本文關鍵詞：遼寧絨山羊POMP基因在毛囊發(fā)育中的表達研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：在本實驗室前期構建的遼寧絨山羊毛囊興盛期cDNA質粒文庫中,經拼接測通后得到了遼寧絨山羊proteasome maturation protein(POMP)基因序列,旨在研究遼寧絨山羊PMOP基因在毛囊發(fā)育與絨毛生長中的作用。首先對POMP基因進行生物信息學分析,然后利用原位雜交技術對其進行定位分析;RT-PCR檢測POMP基因在心、肝、腎、肺、脾、皮膚中表達信號;Real Time PCR檢測該基因在毛囊發(fā)育的三個階段的表達以及加入外源褪黑激素和FGF5以及IGF-1三種因子對遼寧絨山羊成纖維細胞進行培養(yǎng)后細胞中POMP基因的表達量變化。實驗結果如下:生物信息學分析表明,遼寧絨山羊POMP基因全長1278bp,編碼141個氨基酸,該蛋白基因與牛屬同源性最高;原位雜交結果顯示,在初、次級毛囊中,POMP在內根鞘中表達強烈,在皮質層、角質層以及髓質中也存在表達,外根鞘中未出現表達信號;RT-PCR顯示,POMP基因在心、肝、腎、肺、脾、皮膚中均有表達;Real Time PCR檢測結果顯示,在遼寧絨山羊絨毛生長興盛期和退行期,POMP基因次級毛囊中的表達量均高于初級毛囊中的表達量;外源褪黑激素、FGF5以及IGF-5細胞因子分別處理成纖維細胞結果顯示,分別加入外源褪黑激素和IGF-1后POMP基因表達量低于對照組,加入10^(-5)g/L外源FGF5在處理羊成纖維細胞24小時后,POMP基因的表達量高于對照組。此外,褪黑激素和FGF5協同處理細胞后POMP的表達量低于對照組,褪黑激素與IGF-1協同作用于成纖維細胞后POMP基因表達量高于對照組。結論:POMP基因普遍存在于遼寧絨山羊各組織器官中,且參與調控初、次級毛囊發(fā)育的過程;外源褪黑激素和IGF-1能夠抑制POMP基因的表達;10^(-5)g/L外源FGF5作用于羊成纖維細胞24小時,可提高POMP基因的表達;褪黑激素和FGF5協同可抑制POMP基因的表達,而褪黑激素與IGF-1協同作用可提高該基因的表達量。本實驗為進一步研究POMP在遼寧絨山羊絨毛生長中的遺傳作用機制提供了一定的理論基礎。
【關鍵詞】：POMP基因 信息學分析 原位雜交 熒光定量 MT FGF5 IGF-1
【學位授予單位】：遼寧師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S827
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 1 研究背景8-11
• 1.1 蛋白酶成熟蛋白（Proteasome maturation protein，POMP）8
• 1.2 遼寧絨山羊8-9
• 1.3 褪黑激素（MT）9
• 1.4 成纖維細胞因子FGF-59
• 1.5 類胰島素細胞因子（IGF-1）9-10
• 1.6 研究目的及意義10-11
• 2 材料與方法11-20
• 2.1 實驗材料11-12
• 2.1.1 樣本采集11
• 2.1.2 實驗試劑及儀器11-12
• 2.2 實驗方法12-20
• 2.2.1 POMP基因信息學分析12-13
• 2.2.2 遼寧絨山羊初、次級毛囊的分離及其總RNA提取13-14
• 2.2.3 遼寧絨山羊原代皮膚細胞培養(yǎng)14-16
• 2.2.4 半定量RT-PCR16
• 2.2.5 實時定量PCR16-17
• 2.2.6 原位雜交17-18
• 2.2.7 褪黑激素、FGF5和IGF-5 分別處理羊成纖維細胞18-19
• 2.2.8 MT與IGF-1(MT與FGF5)協同培養(yǎng)羊成纖維細胞19
• 2.2.9 數據分析與統計19-20
• 3 實驗結果20-39
• 3.1 蛋白酶成熟蛋白的物信息學分析20-26
• 3.2 RNA提取結果26-27
• 3.3 RT-PCR結果27-28
• 3.4 實時熒光定量PCR實驗結果28-29
• 3.5 原位雜交結果29-30
• 3.6 褪黑激素處理羊體側成纖維細胞30-32
• 3.7 FGF5處理羊體側成纖維細胞32-34
• 3.8 IGF-1 處理羊體側成纖維細胞34-37
• 3.9 褪黑激素與FGF5協同處理成纖維細胞37
• 3.10 褪黑激素與IGF-1 協同處理成纖維細胞37-39
• 4 討論39-41
• 結論41-42
• 參考文獻42-46
• 附錄A β-Actin與POMP基因在初、次級毛囊中的擴增曲線和溶解曲線46-47
• 附錄B β-Actin與POMP基因在褪黑激素處理皮膚成纖維細胞中的擴增曲線和溶解曲線47-51
• 附錄C β-Actin與POMP基因在FGF5處理皮膚成纖維細胞中的擴增曲線和溶解曲線51-56
• 附錄D β-Actin與POMP基因在IGF-1 處理皮膚成纖維細胞中的擴增曲線和溶解曲線56-61
• 附錄E β-Actin與POMP基因在MT與FGF5協同處理皮膚成纖維細胞24小時中的擴增曲線和溶解曲線61-62
• 附錄F β-Actin與POMP基因在MT與IGF-1 協同處理皮膚成纖維細胞24小時中的擴增曲線和溶解曲線62-63
• 致謝63

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