jīng)傳導是目前較熱門的研究方向。減毒株通常缺失了gE、gI和US9三個基因,其中g(shù)E和gI是偽狂犬病毒重要的毒力基因,缺失后可使宿主的致死時間更長,而US9的功能主要為協(xié)助gB等必需膜蛋白的順行轉(zhuǎn)運,缺失后的病毒在突觸間將執(zhí)行嚴格的逆向轉(zhuǎn)運。采用Lipofectamine#174; 3000轉(zhuǎn)染試劑,將PP63質(zhì)粒與偽狂犬病毒Fa基因組DNA共轉(zhuǎn)染BHK-21細胞,蝕斑篩選gI/gE/Us9重組缺失病毒,并命名為SA215-T。采用PCR、基因測序、western-blot、電鏡檢查和生長曲線測定重組病毒PRV SA215-T。結(jié)果：western-blot未見SA215-T與gE抗體發(fā)生顯色反應(yīng),其電鏡形態(tài)與野毒無明顯差異,重組病毒與親本毒在細胞中的生長曲線差異不明顯且達到了較高的病毒滴度。為探索三種不同偽狂犬毒株SA215-T,親本毒Fa和Bartha-K61對神經(jīng)的傳導作用,本實驗以小鼠肱二頭肌反射為模型,統(tǒng)計了小鼠攻毒后的存活時間并建立了檢測脊髓偽狂犬病毒分布的免疫組化方法。結(jié)果：Fa小鼠平均存活時間為73.33h,與SA215-T(114.83h)或Bartha-K61 (120.67h)差異極顯著(P0.01)；瀕死小鼠脊髓與大腦經(jīng)PCR和免疫組化檢測,偽狂犬病毒主要位于頸椎C5-C6脊髓并集中分布于脊髓灰質(zhì)運動神經(jīng)元池區(qū)(motomeuron pool),部分C5-C6脊髓經(jīng)PCR檢測為陽性,而免疫組化檢測為陰性。
【關(guān)鍵詞】：偽狂犬病毒 gE/gI基因 重組病毒SA215-T C5-C6脊髓 神經(jīng)傳導
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• ABSTRACT5-6
• 縮略詞表6-9
• 第一章 文獻綜述9-24
• 1 PRV9-22
• 1.1 PRV的概述9
• 1.2 對偽狂犬病毒認識的歷程9-10
• 1.3 PRV的結(jié)構(gòu)分子生物學10-14
• 1.4 束路追蹤技術(shù)14-16
• 1.5 偽狂犬病毒神經(jīng)示蹤16-19
• 1.6 肌肉神經(jīng)調(diào)控19-20
• 1.7 免疫組化方法簡介20-22
• 3 研究的目的與意義22-24
• 第二章 偽狂犬病毒SA215-T的構(gòu)建24-39
• 1 材料24-26
• 1.1 實驗材料24-25
• 1.2 主要儀器25-26
• 2 實驗方法26-33
• 2.1 偽狂犬病毒SA215-T的構(gòu)建26-27
• 2.2 PP63質(zhì)粒的制備27-32
• 2.3 重組病毒形態(tài)學鑒定32-33
• 3. 實驗結(jié)果33-37
• 4. 討論與分析37-39
• 第三章 小鼠肱二頭肌神經(jīng)傳導研究39-50
• 1 主要材料、試劑與儀器39-40
• 1.1 實驗材料39-40
• 1.2 主要儀器40
• 2 試驗方法40-42
• 3 實驗結(jié)果42-47
• 3.1 SA215-T神經(jīng)毒力試驗42-43
• 3.2 PCR鑒定偽狂犬脊髓分布情況43-44
• 3.3 免疫組化條件的確定44-46
• 3.4 免疫組化結(jié)果與PCR結(jié)果比較46-47
• 4 討論47-50
• 全文總結(jié)50-51
• 參考文獻51-57
• 附錄57-58
• 致謝58

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1 劉博濤;宋昌軍;劉翊中;;偽狂犬病毒致病機理的研究進展[J];西北民族大學學報(自然科學版);2008年04期

2 彭蕓蕓;仲曉寧;李春蕾;;偽狂犬病毒載體的研究進展[J];山東畜牧獸醫(yī);2013年05期

3 丁建華,付烈振,王家富,羅滿林,謝小虎,張楚瑜;偽狂犬病毒表達載體的構(gòu)建[J];武漢大學學報(自然科學版);1997年06期

4 李建;曹娟;廖園園;劉潔;朱微;秦偉;秦紅剛;漆世華;謝紅玲;;偽狂犬病毒單克隆抗體的制備和鑒定[J];中國獸藥雜志;2014年03期

5 曹瑞兵;周國棟;周海霞;包晶晶;陳溥言;;豬β干擾素在畢赤酵母中的分泌表達及其對偽狂犬病毒的抑制作用[J];微生物學報;2006年03期

6 黃現(xiàn)青;魏戰(zhàn)勇;高曉平;韓慶功;崔艷紅;;表面活性素體外抗偽狂犬病毒活性研究[J];生物學雜志;2009年04期

7 田志軍;仇華吉;倪健強;周艷君;蔡雪輝;周國輝;王云峰;童光志;;表達豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其生物學特性分析(英文)[J];遺傳學報;2005年12期

8 童武;張青占;鄭浩;劉飛;姜一峰;單同領(lǐng);周艷君;童光志;;免疫后發(fā)病仔豬中偽狂犬病毒的分離和鑒定[J];中國動物傳染病學報;2013年03期

