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水稻維管束鞘細(xì)胞葉綠體積累突變體的篩選及鑒定

發(fā)布時(shí)間:2021-06-30 06:40
  水稻是世界三大糧食作物之一,也是亞洲最重要的糧食作物,水稻高光效育種研究已經(jīng)成為了世界許多研究機(jī)構(gòu)的重要課題。傳統(tǒng)的育種方法已經(jīng)很難使水稻的增產(chǎn)達(dá)到理想的效果,隨著基因組學(xué)的發(fā)展,人們把方向轉(zhuǎn)到轉(zhuǎn)C4基因水稻的創(chuàng)制中。但是,轉(zhuǎn)C4水稻也表現(xiàn)出其局限性。大量的證據(jù)已經(jīng)表明,許多C3植物中存在C4途徑,從C3植物中篩選類C4結(jié)構(gòu)的突變類型是一種比較合理的方法。本實(shí)驗(yàn)從水稻T-DNA激活標(biāo)簽插入突變體庫中進(jìn)行維管束鞘細(xì)胞葉綠體積累突變體的大規(guī)模篩選,并對(duì)突變體進(jìn)行了生物學(xué)基礎(chǔ)分析以及T-DNA插入位點(diǎn)的初步功能預(yù)測(cè)。主要結(jié)果如下:(1)從8600份水稻激活標(biāo)簽系中篩選出10份維管束鞘細(xì)胞葉綠體積累突變體株系,并在其中2份突變株中還發(fā)現(xiàn)了窄葉(A263-4)、卷葉(A5382-1)的表型;(2)突變體生理指標(biāo)分析:農(nóng)藝性狀統(tǒng)計(jì)表明,突變體產(chǎn)量下降,株高降低,結(jié)實(shí)率下降;在苗期,突變體葉綠素含量高于野生型,至分蘗期和成熟期,差距逐漸減小;野生型的光合速率、氣孔導(dǎo)度、蒸騰速率明顯高于突變體,胞間CO2濃度值較低,突變體的總體生長狀況弱于野生型;光響應(yīng)曲線表明,突變體的光飽和點(diǎn)高于野生型,呼吸作用弱于野生型。PEPCase和RuBPase活性測(cè)定表明,突變體的PEPCase活性普遍升高,而RuBPase活性降低。葉片可溶性蛋白含量有所降低。(3)利用Tail-PCR對(duì)10份突變體進(jìn)行側(cè)翼序列的獲取,初步得到三個(gè)有效T-DNA插入位點(diǎn),并在插入位點(diǎn)12 000bp的范圍內(nèi)發(fā)現(xiàn)了三個(gè)可能的功能基因(Os7g23530、Os09g15820、Os09g15810)。
【學(xué)位授予單位】:河北科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類號(hào)】:S511
文章目錄
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 水稻育種現(xiàn)狀
    1.2 高光效水稻培育研究進(jìn)展
        1.2.1 株型選育
        1.2.2 C_3植物中篩選類C_4途徑突變體
        1.2.3 引入C_4光合酶基因
    1.3 轉(zhuǎn)C_4水稻存在的問題
    1.4 類C_4結(jié)構(gòu)水稻篩選的意義
        1.4.1 C_4植物光合作用的優(yōu)勢(shì)
        1.4.2 篩選水稻類C_4突變體的依據(jù)
    1.5 C_4途徑表達(dá)模式的選擇
    1.6 激活標(biāo)簽插入技術(shù)構(gòu)建水稻突變體庫
    1.7 課題的研究內(nèi)容和意義
        1.7.1 研究內(nèi)容
        1.7.2 課題意義
第2章 水稻維管束鞘細(xì)胞葉綠體積累突變體的篩選
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 水稻突變體組培室種植
        2.3.2 突變體篩選
    2.4 結(jié)果分析
        2.4.1 突變體的種植結(jié)果
        2.4.2 水稻維管束鞘細(xì)胞葉綠體發(fā)生突變體的篩選結(jié)果統(tǒng)計(jì)
    2.5 本章小結(jié)
第3章 水稻維管束鞘細(xì)胞葉綠體積累突變體的生理指標(biāo)分析
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 突變體與野生型主要農(nóng)藝性狀的調(diào)查統(tǒng)計(jì)
        3.3.2 葉綠素及類胡蘿卜素含量測(cè)定
        3.3.3 C_3及C_4關(guān)鍵酶活性測(cè)定
        3.3.4 光合參數(shù)及光響應(yīng)曲線測(cè)定
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 突變體與野生型主要農(nóng)藝性狀的統(tǒng)計(jì)結(jié)果
        3.4.2 葉綠素及類胡蘿卜素含量測(cè)定結(jié)果
        3.4.3 C_3與C_4關(guān)鍵光合酶活性測(cè)定結(jié)果
        3.4.4 光合參數(shù)測(cè)定結(jié)果
    3.5 本章小結(jié)
第4章 突變體側(cè)翼序列的獲得與分析
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 C_TAB法提取水稻基因組DNA
        4.3.2 側(cè)翼序列的獲得
        4.3.3 目的片段的膠回收
        4.3.4 T-DNA插入位點(diǎn)候選基因預(yù)測(cè)
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 DNA提取結(jié)果
        4.4.2 TAIL-PC_R結(jié)果
        4.4.3 測(cè)序結(jié)果分析
        4.4.4 定位區(qū)間功能基因預(yù)測(cè)
    4.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間所發(fā)表的論文及成果
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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1 張桂芳;丁在松;;C_3植物的C_4光合途徑[J];生物學(xué)通報(bào);2015年03期

2 李燕群;高家旭;肖云華;李秀蘭;蒲翔;孫昌輝;王平榮;鄧曉建;;水稻ygl80黃綠葉突變體的遺傳分析與目標(biāo)基因精細(xì)定位[J];作物學(xué)報(bào);2014年04期



本文編號(hào):2032213

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