本文關(guān)鍵詞：南方根結(jié)線蟲被穿刺巴斯德芽菌感染初期的轉(zhuǎn)錄組分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：根結(jié)線蟲是一類分布廣泛的植物寄生線蟲,主要包括南方根結(jié)線蟲、花生根結(jié)線蟲、北方根結(jié)線蟲以及爪哇根結(jié)線蟲這四類,對農(nóng)作物的危害非常嚴重。在我國分布最廣危害最大的是南方根結(jié)線蟲。穿刺巴斯德芽菌是植物根結(jié)線蟲的一種專性寄生菌,它能夠?qū)Ｐ晕皆诟Y(jié)線蟲的表面進入線蟲體內(nèi)生長發(fā)育,產(chǎn)生的大量菌體奪取線蟲的營養(yǎng),導(dǎo)致根結(jié)線蟲營養(yǎng)不良、發(fā)育異常從而降低線蟲的蟲口密度。它是目前公認的防治根結(jié)線蟲病的有效生防菌。 本論文在植物體外用穿刺巴斯德芽菌的孢子吸附南方根結(jié)線蟲的二齡幼蟲。觀察南方根結(jié)線蟲的死亡率情況以及吸附初期根結(jié)線蟲的轉(zhuǎn)錄組變化。探討穿刺巴斯德芽菌感染南方根結(jié)線蟲初期對線蟲基因表達的影響。首先我們用單卵塊純化法純化從野外采集的根結(jié)線蟲,經(jīng)過分子生物學(xué)方法鑒定,確認純化的根結(jié)線蟲為南方根結(jié)線蟲。接著在植物體外用穿刺巴斯德芽菌的孢子吸附南方根結(jié)線蟲的二齡幼蟲,觀察線蟲的死亡率變化。并在感染穿刺巴斯德芽菌的第三天提取南方根結(jié)線蟲的總RNA進行轉(zhuǎn)錄組測序,比較差異表達的基因以及相關(guān)的調(diào)控通路,并從上調(diào)和下調(diào)的基因中各隨機挑取3個基因進行實時熒光定量PCR,驗證轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)感染穿刺巴斯德芽菌后南方根結(jié)線蟲的存活率降低。轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果表明,吸附了穿刺巴斯德芽菌的根結(jié)線蟲與對照組相比總共有445個基因發(fā)生變化,其中有406個基因表達上調(diào),有39個基因表達下調(diào)。通過KEGG數(shù)據(jù)庫的分析和比對發(fā)現(xiàn)上調(diào)的差異表達基因顯著富集在不飽和脂肪酸生物合成這條信號通路上,下調(diào)的差異表達基因顯著富集在異源物質(zhì)代謝的細胞色素P450代謝通路上。實時熒光定量PCR驗證結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組測序的結(jié)果一致。 穿刺巴斯德芽菌吸附南方根結(jié)線蟲后能夠降低線蟲的存活率。轉(zhuǎn)錄組測序篩選出的上調(diào)的差異表達基因主要富集在不飽和脂肪酸生物合成代謝途徑上,這條代謝途徑的激活能提高線蟲的先天免疫功能,有助于增強南方根結(jié)線蟲抵抗穿刺巴斯德芽菌的侵染。然而下調(diào)的差異表達基因顯著富集在異源物質(zhì)代謝的細胞色素P450代謝途徑上,這提示我們穿刺巴斯德芽菌為了實現(xiàn)對線蟲的有效侵襲和共生的目的,可能在侵染的初期通過降低根結(jié)線蟲異源物質(zhì)代謝的細胞色素P450代謝通路上基因的表達,來抑制和干擾根結(jié)線蟲的解毒和先天免疫機制。
【關(guān)鍵詞】：南方根結(jié)線蟲 穿刺巴斯德芽菌 存活率 轉(zhuǎn)錄組測序
【學(xué)位授予單位】：海南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S432.45;S476
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 1 前言9-19
• 1.1 根結(jié)線蟲的研究概況9-14
• 1.1.1 根結(jié)線蟲及其危害9-10
• 1.1.2 根結(jié)線蟲的防治10-14
• 1.2 穿刺巴斯德芽菌的研究進展14-16
• 1.2.1 穿刺巴斯德芽菌14
• 1.2.2 穿刺巴斯德芽菌與根結(jié)線蟲防治14-16
• 1.3 轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)16-18
• 1.3.1 轉(zhuǎn)錄組測序的基本原理16
• 1.3.2 轉(zhuǎn)錄組測序的基本步驟16-17
• 1.3.3 轉(zhuǎn)錄組測序的主要用途17
• 1.3.4 轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)的意義17-18
• 1.4 本研究的目的和意義18-19
• 2 材料和方法19-28
• 2.1 實驗材料19-22
• 2.1.1 主要藥品和試劑19-20
• 2.1.2 主要儀器和設(shè)備20-21
• 2.1.3 本研究所用引物21-22
• 2.2 實驗方法22-27
• 2.2.1 穿刺巴斯德芽菌的收集22
• 2.2.2 植物材料的準備和樣品采集22
• 2.2.3 根結(jié)線蟲的純化和擴大培養(yǎng)22
• 2.2.4 南方根結(jié)線蟲的鑒定22-23
• 2.2.5 穿刺巴斯德芽菌吸附南方根結(jié)線蟲二齡幼蟲23-24
• 2.2.6 根結(jié)線蟲總RNA的提取24
• 2.2.7 根結(jié)線蟲壽命相關(guān)基因的實時熒光定量PCR檢測24-25
• 2.2.8 用穿刺巴斯德芽菌吸附南方根結(jié)線蟲25
• 2.2.9 南方根結(jié)線蟲二齡幼蟲總RNA的提取及質(zhì)量鑒定25-26
• 2.2.10 南方根結(jié)線蟲被穿刺巴斯德芽菌感染初期的轉(zhuǎn)錄組測序26-27
• 2.2.11 線蟲差異基因的Real Time PCR驗證27
• 2.3 數(shù)據(jù)分析27-28
• 3 結(jié)果與分析28-38
• 3.1 南方根結(jié)線蟲的鑒定28
• 3.2 穿刺巴斯德芽菌對南方根結(jié)線蟲存活率的影響28-30
• 3.3 穿刺巴斯德芽菌對南方根結(jié)線蟲壽命相關(guān)基因表達的影響30-32
• 3.4 南方根結(jié)線蟲二齡幼蟲總RNA提取結(jié)果32-33
• 3.5 轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果33-34
• 3.6 差異表達基因的確定及相關(guān)代謝通路的分析34-36
• 3.7 Real Time PCR驗證結(jié)果36-38
• 4 討論38-41
• 4.1 穿刺巴斯德芽菌對南方根結(jié)線蟲存活率影響38
• 4.2 線蟲免疫系統(tǒng)的保守性38-39
• 4.3 不飽和脂肪酸生物合成途徑39
• 4.4 異源物質(zhì)代謝的細胞色素P450代謝通路39-40
• 4.5 待研究的內(nèi)容40-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-48
• 附錄48-63
• 致謝63

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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7 陳立杰;魏峰;段玉璽;白春明;霍t焥

本文編號：272978