本文選題：斑節(jié)對蝦 + 幾丁質(zhì)酶�。� 參考：《上海海洋大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：斑節(jié)對蝦(Penaeus monodon)是世界上重要的對蝦養(yǎng)殖品種之一。蛻殼(蛻皮)伴隨著斑節(jié)對蝦整個生活史,與其幼體的變態(tài)發(fā)育,幼蝦的生長以及成蝦的交配息息相關(guān)。在蛻皮過程中發(fā)揮相關(guān)作用的基因很多,例如蛻皮抑制激素(MIH),高血糖激素(CHH)等。本研究中的幾丁質(zhì)酶基因也是蛻皮過程中發(fā)揮重要作用的基因,其功能涉及到蛻殼、幾丁質(zhì)食物的消化、免疫應(yīng)答以及圍食膜的消化等。幾丁質(zhì)酶基因在甲殼動物中的報道不多,在斑節(jié)對蝦僅報道過2次,因此,開展幾丁質(zhì)酶基因的相關(guān)研究,有助于更好的了解蛻皮機理,更清晰的了解斑節(jié)對蝦的生長過程,為將來的分子輔助育種提供理論支撐。本研究以本實驗室測得的肝胰腺轉(zhuǎn)錄組(未發(fā)表)中幾丁質(zhì)酶基因序列片段,通過RACE技術(shù)克隆出了斑節(jié)對蝦3個幾丁質(zhì)酶基因的全長序列,命名為PmChi-2、PmChi-4和PmChi-5(登錄號分別為:KX610684、KY210138和KY865407),cDNA全長分別為2050 bp、2178 bp和2860 bp,開放閱讀框分別為1587 bp、1815 bp和1731 bp,分別編碼528、604和576個氨基酸。實時熒光定量PCR(qRT-PCR)顯示PmChi-2在斑節(jié)對蝦9個檢測組織中,表皮的表達量最高,胃和鰓次之,眼柄和胸神經(jīng)節(jié)表達量很低,。在蛻皮各期(A、C、D以及E期)的研究中發(fā)現(xiàn)PmChi-2在鰓中A期的表達最高,E期最低;胃和表皮中D期最高,E期最低。在幼體不同發(fā)育階段,PmChi-2基因從無節(jié)幼體一直到糠蝦幼體第二期,表達量沒有顯著變化,到糠蝦幼體第三期,表達量顯著升高,且達到最高的表達水平,緊接著仔蝦第一期又顯著下降,之后表達水平處于較低的水平。據(jù)此推測PmChi-2可能在斑節(jié)對蝦幼體的蛻皮以及幼體的變態(tài)發(fā)揮重要作用。PmChi-4在斑節(jié)對蝦不同組織中肝胰腺中表達最高,腸和胃次之,其余組織表達量很低。在蛻皮各期的研究中發(fā)現(xiàn)PmChi-4在胃中相對表達量變化不顯著,而腸和肝胰腺中表達量變化呈現(xiàn)顯著性差異,并且表達模式也很相似。腸和肝胰腺在蛻皮周期中表達量最高都是出現(xiàn)在E期,但腸的最低表達量出現(xiàn)在D期,而肝胰腺的最低表達量出現(xiàn)在C期。在幼體不同發(fā)育階段,PmChi-4基因從無節(jié)幼體一直到糠蝦幼體第二期,PmChi-4的表達量出現(xiàn)了一定的波動,但是沒有顯著變化,到糠蝦幼體第三期,表達量顯著升高,且達到最高的表達水平,在糠蝦幼體第三期后PmChi-4的表達量也存在一定的波動性,但變化依然不顯著。在注射陽性菌S.agalactiae和陰性菌V.harveyi之后,選取斑節(jié)對蝦的肝胰腺和鰓進行PmChi-4表達量的變化的檢測,結(jié)果顯示在注射S.agalactiae和V.harveyi后的幾個小時內(nèi)與對照組相比肝胰腺和鰓中都出現(xiàn)了顯著上調(diào),之后下調(diào)到比較低的水平,并持續(xù)保持這種低水平。在氨氮應(yīng)激的下,選取斑節(jié)對蝦的肝胰腺和鰓進行PmChi-4表達量的變化的檢測,與對照組相比較,不管是高氨氮還是低氨氮,在肝胰腺和鰓中的表達量都存在波動,并且都表現(xiàn)為應(yīng)激之后顯著下調(diào),之后保持較低的表達水平。依據(jù)上述一系列實驗推測PmChi-4可能與斑節(jié)對蝦圍食膜的降解、幾丁質(zhì)食物的消化、幼體的變態(tài)發(fā)育以及免疫應(yīng)答有關(guān)。PmChi-5在斑節(jié)對蝦蛻皮周期中不同組織中肝胰腺和鰓中表達水平最高,眼柄和表皮次之,心臟、腸、胃、肌肉,胸神經(jīng)中表達水平比較低。在肝胰腺、眼柄、鰓以及表皮蛻皮各期研究中發(fā)現(xiàn)PmChi-5在這4個組織中的變化模式都不盡相同。在肝胰腺中,PmChi-5表達量最高出現(xiàn)在C期,最低出現(xiàn)在A期;在眼柄中,最高出現(xiàn)在C期,最低出現(xiàn)在D期;在鰓中,最高出現(xiàn)在C期,最低出現(xiàn)在A期;在表皮中,最高出現(xiàn)在D期,最低出現(xiàn)在A期。PmChi-5基因在幼體不同發(fā)育階段從無節(jié)幼體一直到糠蝦幼體第二期,表達量一直保持著較低的水平,到糠蝦幼體第三期,表達量顯著升高,且達到最高的表達水平,之后保持著較低的水平。在注射S.agalactiae和V.harveyi之后,選取斑節(jié)對蝦的肝胰腺和鰓進行PmChi-5表達量的變化的檢測,結(jié)果顯示在注射S.agalactiae后肝胰腺和鰓與對照組相比出現(xiàn)顯著上調(diào),甚至出現(xiàn)兩個峰值。在氨氮應(yīng)激的下,選取斑節(jié)對蝦的肝胰腺和鰓進行PmChi-5表達量的變化的檢測,與對照組相比較,不管是高氨氮還是低氨氮,在肝胰腺和鰓中的表達量都存在波動,整體的變化趨勢為先升高后降低。依據(jù)上述一系列的實驗推測PmChi-5可能參與斑節(jié)對蝦的蛻皮、幼體的變態(tài)發(fā)育以及免疫應(yīng)答。
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【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S917.4

【參考文獻】

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本文編號：1744560