9 汪銘書，，郭萬柱，婁高明，費恩閣，宣華;偽狂犬病毒閩A株基因文庫的構(gòu)建及物理圖譜分析[J];中國病毒學;1994年04期

10 汪銘書,郭萬柱,婁高明,費恩閣,宣華;偽狂犬病毒閩A株基因文庫的構(gòu)建及物理圖譜的分析[J];西南農(nóng)業(yè)學報;1999年S2期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王金果;涂健;趙德明;;酸化條件對偽狂犬病毒清除效果的檢測[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2010年學術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(下冊)[C];2010年

2 王卓妍;朱家明;任芙蓉;;噻唑橙對血漿中偽狂犬病毒滅活效果的研究[A];中國輸血協(xié)會第五屆輸血大會論文專集（摘要篇）[C];2010年

3 郝鵬;阿蘭;;PK-15、ST細胞增殖偽狂犬弱毒效果的比較[A];首屆中國獸藥大會——獸醫(yī)生物制品學、獸醫(yī)微生物學學術(shù)論壇論文集（2008）[C];2008年

4 林春麗;王英;張寶琚;烏日娜;韓小梅;袁智慧;;不同的保存條件對偽狂犬病毒感染力的影響實驗[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2010年學術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(下冊)[C];2010年

5 江云波;方六榮;肖少波;張輝;潘永飛;羅銳;李彬;陳煥春;;表達豬繁殖與呼吸綜合征病毒兩種膜相關(guān)蛋白重組偽狂犬病毒的免疫反應(yīng)和免疫保護研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2006學術(shù)年會論文集（上冊）[C];2006年

6 魏振明;陳霖普;戴朝杰;李怡英;;偽狂犬病毒弱毒株若干生物學特性（摘要）[A];福建省畜牧獸醫(yī)學會第七次會員代表大會暨學術(shù)研討會論文集[C];1994年

7 嚴琳;牟帆;陳煥春;;重組豬白細胞介素2在小鼠模型中對偽狂犬病毒弱毒疫苗的佐劑效應(yīng)[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物微生態(tài)學分會第三屆第七次學術(shù)研討會論文集[C];2004年

8 何雁南;王蕩;徐卓菲;姚清俠;司有輝;錢平;陳煥春;;豬瘟、口蹄疫重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其生物學特性[A];2006年度學術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2006年

9 田志軍;仇華吉;童光志;蔡雪輝;倪健強;周艷君;王云峰;;表達豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白的重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其鑒定[A];全國首屆動物生物技術(shù)學術(shù)研討會論文集[C];2004年

10 田志軍;仇華吉;倪健強;周艷君;蔡雪輝;孔令達;王云峰;童光志;;表達豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白的重組偽狂犬病毒構(gòu)建及其生物學特性分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會成立20周年慶典暨第十次學術(shù)研討會論文集（上）[C];2003年

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1 宋云峰;豬2型圓環(huán)病毒核酸疫苗及重組偽狂犬病毒二價基因工程疫苗的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2006年

2 徐建祥;偽狂犬病毒IE180基因反義RNA轉(zhuǎn)基因動物研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2000年

3 宋巖;表達PRV-vp4基因的重組桿狀病毒和重組偽狂犬病毒的構(gòu)建[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2006年

4 田志軍;表達PRRSV GP5蛋白的重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其免疫效力的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2005年

5 黃偉堅;偽狂犬病毒上海株P(guān)K～-缺失株及PK～-gG～-雙缺失株的構(gòu)建及免疫原性初步研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2006年

6 郭洪;偽狂犬病毒IE180和EP0基因的表達調(diào)控[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2008年

7 謝立蘭;偽狂犬病毒和豬傳染性胃腸炎病毒誘導β干擾素產(chǎn)生的分子機制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2011年

8 聶浩;弓形蟲—偽狂犬病毒重組二價基因工程疫苗研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2010年

9 肖少波;偽狂犬病毒gC基因“自殺性”DNA疫苗及VP22蛋白轉(zhuǎn)導的免疫增強效應(yīng)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2004年

10 韓乃君;轉(zhuǎn)座子介導的偽狂犬病毒重組狂犬病疫苗構(gòu)建與免疫研究[D];吉林大學;2012年

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1 郭佃磊;檢測抗偽狂犬病毒抗體膠體金免疫層析方法的建立及初步評價[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

2 李元果;圈養(yǎng)野生動物偽狂犬病病毒分離、鑒定與基因分析[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2015年

3 喬小改;基于microRNA表達譜的偽狂犬病毒及其基因缺失株與PK-15細胞互作的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2015年

4 李碧;偽狂犬病毒SA215-T的構(gòu)建與神經(jīng)傳導研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2015年

5 呂蔚;偽狂犬病毒閩A株單克隆抗體的制備及初步鑒定[D];河北農(nóng)業(yè)大學;2009年

6 汪招雄;應(yīng)用單抗夾心ELISA檢測偽狂犬病毒和胸膜肺炎放線桿菌毒素ⅢA在巴斯德畢赤酵母中的表達及檢測方法研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2005年

7 劉俊磊;偽狂犬病毒基因組在潛伏感染中的時空表達[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2007年

8 謝西鋒;銀加強膠體金標記技術(shù)檢測偽狂犬病毒的研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學;2001年

9 龍曉婷;偽狂犬病毒在潛伏感染豬體內(nèi)的組織分布[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2007年

10 尹貽鑫;偽狂犬病毒沿神經(jīng)元細胞軸突運輸?shù)某醪窖芯縖D];華中農(nóng)業(yè)大學;2013年

  本文關(guān)鍵詞：偽狂犬病毒SA215-T的構(gòu)建與神經(jīng)傳導研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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